腦膠質瘤組織中P—gp、MRP、BCRP的表達及臨床意義

侯亮+馮海利

[摘要] 目的 探討腦膠質瘤組織中P-糖蛋白（P-gp）、多藥抗藥性相關蛋白（MRP）、乳腺癌耐藥相關蛋白（BCRP）的表達及臨床意義。 方法 選擇2007年7月～2016年7月于武安市第一人民醫院手術切除的腦膠質瘤標本56例作為觀察組，同期腦外傷的正常腦組織10例作為對照組。應用免疫組織化學SP法檢測兩組標本中的P-gp、MRP、BCRP表達情況，并分析其與腦膠質瘤患者的臨床病理特征的關系。 結果 觀察組P-gp、MRP、BCRP陽性表達率分別為42.86%（24/56）、76.79%（43/56）、46.43%（26/56），均明顯低于對照組的0.00%（0/10）、10.00%（1/10）、0.00%（0/10）（P < 0.01）。腦膠質瘤組織P-gp、MRP、BCRP陽性表達率與腫瘤病理分期、組織學分級有關，病理分期越高，P-gp、MRP、BCRP陽性表達率越高；組織學分級越低，P-gp、MRP、BCRP陽性表達率越高，差異均有統計學意義（P < 0.01）。Spearman等級相關分析顯示，腦膠質瘤組織P-gp陽性表達率與MRP、BCRP陽性表達率呈正相關（Rs = 0.612、0.537，P < 0.05）。 結論 腦膠質瘤組織中P-gp、MRP、BCRP均呈高表達，其表達水平與腫瘤病理分期、組織學分級有關，且三者表達呈正相關。

[關鍵詞] 腦膠質瘤；P-糖蛋白；多藥抗藥性相關蛋白；乳腺癌耐藥相關蛋白；免疫組織化學法

[中圖分類號] R739.41 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）12（b）-0012-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of P- glycoprotein （P-gp）， multidrug resistance associated protein （MRP） and multidrug resistance associated protein （BCRP） in brain gliomas. Methods Fifty-six cases of brain glioma resected in the First People's Hospital of Wuan from July 2007 to July 2016 were selected as the observation group， and 10 normal brain tissues of brain trauma in the same period were selected as control group. The expressions of P-gp， MRP and BCRP in specimens of two groups were detected by immunohistochemistry （SP）， and the relationship between the expression and clinical pathological features of glioma was analyzed. Results The P-gp， MRP， BCRP positive expression rates of the observation group was 42.86% （24/56）， 76.79% （43/56）， 46.43% （26/56）， respectively， was significantly lower than the control group of 0% （0/10）， 10% （1/10）， 0% （0/10） （P < 0.01）. The positive rates of P-gp， MRP and BCRP in glioma was related to the pathological stage and histological grade of glioma， the higher the pathological stage， the higher the positive expression rate of P-gp， MRP and BCRP. The lower the histological grade， the higher the positive expression rates of P-gp， MRP and BCRP， and the differences were statistically significant （P < 0.01）. Spearman rank correlation analysis showed that the positive rate of P-gp expression in glioma tissues was positively correlated with the positive rates of MRP and BCRP （Rs = 0.612， 0.537， P < 0.05）. Conclusion The expressions of P-gp， MRP and BCRP are highly expressed in gliomas， and the expression level is related to the pathological stage and histological grade， and the three expressions are positively correlated.

[Key words] Brain glioma； P-glycoprotein； Multidrug resistance associated protein； Breast cancer resistance related protein； Immunohistochemistryendprint

