HPLC法同時測定3種煎法下防風通圣方中的黃芩苷和梔子苷含量

吳宇鋒+陳靈哲+林忠

摘 要 目的：通過定量分析比較不同煎煮途徑對防風通圣方中主要成分含量的影響，判斷各個方法的優劣。方法：HPLC法分別測定不同煎煮途徑下防風通圣方中的黃芩苷和梔子苷含量。結果：代煎、自煎、免煎顆粒樣品的黃芩苷含量分別為0.886、0.787、0.639 g/L；梔子苷含量分別為0.057、0.051、0.017 g/L。結論：防風通圣方不同煎煮途徑的優劣可通過HPLC定量測定來區分；由黃芩苷和梔子苷含量均得出代煎途徑最佳。

關鍵詞 防風通圣方 煎煮 黃芩苷 梔子苷

中圖分類號：O657.71； R289.5 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1533（2018）01-0061-04

Simultaneous HPLC determination of the contents of baicalin and gardenoside extracted from Fangfengtongsheng prescription by different decoction methods

WU Yufeng 1*， CHEN Lingzhe 2， LIN Zhong1（1. Taizhou Hospital， Wenzhou Medical University， Taizhou 317000， China； 2. Renji College， Wenzhou Medical University， Wenzhou 325035， China ）

ABSTRACT Objective： To compare the effect of different decoction methods on the contents of main components in Fangfengtongsheng prescription by quantitative analysis so as to evaluate the merits of each method. Methods： The contents of baicalin and gardenoside were determined by an HPLC method. Results： The contents of baicalin were 0.886， 0.787 and 0.639 g/L and the contents of geniposide were 0.057， 0.051 and 0.017 g/L by three different decoction methods including the decoction by hospital， the self-decoction at home or oral ready granules from company， respectively. Conclusion： The merits of different decoction methods can be evaluated by HPLC determination of two main components in Fangfengtongsheng prescription and the contents of baicalin and gardenoside are the highest by the method of the decoction by hospital.

KEY WORDS Fangfengtongsheng； decoction； baicalin； gardenoside

中藥在幾千年來為人類疾病防治做出了巨大貢獻[1]。中藥湯劑可以幫助患者調理身體，是很多患者喜愛的治療方式[2]。但是隨著社會節奏越來越快，中藥煎煮繁瑣的操作流程反而成為了部分患者的累贅，由此，傳統的中藥煎煮開始演變出新型的煎煮方式：醫院代煎湯劑（多帖合并煎煮）和免煎顆粒[3-4]。這兩種新型的煎煮途徑不僅省去了患者煎煮中藥的流程，而且使患者隨時隨地都可以服用中藥湯劑。和傳統煎煮途徑相比，便利性大大提高。但是，正因為省去了部分煎煮環節，部分病人甚至醫生對代煎湯劑和免煎顆粒持不信任或者懷疑態度，認為療效和質量不如傳統煎煮的湯劑[4-6]。本文以黃芩苷和梔子苷為指標，采用HPLC法，驗證自煎、代煎、免煎顆粒這3種途徑對防風通圣組方藥湯質量的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

Waters高效液相色譜儀Waters 717自動進樣器、1525四元泵、2487紫外檢測器、Breeze數據獲取處理系統和Waters ODS2（4.6 mm×250 mm，5 mm）色譜柱（美國Waters公司）；甲醇、乙腈均為色譜純；水為三重蒸餾水；磷酸為分析純；防風通圣方草藥及免煎顆粒藥均購自浙江省臺州醫院中藥房（草藥：杭州華東中藥飲片有限公司；免煎顆粒：江蘇江陰天江藥業）；黃芩苷對照品（批號：KA0801CA14，以98%計）和梔子苷對照品（批號：Y24S6H380S，以98%計），均為色譜純，購自上海源葉生物有限公司。

自煎藥：根據《中國藥典》2015版一部防風通圣顆粒組方用量，取1帖防風通圣方草藥，浸泡30 min，加入500 ml水，根據自煎中藥先煎后下煎煮得400 ml藥液。

代煎藥：取上述5帖防風通圣方草藥，浸泡30 min，加入2 500 ml水，使用煎藥機煎煮得2 000 ml藥液。

免煎顆粒：根據防風通圣組方1帖用量換算，混勻即得。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

1）黃芩苷 采用waters ODS2色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 mm），流動相為甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）[7-9]；檢測波長：278 nm；柱溫30 ℃；流速：1 ml/min；進樣量：20 ml。endprint

2）梔子苷 采用waters ODS2色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5 mm）；流動相為乙腈-水（15∶85）[8-10]；檢測波長：240 nm；柱溫30 ℃；流速：1 ml/min；進樣量：20 ml。

