適宜四川達州地區栽培的平菇引種試驗

孫傳齊 徐建俊 李 彪 趙 輝 馬 潔 徐 德 周 勇

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適宜四川達州地區栽培的平菇引種試驗

孫傳齊1徐建俊1李 彪1趙 輝1馬 潔1徐 德1周 勇2

（1. 達州市農業科學研究院，四川 達州 635000；2. 達州市通川區蔬菜研究所，四川 達州 635000）

為了篩選適宜達州地區栽培的平菇優良菌株，對當地主栽品種及引進菌株共13個進行品比試驗，經過對菌絲生長速度、子實體產量和生物學轉化率的測定分析，初步篩選出性狀優良的菌株P1、P5和P13。對3個菌株進行rDNA-ITS基因鑒定的結果顯示，3個菌株的基因片段存在差異，排除同物異名和同名異物菌株，可供達州地區應用推廣。

平菇；優良菌株；品比試驗；篩選

平菇（）是一種世界性的食用菌，在我國分布極廣[1]，其中廣溫平菇又是平菇中栽培量最大且暢銷不衰的品種，具有栽培品種優良，栽培技術成熟，集中于秋冬季栽培，消費群體穩定等特點。近幾年來，四川省達州市出現平菇生產不出菇或不轉潮現象，極大地挫傷菇農栽培積極性。調查發現，主要是由菇農自行引種，品種混雜且長期無性繁殖，菌株種性退化造成的[2]。解決這一問題的根本措施是引進優良菌株。但菌株的表現性狀受環境條件影響較大，同一品種在不同地域的表現有很大差異[3]。筆者自2015年來先后從國內食用菌科研單位引進平菇菌株20個，2017年對其中表現較好的13個菌株進行了品比試驗研究，初步篩選出適宜達州市栽培的廣溫平菇優良菌株。

1 材料與方法

1.1 供試菌株及編號

以當地主栽培品種P7為對照，供試菌株共13個（表1）。各參試菌株經同時復壯后，擴大培養，采用相同的菌種等級進行品比試驗。

表1 菌株名稱及來源

1.2 供試培養基

①母種培養基：PDA培養基，馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，加水1 000 mL，pH自然。②原種和栽培種培養基：棉籽殼40%，雜木屑40%，麩皮16%，石灰2%，石膏1%，過磷酸鈣1%，含水量65%。③出菇培養料：雜木屑73%，棉籽殼12%，麩皮12%，石灰2%，石膏1%，含水量65%。

1.3 試驗方法

（1）菌種制作。分母種、原種、栽培種三級制種，培養基按常規方法配制、滅菌，接種后置于25～28 ℃溫度下培養[4]。

（2）菌袋制作。根據配方比例及制袋量分別稱取各種原料。雜木屑和棉籽殼提前預濕，常規方法拌料，培養料含水量均控制在65%左右，pH 8.0～8.5，使用規格為22×38（cm）的聚乙烯筒袋裝料，每袋折合干料2.0 kg，100 ℃常壓滅菌10～12 h。冷卻后（28 ℃以下）按無菌操作規程兩頭接種。每個菌株接種100袋，重復3次。

（3）菌絲體培養。接種后將各菌株菌種及菌袋置于培養室內進行避光培養，室溫控制在25～28 ℃，空氣相對濕度為65%～70%。觀察菌絲的生長情況，若有雜菌污染，及時將其揀出。觀察紀錄各菌株在PDA培養基及培養料中的生長情況，采用直線生長測量法測量菌絲生長速度，觀察菌絲生長勢，比較不同菌株的菌絲生長情況后用“+”號記錄菌絲密度和生長勢強弱。用新復極差法對各菌株的生長速度進行差異顯著性分析。菌絲日均生長速率（mm/d）=菌絲生長量（mm）/培養天數（d）。

（4）出菇管理與采收。按常規方法進行[5]。

（5）產量統計。記錄統計各菌株的鮮菇產量，計算生物學效率，利用新復極差法進行差異顯著性分析[6]。生物學效率=（子實體總產量/干料重）×100%。

（6）拮抗試驗。對綜合性狀優良的3個菌株進行拮抗試驗。無菌條件下，將菌齡相同、同等大小的3個菌絲塊接種于同一平板上，25 ℃恒溫對峙培養，觀察有無拮抗反應。

（7）抗雜能力試驗。對綜合性狀優良的3個菌株進行抗雜能力試驗。將供試菌株與青霉菌株接種于同一平板，設3個重復，25 ℃恒溫培養，對比各菌株的抗菌效果。

（8）rDNA-ITS基因測序分析。鑒定綜合性狀優良的3個菌株之間的遺傳差異，排除同物異名和同名異物菌株。采用改良的CTAB法提取DNA[7]，通過PCR擴增ITS片段，然后送上海生物工程股份有限公司進行測序。

2 結果與分析

2.1 菌絲生長情況

參試菌株菌絲顏色變黃白的有P7、P11和P12，發黃原因可能是菌絲易老化；其余均為潔白。各菌株菌絲長勢較強，濃密粗壯。其中，P1、P5和P13菌株菌絲生長較快，分別為0.74 mm/d，0.72 mm/d和0.71 mm/d，與對照菌株差異顯著。

