霜后桑葉總酚、黃酮和總糖含量變化研究

俞燕芳 黃金枝 王軍文 杜賢明

(江西省蠶桑茶葉研究所 330202)

桑葉是一種傳統中藥，古代眾多醫藥典籍中的桑葉多為經霜后采收，歷版《中國藥典》中收錄的桑葉藥材也為“霜桑葉”。桑葉為何經霜后采收？國內外學者對不同品種、不同季節桑葉的黃酮、DNJ等含量進行了測定分析與比較。許多研究發現桑葉黃酮類成分在10～11月經霜后達最大值，之后桑葉黃酮類物質含量顯著降低[1～3]。劉利[4]等比較了不同季節、不同品種桑葉總黃酮含量的差異，結果表明，育71-1秋季葉片總黃酮含量顯著高于春夏季，并且霜前含量略高于霜后，而實鈷11-6春、秋葉片總黃酮含量差異不明顯。沈維治等[5]也發現在4～10月中同一品種桑葉中不同酚類物質變化不一樣，不同品種桑葉相同酚類物質變化也不一樣。

我國各個地區氣候環境不同，而且經霜前后同一月份氣溫變化差異也很大，現有研究結果大都是對不同月份的桑葉中的活性物質含量進行比較，難以全面地反映霜后桑葉活性成分的動態變化規律和霜后采收桑葉的合理性。筆者對江西省“霜降”后桑葉的酚類、黃酮類及可溶性總糖等成分含量變化進行了分析，為進一步明確桑葉采收時間提供一定的科學依據，以更為科學有效地利用桑葉資源。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

沒食子酸、蘆丁和葡萄糖標準品購自阿拉丁(≥98%)，無水乙醇、福林酚(2N)、無水碳酸鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、苯酚、濃硫酸等試劑均為分析純。

1.1.2 儀器

UV-2600紫外分光光度計(日本島津)，SK3310HP超聲清洗器(上海科導超聲儀器有限公司)。

1.1.3 桑葉樣品

桑葉采自江西省蠶桑茶葉研究所桑樹品種園，供試桑葉品種為強桑1號、大10、梨葉大、甜桑、黑油桑和尖頭荷葉，取其枝條中上部位桑葉。采集時間為2015年10月26日、11月2日、11月9日和11月16日，采后桑葉60℃烘干，粉碎，過60目篩，備用。

1.2 方法

1.2.1 桑葉黃酮、酚類物質的提取與測定

采用超聲輔助法提取桑葉多酚和黃酮。稱取桑葉粉 0.5 g，置50 mL離心管中，加 70% 乙醇30 mL，超聲(300W)提取2次，每次30 min，合并提取液，以70%乙醇定容至100 mL，得到桑葉酚類(黃酮)提取液。

桑葉總酚含量采用福林酚比色法測定[6]：取不同濃度沒食子酸標準品溶液(0mg/mL, 0.04 mg/mL，0.08 mg/mL，0.12 mg/mL，0.16 mg/mL，0.20 mg/mL)1mL，置于25mL 試管中，分別加入福林酚溶液(0.1N)5 mL，反應5min后，加入7.5% 碳酸鈉溶液 4 mL，搖勻，定容，避光放置 30 min后，在 765nm處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。桑葉提取液按相同條件測定吸光總黃酮含量采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法測定[7]：取不同濃度(0 mg/mL, 0.1 mg/mL，0.2 mg/mL，0.3 mg/mL，0.4 mg/mL，0.5 mg/mL，0.6 mg/mL)蘆丁標準品溶液1mL，置于10mL 試管中，加 5% 亞硝酸鈉0.4mL，放置 6 min 后，加 10% 硝酸鋁 0.4 mL，放置 6 min，加入 1 mol/L 氫氧化鈉 4 mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，靜置15min后在 510 nm 處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。桑葉提取液按相同條件測定吸光度，代入標準曲線計算得到提取液總酚質量濃度，桑葉中總黃酮含量以干物質計，以蘆丁當量表示(mg/g干重)。

度，代入標準曲線計算得到提取液總酚質量濃度，桑葉中總酚含量以干物質計，以沒食子酸當量表示(mg/g干重)。

1.2.2 可溶性總糖含量測定

利用水浸提法從桑葉中提取桑葉可溶性總糖。稱取 1 g桑葉粉，加50mL蒸餾水，沸水浴浸提 1 h，10 000 r / min離心5min，沉淀加50mL蒸餾水重復提取1次，合并2 次濾液，定容至100 mL，得桑葉可溶性總糖提取液。

總糖含量采用苯酚硫酸法測定[8]：取不同濃度葡萄糖標準品溶液(0 mg/mL, 0.02 mg/mL，0.04 mg/mL，0.06 mg/mL，0.08 mg/mL，0.10 mg/mL)1mL，置于25mL 試管中，分別加入5% 苯酚溶液 1 mL，混勻，迅速加入濃硫酸5 mL，沸水浴中反應 15 min，冷卻后室溫放置30min，在 490nm 處測定吸光度，以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。桑葉提取液稀釋后按相同條件測定吸光度，代入標準曲線計算得到提取液總酚質量濃度，桑葉中總糖含量以干物質計，以葡萄糖當量表示(mg/g干重)。

