球菌的分析鑒定

□ 樊云霄 河南省產品質量監督檢驗院

模仿葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、表皮葡萄球菌這四種菌株在血平板和BP平板上很容易混淆，實驗室對這四種菌株做進一步生化鑒定研究。這樣以后在微生物實驗中能夠快速取得準確、真實的結果，實驗人員的檢測質量也可以大大提高，對整個實驗室質量控制結果給予肯定。微生物實驗跟別的實驗不一樣，實驗當中工作人員一定要小心，注意安全。

1 材料及試劑

采用北京路橋提供的3 mm無菌接種環、血平板、BP平板、營養瓊脂平板、革蘭染色液、凍干血漿，所選材料及試劑均在有效期之內。

標準菌株：模仿葡萄球菌 ATCC 27851、金黃色葡萄球菌 ATCC 6538、糞腸球菌 ATCC 29212、表皮葡萄球菌ATCC 12228。

2 菌株活化

在無菌環境下，從凹口處撕開產品包裝，撕掉標簽上的拉片，將其貼于初級培養平板上；捏管帽處安瓿瓶中部（僅一次）使其釋放水合液體，垂直握住試管并輕拍之，使液體流入含小球的管底；通過擠捏壓碎小球，使其與液體混合；立即將拭子浸于水合懸液中，擠壓并旋轉拭子，接種于營養瓊脂上，用一無菌接種環在先前的接種區劃線20次，使其分離出單菌落。倒置36 ℃培養24 h。

3 分離

模仿葡萄球菌在營養瓊脂上為白色圓形濕潤菌落；金黃色葡萄球菌在營養瓊脂上為黃色圓形濕潤菌落；糞腸球菌在營養瓊脂上為無色針尖狀菌落；表皮葡萄球菌在營養瓊脂上為白色針尖狀菌落。

4 接種

挑取模仿葡萄球菌在營養瓊脂上的白色圓形濕潤菌落劃線接種血平板和BP平板；挑取金黃色葡萄球菌在營養瓊脂上的黃色圓形濕潤菌落劃線接種血平板和BP平板；挑取糞腸球菌在營養瓊脂上的無色針尖狀菌落劃線接種血平板和BP平板；挑取表皮葡萄球菌在營養瓊脂上的白色針尖狀菌落劃線接種血平板和BP平板。血平板倒置36 ℃培養24 h。BP平板倒置36 ℃培養48 h。模仿葡萄球菌在血平板上為白色圓形濕潤菌落，有溶血；金黃色葡萄球菌在血平板上為黃色圓形光滑濕潤菌落，有溶血；糞腸球菌在血平板上為白色圓形濕潤菌落，有溶血；表皮葡萄球菌在血平板上為白色圓形濕潤菌落，無溶血。模仿葡萄球菌在BP平板上為灰色圓形大菌落，周圍有暈圈，暈圈外有透明帶。金黃色葡萄球菌在BP平板上為黑色圓形小菌落，有光澤，有渾濁帶。糞腸球菌在BP平板上為黑色圓形小菌落，有光澤，無暈圈。表皮葡萄球菌在BP平板上為黑色圓形菌落，無暈圈。

5 鑒定

（1）革蘭氏染色及鏡檢。模仿葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，糞腸球菌為革蘭氏陽性球菌，表皮葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌。

（2）挑取五個營養瓊脂上的模仿葡萄球菌接種5 mL BHI，挑取五個營養瓊脂上的金黃色葡萄球菌接種5 mL BHI，挑取五個營養瓊脂上的糞腸球菌接種5 mL BHI，挑取五個營養瓊脂上的表皮葡萄球菌接種5 mL BHI，36 ℃培養24 h。按照凍干血漿的操作方法做血漿凝固酶實驗，每半個小時觀察一次，觀察六小時。如出現凝固或凝固體積大于一半即為陽性。模仿葡萄球菌無凝固、金黃色葡萄球菌凝固、糞腸球菌無凝固、表皮葡萄球菌無凝固。

6 結語

在微生物實驗室檢驗當中，能夠取得準確、真實的結果，與實驗人員的技術息息相關。優質的實驗操作，提高實驗的效率和實驗的準確性，也是微生物發展的基礎，所以在實驗管理工作中，要熟悉實驗過程，了解標準中常規的實驗內容，掌握一些易混淆的菌株的生理生化特征現象。微生物實驗過程中一定要小心，要避免泄露。泄露一是會對實驗人員造成一定的傷害，二是對整個實驗室也會造成污染。另外，微生物中很多致病菌在一定的條件見下很容易增長和變異，會對結果造成一定的偏差和影響。實驗結束后一定要對用過的試劑和耗材進行高壓滅菌。通過實驗可以驗證理論，工作人員要提高實驗操作的熟練度，培養獨立實驗的工作能力和思考能力，并具有過硬的專業技術水平，熟練地操作技術同時還要保證自身的安全性。微生物實驗室堅持以發展為主題，以服務客戶為中心，以提高實驗質量為重點，緊緊圍繞實驗的整體工作，解放思想，更新觀念，開拓進取，不斷推進微生物實驗室工作向前發展。微生物實驗室檢驗質量對于檢驗結果的準確性至關重要，因此應當得到更高的重視。