高效液相色譜法在蔬菜農藥殘留檢測中的應用

周迎春，姜太玲，熊賢坤，劉光華

（云南省農業科學院熱帶亞熱帶經濟作物研究所，云南保山 678000）

0 引言

高效液相色譜法（High pressure liquid chromatography，HPLC） 是在原有的液相柱層析基礎上，引入氣相色譜理論，并加以改進和發展起來的。該方法不僅分離速度快、檢測效率高，而且自動化程度達到了氣相色譜法的水平，同時又保持了液相色譜法對試樣適用范圍廣、流動相改變靈活性大和便于大量制備的優點。高效液相色譜法由于兼備液相和氣相2種色譜分析方法的優點，近年來在食品檢測上得以應用并飛速發展。

農藥殘留（Pesticide residue）是指在農業生產中施用農藥后一部分農藥直接或間接殘存于谷物、蔬菜、果品、畜產品、水產品，以及土壤和水體中的現象。近年來，隨著人們生活水平的提高，蔬菜消費量逐年增加，已成為一個潛在的巨大商業市場，菜農為了追求經濟利益，大量使用高毒、高殘留的農藥等，這就造成了蔬菜中普遍存在農藥殘留超標的現象。目前，有機磷、有機氯農藥在我國的研究已經有了很大進展，這2類農藥在蔬菜中已經受到了很大程度的限制。但在蔬菜中仍然有其他農藥的存在，如氨基甲酸酯類、煙堿類、氟蟲腈等農藥。綜述了HPLC對蔬菜中以上幾類農藥殘留的檢測，以期能為以后的研究提供技術指導。

1 氨基甲酸酯類農藥

氨基甲酸酯類農藥自20世紀60年代以來進入高速發展時期，屬于植物源殺蟲劑。該類農藥是以甲酸酯為前體化合物發展而來的農藥，具有分解快、殘留期短、低毒、高效和選擇性強的特點，主要用于糧食、蔬菜和水果等農產品。近年來，隨著氨基甲酸酯類農藥在蔬菜栽培中的大量使用，容易導致在蔬菜中的殘留，給蔬菜生產帶來了新的質量問題。關于食品中氨基甲酸酯類農藥殘留量的分析國內外均有報道，檢測方法主要有氣相色譜法（GC）[1]、氣相色譜-質譜法（GC-MS）[2]、高效液相色譜-質譜法（LC-MS）[3]等。這些方法各有優缺點，由于氨基甲酸酯類化合物極性強、熱穩定性較差，使用GC或GC-MS檢測時常需采用特殊的技術或手段以達到準確測定的目的，方法復雜[4]。HPLC檢測氨基甲酸酯類農藥殘留具有選擇性強、靈敏度高、重現性好等優點。

龔久平等人[5]在現有標準基礎上，改變定容溶液和流動相溶劑梯度的時間和比例，采用帶熒光檢測器（FLD）和柱后衍生系統的高效液相色譜儀對蔬菜中氨基甲酸酯類農藥進行測定，用外標法定量分析，標準曲線的相關系數為0.998 5～0.999 4，平均回收率為93.6%～100.9%，保留時間提前8.5 min。該方法分析快速、分離效果好、回收率與靈敏度高，是一種理想的農藥殘留檢測方法。邵金良等人[6]建立了固相萃取-高效液相色譜柱后衍生熒光檢測蔬菜中8種氨基甲酸酯類農藥殘留的分析方法。8種農藥在0.1～1.0 mg/L的質量濃度范圍內線性良好，相關系數為0.999 43～0.999 92，檢出限為 0.008～0.010 mg/kg。此方法適用于大白菜、辣椒、茄子中氨基甲酸酯類農藥殘留的檢測。胡建英等人[7]用高效液相色譜-柱后衍生、熒光光度法，采用柱溫42℃，氨基甲酸酯類農藥分析專用柱，以梯度淋洗流動相分離，最終得出了7種氨基甲酸酯類農藥方法的定量限為0.003 mg/kg，線性范圍0.005～1.000 mg/L，相關系數均在0.999以上，回收率67%～95%。該方法靈敏度高、重現性好、檢測限低，完全能夠滿足不同品種蔬菜中氨基甲酸酯類農藥殘留量的檢測。