2 結果與討論

2.1 不同時期桑葉總酚含量變化

不同品種桑葉在霜后不同時期的總酚含量變化趨勢相似(具體見表1和圖1)，10月26日含量最高，在10月26日至11月2日期間總酚含量下降非常顯著，大10、黑油桑、尖頭荷葉、梨葉大、強桑1號和甜桑桑葉分別下降了16.46%、36.23%、41.91%、30.29%、38.51%和18.84%。11月2日至11月26日期間不同品種桑葉總酚含量均有小幅波動。

表1 不同品種桑樹經霜前后桑葉成分變化

圖1 霜后不同時期桑葉總酚含量變化

2.2 不同時期桑葉黃酮含量變化

由表1和圖2可以看出，霜后不同品種桑葉黃酮含量變化趨勢與總酚含量變化趨勢(圖1)相同，即10月26日最高，而后含量下降并有小幅波動。這與楊貴明等提出的霜后黃酮類物質含量顯著降低一致[9]。

圖2 霜后不同時期桑葉總黃酮含量變化

結合11月份南昌縣的天氣情況(圖3)，10月28至11月2日期間有明顯的降溫而且是連續的陰雨天，桑樹在這期間次生代謝可能停止；11月3日后天氣轉晴氣溫回升(平均氣溫20～24℃)，桑葉總酚和黃酮含量有小幅上升；11月8日后桑葉總酚和黃酮含量隨著氣溫下降(下雨)而下降。總之，桑葉總酚、黃酮等物質含量可能與光照時間的長短、氣溫的變化有關。

圖3 采樣地點不同日期平均氣溫變化圖

2.3 不同時期桑葉可溶性總糖含量變化

不同品種桑葉在霜后不同時期的可溶性總糖含量變化趨勢與總酚(黃酮)明顯不同，不同品種的變化趨勢也不一樣(表1和圖4)。總體上看，同一品種桑葉在10月26日和11月2日含量接近，顯著高于11月9日和11月16日含量。大10、黑油桑、尖頭荷葉、梨葉大、強桑1號和甜桑，桑葉可溶性總糖的最低值與最高值相比，分別減少了44.00%、60.88%、30.87%、54.27%、41.27%和60.63%。

圖4 霜后不同時期桑葉可溶性總糖含量變化

3 結論

本實驗研究了霜后不同時間不同品種桑葉中內含成分動態變化，結果表明，不同時期的桑葉中總酚、黃酮和可溶性總糖含量均有一定差異，且不同成分的變化趨勢不同。總酚、黃酮的含量變化，隨著霜降后時間推移，呈逐漸降低趨勢；桑葉可溶性總糖，經霜降后表現為前期較高，后期降低的趨勢。但總酚、黃酮及可溶性糖的變化均與所處區域溫度及光照時間有關，其變化機制有待進一步研究。因此認為同樣是霜后桑葉，采摘時間對桑葉有效成分的含量仍然有很大影響，應根據氣候變化和桑葉不同成分的功效，合理選擇采收時間。

[1] 劉薇, 裴瑾, 王阿娜, 等. 兩個桑葉栽培品種化學成分的動態變化研究[J]. 華西藥學雜志, 2012, 27(6): 607～610.

[2] 徐健飛, 義祥輝, 陳全斌. 桑葉生長周期黃酮含量變化的研究[J]. 食品科技, 2009, 34(2): 66～70.

[3] 張魏琬麒, 歐陽臻, 趙明, 等. 桑葉經霜前后次生代謝產物表達差異分析[J]. 食品科學, 2015, 36(8): 109～114.

[4] 劉利. 桑葉次生代謝產物研究[D].中國農業科學院, 2005.

[5] 沈維治, 廖森泰, 鄒宇曉, 等. 桑葉酚類物質的變化規律研究[J]. 中草藥, 2010, 41(11): 1 890～1 892.

[6] 張軍, 李江遐, 陸翠珍, 等. Folin-Ciocalteu比色法測桑葉中多酚含量[J].激光生物學報，2012, 21(2): 131～135

[7] 張強, 孫長波, 張晶.桑葉中多糖和總黃酮的含量測定[J].吉林農業, 2011(3): 73～74.

[8] 王向陽, 俞興偉, 仝義超. 桑葉多糖的提取與降血糖功能研究[J]. 中國食品學報, 2014, 14(9): 63～67.

[9] 楊貴明, 薛秋生, 甄占萱, 等. 不同生長時期桑葉中黃酮類物質的含量差異研究[J]. 時珍國醫國藥, 2006(1): 50～51.