腦膠質瘤是臨床上最為常見的中樞神經系統原發腫瘤之一，約占顱內腫瘤的50%[1]。該病具有較高的發病率，且近年來發病率呈逐年上升趨勢[2]。目前，臨床上對于腦膠質瘤主要是采用手術治療，但由于腦膠質瘤惡性程度較高，多呈浸潤性生長，腫瘤邊界不明顯，僅通過手術治療難以達到完全切除的效果，術后常需要輔助化療、免疫治療等[3]。近年來，隨著腫瘤多藥耐藥性的發生，化療藥物敏感性逐漸下降，導致患者預后不良[4]。P-糖蛋白（P-gp）是多藥耐藥基因編碼的一種單鏈跨膜糖蛋白，與化療耐藥密切相關[5]。而多藥抗藥性相關蛋白（multidrug resistant proteins，MRP）和乳腺癌耐藥相關蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）是目前已知的與化療耐藥相關的重要蛋白，不僅影響腦膠質瘤化療效果，也可能與腫瘤惡性程度有關[6]。鑒于此，本研究探討腦膠質瘤組織中P-gp、MRP、BCRP的表達及臨床意義，目的在于進一步分析上述指標與膠質瘤的病理級別關系，從而為腦膠質瘤的化療提供新的靶點與思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2007年7月～2016年7月武安市第一人民醫院（以下簡稱“我院”）手術切除并經病理診斷確診的腦膠質瘤標本56例，其中男32例，女24例；年齡20～72歲，平均（41.2±6.2）歲；根據Ann Arbor系統對所有患者進行臨床病理分期：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期26例；組織學分級：低分化19例，中、高分化37例。入選標準：①患者臨床資料完整；②本次就診為腦部疾病初次就診，術前未經任何放化療。排除標準：①同時患有其他系統腫瘤患者；②腎、肝功能異常患者；③顱內退行性病變患者；④既往有神經、精神系統疾病病史。同時選取同期因外傷切取的正常腦組織標本10例作為對照組，其中男6例，女4例；年齡18～70歲，平均（36.75±5.35）歲。兩組性別、年齡差異無統計學意義（P > 0.05），有可比性。患者均簽署了知情同意書，本研究經我院醫學倫理委員會批準。

1.2 主要試劑

P-gp小鼠抗人單克隆抗體，MRP小鼠抗人單克隆抗體，液體DAB酶底物顯色試劑盒，4%中性甲醛溶液以及SP-9002免疫組化試劑盒。上述試劑購自廣州安必平醫藥科技股份有限公司。PBS緩沖液購自北京武警總醫院病理實驗室。

1.3 免疫組織化學SP法

所有標本均經5%福爾馬林固定、液體石蠟包埋，冷卻，制成4 μm厚度連續切片。并應用免疫組織化學SP法檢測兩組標本中的P-gp、MRP、BCRP表達情況，具體方式如下：梯度酒精脫水，PBS緩沖液沖洗，高溫高壓抗原修復，PBS緩沖液沖洗，加入生物學一抗過夜，山羊血清封閉，加入生物學二抗，DAB顯色，梯度酒精水化，蘇木精復染，中性樹膠封片。具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。取已知P-gp、MRP陽性切片為陽性對照，以PBS替代一抗為陰性對照。

1.4 結果判定標準

腦組織細胞質與細胞膜內存在棕黃色顆粒記為P-gp、MRP陽性，隨機選取5個高倍鏡視野，視野中陽性細胞數占比<10%記為陰性，陽性細胞數占比≥10%記為陽性[7]。

1.5 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，并應用Speraman相關分析相關性，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組P-gp、MRP、BCRP表達情況比較

觀察組P-gp、MRP、BCRP陽性表達率均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P < 0.01）。見表1。

2.2 腦膠質瘤組織中P-gp陽性表達率與患者病理特征關系分析

腦膠質瘤組織中P-gp陽性表達率與患者的性別、年齡無關（P > 0.05）；病理分期Ⅲ～Ⅳ期、組織學分級為低分化腦膠質瘤患者的P-gp陽性表達率均明顯高于病理分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織學分級為中、高分化者，差異有統計學意義（P < 0.01）。見表2。

2.3 腦膠質瘤組織中MRP陽性表達率與患者病理特征關系分析

腦膠質瘤組織中MRP陽性表達率與患者的性別、年齡無關（P > 0.05）；病理分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織學分級為低分化腦膠質瘤患者的MRP陽性表達率均明顯高于病理分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織學分級為中、高分化患者，差異有統計學意義（P < 0.01）。見表3。

2.4 腦膠質瘤組織中BCRP陽性表達率與患者病理特征關系分析

腦膠質瘤組織中BCRP陽性表達率與患者的性別、年齡無關（P > 0.05）；病理分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織學分級為低分化腦膠質瘤患者的BCRP陽性表達率，均明顯高于病理分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織學分級為中、高分化患者，差異有統計學意義（P < 0.01）。見表4。

