超高效液相色譜-串聯質譜法測定蜜餞中環己基氨基磺酸鈉

□ 付麗敏 廣東省惠州市質量計量監督檢測所

環己基氨基磺酸鈉，又稱甜蜜素，是一種人工合成的新型甜味劑，易溶于水，目前被廣泛應用于食品加工行業[1]。其甜度是蔗糖的30～50倍，且價格便宜，僅為蔗糖的1/3[2]。已有試驗表明，長期過量食用甜蜜素可導致小白鼠誘發膀胱腫瘤，因此，美國、英國等諸多國家和地區禁止在食品中添加甜蜜素[3]。攝入過量甜蜜素也會對人體神經系統和內臟造成危害，影響人體健康，尤其是對老人、孕婦、小孩等危害更加顯著[4-5]。在我國，雖然允許在食品加工中使用甜蜜素，但是對限量有嚴格的要求，《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）中對不同類別的食品中甜蜜素添加限量作了明確規定[6]。但是，由于監管難度大，蜜餞中超限量使用甜蜜素的現象時有發生，因此，研究快速測定蜜餞中甜蜜素含量的方法顯得尤為重要。

目前，蜜餞中甜蜜素的國家標準檢測方法是氣相色譜法[7]，該方法也被廣泛應用于各種食品中甜蜜素的檢測[8-10]。但是，該方法前處理步驟繁瑣、耗時很長，衍生化處理對人員的素質要求較高，而且重現性不好。而液相色譜串聯質譜法不僅選擇性高、靈敏度高、定性定量準確，而且快速、試劑消耗少，對于假陽性樣品能準確篩選定量。

鑒于此，本文以蜜餞為研究對象，經溶劑超聲提取后，上清液過濾膜，用液相色譜串聯質譜儀直接檢測。探討不同色譜條件、流動相等對試驗的影響，建立了一種快速測定蜜餞中甜蜜素的方法。該方法具有檢出限低、操作簡單、測定周期短等優點。同時，用該方法與國標方法-氣相色譜法同時檢測某陽性蜜餞樣品，結果表明該方法可以準確測定蜜餞中甜蜜素的含量，可為將來食品的檢驗檢測提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試驗儀器

島津超高效液相色譜儀LC-30A，日本島津公司生產；三重四級桿質譜儀API4000，配有電噴霧離子源（ESI）及Analvsit 1.6數據處理系統，美國應用生物系統公司（ABI）生產；電子分析天平；離心機。

1.1.2 試驗試劑

環己基氨基磺酸鈉標準品（C6H12NSO3Na），純度≥99%；甲醇、乙腈，均為色譜純。

1.2 儀器試驗條件

超高效液相色譜儀條件為C18反相色譜柱（3.0×100 mm×1.8 μm），柱溫38 ℃，流速0.3 mL/min，進樣量10 μL，流動相A為10 mmol/L乙酸銨溶液，流動相B為乙腈。

1.3 分析與檢測

質譜條件為電噴霧離子源（ESI），檢測方式為多反應監測（MRM），碰撞氣（CAD）為7.00 Pa，氣簾氣（CUR）為20.00 Pa，霧化氣（GS1）為50.00 Pa，輔助加熱氣（GS2）為40.00 Pa，噴霧電壓（IS）為4 500.00 V，離子源溫度（TEM）為550.00 ℃。定性離子對、定量離子對、碎裂電壓及碰撞能量見表1。

1.4 標準溶液的制備

環己基氨基磺酸鈉儲備液的制備：準確稱取環己基氨基磺酸鈉標準品0.561 2 g（精確到0.1 mg），用水溶解并定容至100 mL，置于1～4 ℃冰箱保存，備用。

表1 環己基氨基磺酸鈉的MRM采集參數

1.5 試驗溶液的制備

將樣品用高速搗碎機粉碎均勻，稱取試樣約1 g（精確至0.1 mg），于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入10 mL水，浸泡充分。在混勻器上充分混合1 min，將離心管放入超聲清洗機中超聲20 min，4 000 r/min離心5 min，取出上清液。殘渣中分別加入10 mL水萃取，合并3次提取的萃取溶劑。平行蒸發儀濃縮至1 mL，經微孔濾膜（0.22 μm）過濾后供液相色譜-質譜分析。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的優化