1.2.2 溶液制備

1）黃芩苷對照品溶液 精密稱取黃芩苷對照品1.10 mg，加70%甲醇溶液制成濃度為0.110 mg/ml的對照品溶液。

2）梔子苷對照品溶液 精密稱取梔子苷對照品1.16 mg，加70%甲醇溶液制成濃度為0.116 mg/ml的對照品溶液。

3）代煎和自煎供試品溶液 分別精密量取防風通圣方代煎和自煎樣品溶液各10 ml，置于50 ml量瓶中，加70%甲醇水溶液至刻度，超聲溶解30 min，放冷至室溫，用0.45 mm濾膜濾過，即得。

4）免煎顆粒供試品溶液 取防風通圣方免煎顆粒樣品適量，研細，精密稱取0.25 g，置于50 ml量瓶中，加70%甲醇水溶液至刻度，超聲溶解30 min，放冷至室溫，用0.45 mm濾膜濾過，即得。

2 結果

2.1 系統適應性

黃芩苷和梔子苷的保留時間分別為17.833 min和5.853 min，目標色譜峰無干擾，分離度好，表明系統適應性良好。

2.2 線性關系考察

2.2.1 黃芩苷

精密吸取黃芩苷對照品溶液0.5、1、2、4、5和7 ml，置10 ml容量瓶中，用70%甲醇水溶液定容至刻度，與黃芩苷對照品各取20 ml進行HPLC測定并記錄色譜圖[11-12]。經分析得回歸方程為Y=54.902X+0.260 4，r=0.999 4，線性范圍為0.1～1.37 mg。

2.2.2 梔子苷

取對照品溶液，分別自動進樣1、2、4、8、12和16 ml進行HPLC測定并記錄色譜圖[13]。經分析得回歸方程為Y=19.496X+0.660 1，r=0.999 0，線性范圍為0.11～2.27 mg。

2.3 穩定性試驗

取防風通圣方自煎樣品制成供試品溶液，分別在0、2、4、6和8 h進樣，結果見表1。黃芩苷和梔子苷的峰面積的RSD分別為0.796%和3.735%，均小于5%，表明色譜條件和儀器穩定性良好。

2.4 精密度試驗

將黃芩苷和梔子苷對照品溶液分別進樣6次，計算黃芩苷和梔子苷的峰面積，RSD分別為0.09%和0.19%，均小于1%，表明儀器的精密度高。

2.5 重復性試驗

取自煎供試品溶液6份（2 ml）連續進行HPLC測定。計算得黃芩苷和梔子苷的平均含量分別為0.747 g/L和0.043 g/L，RSD分別為5.56%和5.11% 。

2.6 加樣回收試驗

精密量取6份自煎供試品溶液（各1 ml），分別加入適量的黃芩苷和梔子苷對照品溶液進行HPLC測定，計算黃芩苷和梔子苷含量和回收率[13]（表1）。

2.7 樣品含量檢測

制備代煎、自煎、免煎顆粒供試品溶液各3份，分別進行HPLC測定，記錄數據，使用外標法分析計算黃芩苷和梔子苷的平均含量（表2）。

3 討論

防風通圣方是解表通里，清熱解毒的經典方劑[14]，臨床應用較多，且含有先煎、后下等特殊煎法的藥物。中藥湯劑煎煮兼具復雜性、專業性、隨機性和系統性的一個中藥制劑過程，內含復雜的物理化學反應過程[15]。不同煎煮途徑對有效成分的影響較大，如患者拿回家自行煎煮，由于專業性不夠，往往在火候或煎煮時長上有所不妥，甚至忘記了特殊煎法，則導致有效成分含量降低；而免煎顆粒劑是近年來新興的中藥制劑，但由于其是將每味中藥分別煎煮提取有效成分，服用前直接物理混合，而忽略了各中藥多種成分在煎煮過程中的化學反應過程，導致最終湯劑的成分可能與傳統煎法差異較大，因此并未得到所有中醫生的認可。綜上，選擇合適的煎煮途徑對中藥藥效的發揮具有重要意義。就本研究結果來看，把中藥交給專業機構，一次性煎煮好是最佳方案。本研究的創新之處在于，用具體的定量測定結果來考察各方法的優劣，相比綜述型文章更直觀可靠。但由于中藥方劑成分的復雜性，本研究選取其中兩個具有代表性的成分作為檢測指標，存在一定的局限性，下一步將擴展到其他更多成分的定量測定，并選取更多的方劑進行比較，方能更加全面也更有說服力地窺探三種煎煮途徑的優劣。

參考文獻

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