2.5 腦膠質瘤組織中P-gp、MRP、BCRP表達的相關性

Spearman等級相關分析顯示，腦膠質瘤組織P-gp陽性表達率與MRP、BCRP陽性表達率呈正相關（Rs = 0.612、0.537，P < 0.05）。

3 討論

腦膠質瘤的發病率在所有顱內腫瘤中位居首位，臨床主要采用手術治療[8]。但由于腦膠質瘤惡性程度較高，僅通過手術治療難以達到根治效果，患者術后復發率較高，有研究報道顯示，腦膠質瘤患者術后平均生存期為1年[9]。而術后化療在腦膠質瘤的綜合治療過程中具有積極作用。近年來，隨著化療的廣泛應用，腫瘤多藥耐藥發生率逐漸升高，化療敏感性降低，成為患者預后不良的重要原因。因此，如何有效提高化療效果是目前臨床上備受關注的熱點。分子生物學研究顯示[10-11]，腦膠質瘤細胞中部分耐藥基因及其產物的表達水平是導致化療耐藥的主要機制。其中P-gp是多藥耐藥基因編碼的跨膜糖蛋白，可以通過外轉運機制將多種化療藥物泵出細胞外，降低化療敏感度[12]。而MRP則可以通過與化療藥物中的葡萄糖醛酸甙形成共軛化合物，降低化療敏感度[13]。BCRP屬于ATP結合轉運蛋白，則可以介導20多種化療藥物的耐藥[13]。以上三種分子可能影響腦膠質瘤的生物學行為。endprint

本研究通過對腦膠質瘤標本和正常腦組織比較發現，腦膠質瘤標本P-gp、MRP、BCRP陽性表達率均明顯高于正常腦組織，差異均有統計學意義。這與Jeibmann等[14]的研究報道相一致，表明了腦膠質瘤組織中P-gp、MRP、BCRP均呈高表達。此外，腦膠質瘤患者病理分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織學分級為低分化患者的P-gp、MRP、BCRP陽性表達率均明顯高于病理分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織學分級為中、高分化患者。證實了腦膠質瘤組織P-gp、MRP、BCRP陽性表達率與腫瘤病理分期、組織學分級有關。目前有研究報道顯示[15]，P-gp能夠泵出秋水仙堿、依托泊苷、長春新堿等藥物；其可通過外排轉運機制將通過細胞膜的親脂性藥物泵出細胞外，從而降低化療藥物的作用效果。MRP不僅屬于能量泵之一，同時亦是谷胱甘肽偶合泵之一，可介導化療藥物中的葡萄糖醛酸甙共軛物、硫酸鹽共軛物以及谷胱甘肽硫共軛物排出細胞，進一步引發耐藥的產生[16-17]。同時，MRP主要定位于細胞膜，參與了細胞質內囊泡的運輸，進一步導致藥物亞細胞分布的改變，從而促使化療藥物不能與其靶點結合，最終導致了耐藥的產生[18]。BCRP屬于ATP結合盒轉運蛋白超家族成員之一，作為細胞膜上的藥物排出泵，其能排出20多種細胞毒性藥物，從而對藥物作用產生極大的影響[19-20]。本研究結果進一步表明，P-gp、MRP、BCRP可能在腦膠質瘤的發生、發展過程中發揮著至關重要的作用。同時，Spearman等級相關分析顯示，腦膠質瘤組織P-gp陽性表達率與MRP、BCRP陽性表達率呈正相關。筆者推測P-gp、MRP、BCRP可能通過相互影響，從而促進腦膠質瘤的發生、發展、侵襲和耐藥，其具體機制有待于進一步研究證實。本結果也提示臨床上可以通過對P-gp、MRP、BCRP干預，降低化療的耐藥性，為人腦膠質瘤的化療提供新的方法，也為抗腫瘤藥物的研制提供了新思路。

綜上所述，腦膠質瘤組織中P-gp、MRP、BCRP均呈高表達，臨床上可通過對上述三項指標表達情況進行檢測，從而為腦膠質瘤患者的診斷、治療以及預后評估提供參考依據。

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（收稿日期：2017-10-19 本文編輯：任 念）endprint