不同溶劑對環己基氨基磺酸鈉的離子化程度和色譜保留時間有一定的影響，為了讓目標物與雜質能更好地分離，以乙腈-乙酸銨溶液作為流動相時，目標物與雜質得到了很好的分離效果，環己基氨基磺酸鈉的洗脫梯度見表2。

2.2 質譜條件的優化

在流動注射狀態下，將5 mg/L環己基氨基磺酸鈉標準溶液進行母離子全掃描，選擇適當的電離方式和離子峰。調節霧化氣、氣簾氣、離子源溫度、碎裂電壓和碰撞能量等參數，使得富馬酸二甲酯的豐度最大。通過試驗條件的不斷優化，確定定性離子對為202.2/122.2和定量離子對為178.0/79.9碎片離子的強度最大。

2.3 流動相的選擇

在試驗過程中，分別使用乙腈-水和甲醇-水作為流動相來洗脫樣品。結果表明，在乙腈-水的流動相體系中，環己基氨基磺酸鈉可以取得較好的色譜分離效果。

選擇乙腈-水作為流動相體系時，加入少量的乙酸銨可以改善峰形，減輕或消除峰拖尾現象。因此，本試驗對緩沖鹽及濃度進行了考察，結果表明在水相中添加10 mmol/L乙酸銨的緩沖鹽，可以有效分離出目標物。為此，本試驗選擇10 mmol/L乙酸銨的緩沖鹽作為其中的一種流動相，具體梯度洗脫程序見表2。

2.4 柱溫的選擇

試驗結果表明，液相色譜檢測器的溫度對環己基氨基磺酸鈉的結果測定影響較弱，但為了獲得更加準確的試驗結果，采用本方法檢測時將柱溫控制在38 ℃左右。

2.5 標準工作曲線

在確定的質譜條件下，準確移取配置好的不同質量濃度的標準工作溶液進行分析測定。標準溶液濃度為0.00、0.01、0.03、0.05、0.10、0.50 mg/kg和1.00 mg/kg，以峰面積（Y）對質量濃度（X）分別進行線性回歸，結果見表3。環己基氨基磺酸鈉在0.01～1.00 mg/kg范圍內呈現出良好的線性關系，相關系數可以達到0.998 2。

2.6 方法檢出限

為了考察儀器的靈敏度，以3倍基線噪聲值在標準曲線查得結果計算，測得方法的檢出限為0.03 mg/kg。

2.7 方法回收率和精密度

在蜜餞樣品中添加相當于樣品中環己基氨基磺酸鈉0.1 mg/kg的標準溶液，充分混勻，經上述方法提取后進行質譜分析，峰形對稱，響應值高，雜質峰和目標峰實現了較好的分離。

本試驗按照實測值和真實值計算回收率，6次重復試驗，計算變異系數，結果如表4所示。環己基氨基磺酸鈉回收率均在89.8%～96.7%，相對標準偏差（RSD）為3.18%。

2.8 實際樣品的測定

按照上述液相色譜質譜方法對某陽性蜜餞樣品進行檢測，并與國標檢測方法-氣相色譜法測定結果進行對比，經過多次重復樣品的檢測，結果發現，某陽性樣品的液質法和氣相法檢測結果均為0.4 mg/kg。圖1為某陽性蜜餞樣品MRM色譜圖。由此證明，該方法用于蜜餞中環己基氨基磺酸鈉的檢測是可行的。

3 結論

本研究建立了快速檢測蜜餞中環己基氨基磺酸鈉的超高效液相色譜-質譜聯用檢測方法，環己基氨基磺酸鈉的回收率在89.8%～96.7%，相對標準偏差（RSD）為3.18%。環己基氨基磺酸鈉的檢出限均為0.03 mg/kg，該方法具有簡單、快速、成本低、靈敏度高和重現性好等特點。通過與氣相色譜法對比，說明該方法可準確定量測定蜜餞中環己基氨基磺酸鈉，應用于實際檢測工作效果較好。

表2 環己基氨基磺酸鈉的液相色譜梯度洗脫程序

表3 標準工作曲線和檢出限

表4 蜜餞中環己基氨基磺酸鈉的加標回收率和精密度（n=6）

圖1 蜜餞陽性樣品MRM色譜圖