食品常用合成色素高效液相色譜檢測方法的改進

□ 厲 芬 王鳳麗 陳 敏 湖州市食品藥品檢驗研究院

1 合成色素的應用

色素包含天然和人工合成色素兩種類型，合成色素的成本較低，色澤鮮艷，著色力強，色調多樣，加工難度不大，所以在我國食品加工領域當中，合成色素應用更為廣泛一些[1]。合成色素多以苯、甲苯、萘等化工產品為原料，經過磺化、硝化、偶氮化等一系列有機反應而成，大多為含有R -N N -R′鍵、苯環或氧雜蒽結構化合物。許多合成色素有一定毒性，超量應用合成色素會對人體造成不同程度的危害。鑒于食用合成色素的不安全性，國家也加強了對合成色素的監管，制定了食品添加劑使用標準（GB 2760-2014），目前對合成色素的檢測手段有高效液相色譜法、薄層色譜法、示波極譜法。現階段我國食品合成色素檢測時，一般將高效液相色譜法作為主要檢測方法，高效液相色譜檢測法實際應用的過程當中，可以將食品當中合成色素的含量檢測出來，以便讓食品合成色素管理力度得到大幅度提升，讓消費者的合法權益得到保護[2]。

2 高效液相色譜法

食品中人工合成色素用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經反相色譜分離，根據保留時間定性和與峰面積比較進行定量[3]。我國食品合成色素檢測范圍包含糖果、果汁以及飲料等食品，蛋白質含量比較高的食品以及基質復雜性的食品當中合成色素的檢測難度比較高，合成色素和蛋白質相互結合在一起，難以提取與凈化，檢測工作的穩定性與準確性比較弱，現階段我國施行的GB2760-2014中明確規定，需要使用高效液相色譜法完成檢測工作。高效液相色譜檢測過程中應用到高壓輸液系統，將不同性質的溶劑或者比例不同的混合型溶劑、緩沖溶劑通過色譜，樣品經過分離之后，憑借檢測器完成樣品合成色素檢測工作，各項工作的選擇性與準確性比較強，分離效果也可以得到保證，在檢測中將待測物質的性質作為依據，科學合理地在各種類型的方法當中進行選擇，在樣品提取工作完成之后，可以使用色譜柱開展長波掃描，依據波長將色素的種類以及數量確定下來，完成合成色素檢測工作。目前，我國市場中流通的食品合成色素種類逐漸增多，食品基質復雜性也逐漸增強，高效液相色譜法實際應用的過程中，想要迅速將色素檢測工作完成，是一件比較困難的事情，因此產生超高效液相色譜法，超高效液相色譜法實際應用的過程中，可以承受更大的壓力，流速也更大，既可以讓高效液相色譜法的檢測效率得到保證，也可以讓各項檢測工作的精準性得到大幅度提升。

3 檢驗方法的改進

在實際應用高效液相色譜法過程當中，將0.02mol/L的乙酸銨-甲醇作為流動相，應用梯度洗脫分離方法，根據國家標準要求，在檢測開始的時候，甲醇20%～35%梯度變化洗脫，容易產生新紅和檸檬黃分離不完全甚至分不開這種問題，容易產生誤判問題。改進之后的方法：在檢測開始后，將0.02mol/L的乙酸銨-甲醇比例按9∶1維持10min，在 10～15min將二者之間的比例調整是65∶34，在15～25min將二者的比例調整成2∶98，在22～25min將二者的比例調整為80∶20，在25～28min重新將二者的比例調整成初始比例，梯度洗脫法可以較好地對多種色素進行分離，特別是可以將新紅和檸檬黃完全分離開來。

檢測環節當中波長的選擇，針對254nm波長檢測，亮藍靈敏度較為低下的問題，實際應用過程中用多種波長同時開展檢測工作，新紅、莧菜紅以及靛藍等合成色素在254nm之下開展檢測工作，亮藍檢測過程中，波長選取595nm。

固相萃取柱的選擇。固相萃取主是憑借固體吸附劑將樣品當中目標化合物吸附起來，讓目標化合物與基質干擾物之間相互分類，再使用洗脫液淋洗之后，實現分離和富集目標。目前，我國市場當中流通的傳統型固相萃取吸附劑基本一樣，實際應用的過程中，有可能發生分析物回收率低下、凈化不完全以及重現性差等問題。在對市場當中流通的幾種固相萃取主進行相互比較之后發現，發現StrataX-AW固相萃取柱在實際應用的過程中，可以滿足實驗要求，StrataX吸附劑應用創新型的聚合物技術，二氨基官能團會對帶點酸性化合物展現出來比較強的選擇性，可以完成100%有機洗滌工作，讓固相萃取柱的靈敏性以及改進型方法的重現性得到保證。檢測食品合成色素時，在改進高效液相色譜法的過程中，應當考慮到以往高效液相色譜法檢測合成色素的過程中存在的問題，并使用適應性比較強的措施，對高效液相色譜法進行改進，以保證高效液相色譜法的實際應用效果。