表2 供試菌株菌絲的生長情況比較

注：+++表示菌絲長勢強，粗壯，整齊；++表示菌絲長勢較強，粗壯，較整齊；+表示菌絲長勢弱，生長不整齊。

2.2 子實體農藝性狀

從表3可以看出，P1、P5和P13三個菌株子實體農藝性狀較好，表現為顏色灰色，菌蓋大而厚，菌柄粗而短，較適合在當地市場銷售。

2.3 生物學效率

從表4可以看出，P1、P5和P13三個菌株產量較高，生物轉化率均在120%以上，其中，P1為130%，P13為126.6%，P5為121.5%，與對照比差異均達極顯著。

圖1 供試菌株間的拮抗反應

2.4 菌株拮抗試驗

拮抗試驗表明，P1、P5、P13菌株之間存在拮抗反應，拮抗線明顯（圖1）。說明3個菌株間親緣關系較遠，為不同的菌株。

2.5 抗菌試驗

由圖2可以看出，將試驗菌株與青霉菌株接種在同一平板上進行對峙培養，結果：P1、P5、P13三菌株都抗青霉菌，其中P13對青霉抗性較強，完全覆蓋青霉菌落。

表3 供試菌株子實體農藝性狀比較

注：同列數據后小寫字母不同表示差異顯著（0.05），大寫字母不同表示差異極顯著（0.01），表4同。

表4 供試菌株生物學轉化率比較

圖2 供試菌株與青霉的拮抗反應

圖3 PCR擴增條帶電泳圖譜

2.6 供試菌株ITS序列測定

3個菌株ITS擴增片段都在650 bp左右（圖3），將3個菌株ITS測序結果引入NCBI blast中，均可找到與其序列相似性超過99%以上的菌株（表5）。表明3個菌株為側耳屬的不同菌株。

表5 供試菌株ITS序列鑒定結果

3 結 論

（1）對供試平菇菌株的各項指標比較分析表明：菌株P1、P5和P13綜合性狀較好，菇體色深，菌蓋大、厚，菌柄短，抗雜力強，轉化率均在120％以上，其中，P1的轉化率達到130％。

（2）菌株間的拮抗試驗顯示，各菌株間拮抗線明顯，說明不是同一菌株。3個菌株對青霉菌都有抗性，因此在菌絲培養期間即便感染雜菌，也不必將污染菌包挑出，菌絲可以吃掉雜菌。ITS鑒定結果表明，3個菌株的基因片段存在差異，可以排除同種異名和同名異種菌株。

（3）引進商品菌株在推廣前，必須先進行品比試驗[8]，只有掌握各商品菌株綜合農藝性狀，生產中才可根據季節和當地消費者喜好的顏色合理選擇生物轉化率較高的菌株栽培。從生產及市場需求分析，菌絲生長、出菇、轉潮快，產量高，子實體厚實，褐色或深褐色，商品性好的品種最受生產者和消費者喜愛。因此，綜合各菌株的菌絲生長情況和生物學效率，P1、P5和P13為適宜于達州地區推廣栽培的菌株。

[1] 果有旺, 班立桐. 5個平菇菌株農藝性狀比較試驗[J]. 中國園藝文摘, 2010(9): 37-38.

[2] 徐建俊, 李彪, 孫傳齊, 等. 平菇減產原因分析與防控技術[J]. 食藥用菌, 2014, 22(4): 238.

[3] 許月明. 平菇優良菌株的篩選[J]. 中國食用菌, 2013, 32(3): 16-18.

[4] 常明昌. 食用菌栽培學[M]. 北京: 中國農業出版社, 2003: 121-137.

[5] 王賀祥.食用菌栽培學[Ｍ]. 北京: 中國農業大學出版社, 2008.

[6] 王震, 王春弘, 班新河, 等. 11個平菇菌株的區域適應性比較試驗[J]. 食用菌, 2016(5): 21-23.

[7] 陳國明, 魏海蓮, 李志強, 等. 平菇DNA不同提取方法比較[J]. 廣西林業科學, 2014, 43(1): 69-74.

[8] 杜適普, 石景尚, 楊先庭, 等. 十八個平菇菌株引種品比試驗[J]. 食用菌, 2002(1): 11-12.

Strain comparative test of eurythermicfor cultivation in dazhou

Sun Chuanqi1Xu Jianjun1Li Biao1Zhao Hui1Ma Jie1Xu De1Zhou Yong2

(1. Dazhou Institute of agricultural sciences，Dazhou，Sichuan 635000, China；2. Tongchuan District Institute of vegetables，Dazhou，Sichuan 635000, China)

In order to screen the strains of eurythermicwhich was suitable for cultivation in Dazhou regions,the strain comparative test of 13 different strains ofwere conducted,which were introduced from different provinces and regions in domestic or applied in production currently.After the comparison study on mycelial growth condition, growth period and morphology,as well as yield of 13strains,three good strains with high yield and suitable for cultivation in Dazhou were selected, they were the P1、P5、P13.Three strains were identified by rDNA-ITS gene, and the results showed that the gene fragments of the three strains were different, which excluded synonyms or homonyms strains, which could be applied in oyster mushroom production in Dazhou regions.

; appropriate strains; strain comparative test; screening

S646

A

2095-0934（2018）01-046-04

現代農業產業技術體系四川創新團隊建設專項資金

孫傳齊（1983—），男，助理研究員，主要從事食用菌品種選育、栽培技術研究。