于 蘭
(遼寧中醫藥大學附屬第四醫院 檢驗科,遼寧 沈陽 110000)
近年來,隨著經濟的迅速發展,人們生活水平不斷提高,攝食范圍逐漸廣泛,隨之而來的心血管疾病也逐漸進入人們的視野,其發病率和致死率呈逐年上升趨勢。急性冠狀動脈綜合征具有起病急迫、病情危篤、致死率高的發病特點,是臨床最常見的急重癥之一。臨床可分為不穩定型心絞痛和急性心肌梗死兩種類型[1],其致病因素多種多樣,以動脈粥樣硬化最為主要,其病變實質為一種慢性炎癥,檢測結果顯示該病理狀態下患者外周血中細胞數量減少。有實驗研究,Treg抑制自身效應性T細胞的同時還參與維持外周免疫調節、防止炎癥的作用[2]。針對Treg是否參與了急性冠狀動脈綜合征的免疫反應至今仍為明確,因此對急性冠狀動脈綜合征患者外周血中反映Treg數量的表達百分比水平及功能進行研究,報道如下。
1.1 一般資料:選擇我院2015年9月至2017年5月心內科住院急性冠狀動脈綜合征患者72例,其中急性心肌梗死11例,不穩定性心絞痛25例,穩定型心絞痛36例,另選擇健康體檢者19例作為對照。
1.2 試劑和儀器:流式細胞儀(生產廠家:上海銳賽生物技術有限公司(Research Science)。紅蛋白標記的鼠抗人CD4抗體(生產廠家:上海友科生物技術有限公司)、異硫氰酸熒光素標記的鼠抗人CD25抗體、IgG1免疫球蛋白(生產廠家:山東西亞化學工業有限公司)及紅細胞裂解液(生產廠家:北京索萊寶科技有限公司)由我院檢驗室嚴格按照說明書操作配制。
1.3 實驗方法。操作過程:檢測時使用前向和側向散射光信號對T細胞群進行設門,采集樣本設門細胞數>10000個/份,進行全血分析,每份以2000 r/min,離心3 min。去其上清液,將留取的細胞組織打散,加入PBS,離心洗滌3次,制成細胞懸液,收集細胞數控制在(1~8)×106/mL。采用免疫熒光標記法:取兩支試管,均加入抗凝全血100 μL,一只作為對照管加入CD4-PC5-Cy5、FITC-IgG1和各單抗相對應的同型對照PE10 μL,另一只加入CD25-FITC及CD4-PC5-Cy5單抗各10 μL,混合均勻后室溫下孵育20 min,再次加入1 mL溶血劑,置于37 ℃水浴箱內,留置25 min,溶血充分后即刻送往檢驗室進行流式細胞儀檢測,記錄數據。
1.4 統計學處理:使用SPSS19.0軟件進行數據處理,采用χ2檢驗計量資料,組間比較采用t檢驗,計量資料以率(±s)表示,以P<0.05為差異具有統計學意義。
急性冠狀動脈綜合征是指冠狀動脈內斑塊的出血或破裂,進而誘發管內血栓發生,致使冠狀動脈管腔堵塞,出現一系列臨床癥狀及體征的病理表現,現代醫學認為本病主要與自身免疫反應及炎性反應關系密切,由于患者的細胞免疫機制被激活,導致斑塊活動性增加[3]。現代醫學表明,機體內存在內存在一種免疫調節細胞Treg,不僅具備免疫功能,同時還與參與免疫耐受存在密切的聯系。研究已經闡證明,機體內Treg細胞數量及結構的異常可誘發自身免疫應答啟動以及炎性反應的發生。Treg細胞具有免疫負調節功能,為免疫T細胞的亞群,Treg細胞具有數量少,效用高的一群T淋巴細胞,具有良好的免疫協調作用。通過細胞間的相互聯系實現抑制作用,從而發揮免疫負調節功能,維持機體內環境相對協調。丁艷萍等[4]研究表明急性冠狀動脈綜合征外周血Treg的表達水平明顯低于正常人,證實在此病理狀態下患者維持機體內環境的調節性T細胞數量顯著減少,從而導致機體免疫耐受受到影響,最終誘發動脈粥樣硬化斑塊的不穩定變化,甚或破潰出血等嚴重病變,危及患者生命安全。程翔等研究表明,不穩定性心絞痛患者外周血中的Treg表達量占細胞的比例明顯降低。