2 煙堿類農藥

煙堿類農藥是一類新型高效、低毒、內吸性強、殘效期長、殘留量低的廣譜性殺蟲劑，在市場上占有很高的份額，年銷售額達到60億歐元，居于所有殺蟲劑首位，目前在世界農藥市場的銷售量超過了氨基甲酸酯類。煙堿類農藥包括吡蟲啉、啶蟲脒、噻蟲啉、噻蟲嗪、噻蟲胺、呋蟲胺及烯啶蟲胺等,其中吡蟲啉具有高效、低毒、廣譜、內吸性強、持效期長等特點，是世界上銷售量最大的殺蟲劑品種。啶蟲脒（Ac-etamipyrid）則是煙堿類廣譜殺蟲劑的代表。多種農藥殘留的同時測定多采用氣相色譜-質譜（GC-MC） 法和高效液相色譜-質譜（HPLCMC）法。而熱不穩定、強極性和難揮發的農藥（如吡蟲啉）則不適宜用GC-MC分析。

侯如燕等人[8]將樣品采用乙腈提取，經固相萃取柱凈化，使用反相高效液相色譜-二極管陣列檢測器檢測。在黃瓜空白基質中0.1～1.0 mg/kg的加標質量濃度范圍內，吡蟲啉、啶蟲脒2種農藥的回收率為50.8%～108.9%，相對標準偏差（RSD） 小于15%，該方法可滿足蔬菜中煙堿類農藥多殘留分析的要求。蘭珊珊等人[9]通過乙腈提取，LC-NH2柱凈化，C18柱分離，梯度洗脫，檢測波長275 nm，吡蟲啉、啶蟲脒2種農藥的線性關系在0.2～10.0 mg/L質量濃度范圍內良好，檢出限在0.01～0.04 mg/kg，平均加標回收率在80.1%～103.7%，相對標準偏差（RSD） 在0.17%～7.80%。該方法具有快速、靈敏、準確、重現性較好的特點，適合于日常大批量樣品的測定。張雪輝等人[10]建立了一種氨基小柱固相萃取，高效液相色譜-紫外檢測器檢測蔬菜中吡蟲啉農藥殘留的方法，柱溫30.0℃，檢測波長275 nm，流動相：甲醇∶水∶乙腈=55∶25∶20（體積比），流速0.8 mL/min，進樣量10 μL。吡蟲啉在0.1～1.0 mg/L的添加范圍內線性良好，線性關系系數（R2）為0.992 5。

3 氟蟲腈農藥

氟蟲腈（又名氟草煙）是一種新型苯基吡唑類高效、廣譜殺蟲劑，具有胃毒、觸殺和一定的內吸作用，用于防治蔬菜等多種作物害蟲。近年來，歐盟、日本等國家和地區對氟蟲腈提出了殘留檢測要求，多采用GC和GC-MS法對氟蟲腈進行分析。這些方法需要進行甲酯化衍生，需嚴格控制酯化時間和酯化溫度；而采用高效液相色譜法則有簡便、準確的優點。

房超等人[11]使樣品以丙酮振蕩提取，通過調節試液至不同pH值對目標物進行凈化和分離，以石油醚去除雜質，二氯甲烷萃取濃縮后用HPLC測定。試驗表明，在蔬菜樣品中添加0.05～0.20 mg/kg氟蟲腈回收率分別在73.8%～89.5%，相對標準偏差為1.57%～14.4%（n=5），氟蟲腈在樣品中的定量限為0.045 mg/kg。張云升等人[12]使用紫外檢測器、Hypersil ODS2柱，以乙腈+甲醇+水為流動相（體積比為30∶40∶30），對氟蟲腈的分析可取得滿意的效果。該法線性范圍是0.02～0.60 mg/mL，最低檢測限為8.0×10-8mg/mL。

4 結語

綜上所述，HPLC是吸納了經典液相色譜法和氣相色譜法的優點進行改進和發展起來的現代分析方法，以其分辨率、靈敏度及定量精度高等特點，已廣泛地用于蔬菜中農藥殘留的檢測。所有試驗均表明，在農藥殘留檢測中，高效液相色譜法是一種高效能、高靈敏度、高準確度、操作簡便的分析方法。隨著技術的不斷完善和發展，高效液相色譜必將在食品檢測與分析領域有更廣闊的發展。

參考文獻：

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[9]蘭珊珊，劉宏程，黎其萬，等.高效液相色譜法同時測定蔬菜和水果中8種農藥殘留 [J].分析科學學報，2011，27（2）：171-174.

[10]張雪輝，杜雨倩，徐芳，等.高效液相色譜法檢測蔬菜中的吡蟲啉殘留 [J].現代食品技，2012，28（4）：466-468.

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[12]張云升，李志偉.高效液相色譜法測定氟蟲腈 [J].河北省科學院學報，2010，27（2）：40-42.◇