食品金黃色葡萄球菌定量檢測質量控制研究

◎ 張麗娜

（四川省雅安市食品藥品檢驗所，四川 雅安 625000）

金黃色葡萄球菌，也稱“金葡菌”，是人類感染疾病的主要致病菌，所以國家標準對各類食品金黃色葡萄球菌的控制有明確說明。作為食品微生物檢驗人員，提高金黃色葡萄球菌的檢測能力，抓住質量控制關鍵點至關重要。

1 材料與設備

實驗對象：雅安市29個品種預包裝食品樣品。

菌株：金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]，購自上海魯微科技有限公司。

培養基及材料：Baird-Parker瓊脂平板（批號：3106026）、BairdParker瓊脂成品平板（批號：G0161Y）、腦心浸出物肉湯（BHI）（批號：3106063）、血平板、凍干血漿均購自廣東環凱微生物科技有限公司。

儀器設備：VITEK 2 COMPACT（全自動微生物分析系統）儀，梅里埃診斷產品（上海）有限公司；BSC-1500IIA2-X型生物安全柜，濟南鑫貝西生物技術有限公司；SPX-150型生化培養箱，上海迅博實業有限公司醫療設備廠；BKQP系列壓力蒸汽滅菌器，臨龍江壓力容器制造有限公司；HBM-400B型無菌均質器，天津市恒奧科技發展有限公司；BK-FL熒光顯微鏡，重慶奧特光學儀器有限責任公司。

2 操作方法

2.1 樣品的稀釋及培養

嚴格按照GB 4789.10-2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌定量檢驗》平板計數法操作。

2.2 初步鑒定

染色鏡檢：挑取Baird-Parker平板上可疑單個菌落進行革蘭氏染色，鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭陽性球菌，無芽孢排列呈不規則的葡萄狀，亦可呈單個、成雙或短鏈狀排列。

血漿凝固酶試驗：嚴格按照GB 4789.10-2016中5.5.2操作，同時做陰性和陽性對照。

血平板：同時劃線接種到血平板（36±1）℃培養18～24 h后觀察菌落形態，金黃色葡萄球菌菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈。

2.3 鑒定復核

所有可疑的革蘭氏陽性菌，都選取新鮮的培養物制備菌懸液上VITEK 2 COMPACT全自動微生物分析系統鑒定。

3 結果

29個品種在Baird-Parker平板上有可疑菌落4個，革蘭氏陽性球菌2種，血漿凝固酶試驗陽性0份，同時在血平板上無菌落生長，結果顯示這29個品種的預包裝食品全部符合標準要求。

4 討論

4.1 實驗過程中的質量控制

（1）臨用現制的Baird-Parker平板在制備時溫度不宜超過45 ℃，以防冷凝水過多，平板制備好后可以在生物安全柜里將蓋子斜靠在邊上，等冷凝水揮，發也可提前制備好后置于36 ℃培養箱中預培養1 d，這樣既可以除去多余的水分，又可以做到無菌培養。

（2）稀釋液應滅菌后再分裝，以免先分裝再滅菌帶來的體積誤差。

（3）進行梯度稀釋時，要準確吸取毫升量，稀釋菌液要充分混合，第一步溶解菌球和奶粉產品時先可以采用拍擊均質器混勻，后續梯度稀釋可以用渦旋儀進行混勻[1]。另外，如果是冷藏后的檢品，樣品檢驗時，應等待樣品達到室溫后再添加稀釋液，因為溫度迅速上升會導致細胞破裂，影響檢測結果。

（4）Baird-Parker平板涂布時，L涂布棒應均勻涂布整個平板，注意不要觸及平板邊緣，避免涂到平板邊緣造成菌落蔓延生長，并造成最后的計數偏低的情況。另外，經過多次試驗，建議在計數時采用Baird-Parker成品培養基，因為成品培養基更平整、光滑、干燥，更有利于稀釋液的吸收。

（5）觀察時間需要逐步進行，避免雜菌或菌落蔓延造成計數的偏差。因為如果樣品中存在變形桿菌污染，到48 h觀察結果時，金黃色葡萄球菌的菌落被變形桿菌的擴散生長而覆蓋，所以，培養到24 h時先觀察一次并計數，36 h觀察，直至48 h再觀察計數。

（6）在鑒定復核時，選取新鮮的培養物制備適宜濃度的菌懸液后再上VITEK 2 COMPACT（全自動微生物分析系統）儀器進行鑒定試驗。

4.2 標準菌株的質量控制

標準菌株在評價檢驗結果的可靠性及檢驗過程的質量控制中發揮著不可替代的作用[2]。金黃色葡萄球菌的血漿凝固酶試驗原理為病原性葡萄球菌能產生血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原變為不溶性纖維蛋白，附于細菌表面，生成凝塊[3]。所以，在做樣的同時帶著以陽性（金黃色葡萄球菌）和陰性（表皮葡萄球菌）菌株的肉湯培養物對照試驗更能清楚地判定陰陽性。

4.3 培養基及試劑的質量控制

培養基是微生物試驗的基礎，直接影響微生物試驗結果，使用前必須進行培養基適應性試驗，待其選擇性、生長性和特異性等質控指標達標后方可用于檢驗。另外，關鍵試劑也是影響檢驗結果的一個重要因素。關鍵試劑包括革蘭氏染色液、凍干血漿和凝固酶血漿試劑等。凝固酶血漿試劑應每次與表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌做陰陽對照[4]，此外還應注意所用試劑和成品培養基在貯存時的避光、冷藏等要求，保證試劑和培養基的穩定性。

4.4 人為因素的質量控制

檢測人員作為食品微生物檢驗工作的主體，在食品微生物檢驗質量控制工作中起著重要的作用。因此，檢測人員應有較強的責任感和使命感，認真把控實驗中的每個環節，熟悉國家相關標準規定并嚴格遵照執行，更好地控制食品微生物的檢驗質量。

4.5 硬件設施的質量控制

食品微生物檢測中，實驗儀器是必備的硬件設備。因此，應嚴格按照本單位制定的儀器操作規程及維護規程，在每次使用完詳細填寫記錄，保證檢測結果的真實性、準確性和可溯源性。

5 結語

本文旨在總結金黃色葡萄球菌定量檢測時的質量控制關鍵點，并提出建議，從而提高檢驗人員的檢測能力，提升實驗室檢測水平。

[1]陳學強，周 浩，劉 華，等.金黃色葡萄球菌定量檢測人員比對和質量控制[J].中國衛生檢驗雜志，2017，4（27）：1063-1064.

[2]楊豐旭.標準菌株在食品微生物檢驗中的重要作用[J].食品安全導刊，2017（2）：96.

[3]石琳，李學興，梁偉，等.100份食品樣品中金黃色葡萄球菌的檢測情況[J].食品安全導刊，2017（1）：139-140.

[4]袁 平，馬群飛，楊毓環，等.金黃色葡萄球菌定量檢測實驗室間比對結果分析[J].中國衛生檢驗雜志，2012，10（22）：2506-2507.