食品中肌醇的微生物檢測方法

□ 曾鳳澤 烏蘭察布醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 姚宇澤 烏蘭察布市獸藥監(jiān)察所

肌醇屬于維生素B族的范疇，有助于為人體細(xì)胞正常生長提供營養(yǎng)支持，有助于保障動物生理功能正常性。在對肌醇含量進(jìn)行檢測的過程中，高效液相色譜法、質(zhì)譜法和氣相色譜法均十分常見，但均存在一定的不足之處，如氣相色譜法衍生化效率低下、氣質(zhì)聯(lián)用法檢測成本高。而微生物檢測方法憑借其較高的靈敏度和重現(xiàn)性，在食品肌醇含量的測定過程中得到了廣泛使用。基于此，為了充分提升肌醇含量測定的準(zhǔn)確率，本研究運用微生物檢測方法測定了維生素飲料中的肌醇含量，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。

1 食品微生物檢測方法概述

食品微生物檢測是運用微生物學(xué)的理論與方法，檢驗食品中微生物的種類、數(shù)量、性質(zhì)及其對人的健康的影響，以判別食品是否符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法。現(xiàn)階段，食品微生物檢驗方法是食品質(zhì)量管理必不可少的重要組成部分，它貫徹“預(yù)防為主”的方針，可以有效地防止或者減少人畜共患病情況的發(fā)生，保障人民的身體健康。食品微生物檢驗是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，也是判定被檢食品是否食用的科學(xué)依據(jù)之一。通過食品微生物檢驗，可以判斷食品加工環(huán)境及食品衛(wèi)生情況，能夠?qū)κ称繁患?xì)菌污染的程度作出正確的評價，為各項衛(wèi)生管理工作提供科學(xué)依據(jù)。肌醇是人體內(nèi)重要的生長因子，主要以六磷酸酯的形式存在，若人體內(nèi)缺乏含量充足的肌醇，極容易誘發(fā)脫發(fā)和濕疹等病癥。有學(xué)者在研究中證實，肌醇對肝臟生長和骨髓發(fā)育起到了十分重要的作用，有助于實現(xiàn)對心肌細(xì)胞的有效保護(hù)。現(xiàn)階段，在各類保健食品和功能性食品的生產(chǎn)過程中，肌醇已經(jīng)成為一種常見的添加劑。食品是人體攝入肌醇的主要來源，肌醇能有效降低膽固醇和預(yù)防濕疹，對降低肝臟脂肪和預(yù)防動脈硬化起到了十分重要的作用。借助于微生物檢測方法實現(xiàn)對食品中肌醇含量的科學(xué)測定，有助于判斷所攝入食品的健康性和科學(xué)性，為個體飲食結(jié)構(gòu)的合理調(diào)整提供科學(xué)的參考依據(jù)。

2 肌醇的微生物檢測——以維生素飲料為例

2.1 一般資料

微生物檢測試驗所采用的試驗材料主要包含高壓滅菌器、旋渦混合器、離心機以及生化培養(yǎng)箱等設(shè)備。為了保證在檢驗試驗過程中數(shù)據(jù)精準(zhǔn)度，在機械設(shè)備的選擇方面，本文根據(jù)以往試驗開展過程中主要采用的生產(chǎn)品牌類型，選定了擁有質(zhì)量保證的某品牌設(shè)備，同時，根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，選擇某款維生素飲料作為研究對象，對肌醇水平進(jìn)行檢測。

2.2 方法

針對某款維生素飲料所開展的肌醇微生物檢測試驗，主要分為試驗材料制備和試驗培養(yǎng)兩個部分。

（1）試驗人員首先需要進(jìn)行的是肌醇儲備液的制備。在試驗當(dāng)中，試驗人員將已經(jīng)完成干燥處理的標(biāo)準(zhǔn)肌醇物質(zhì)進(jìn)行稱取，稱取數(shù)量為0.005 g，將其放入到容量瓶內(nèi)部，利用蒸餾水對其進(jìn)行定容。容量瓶總?cè)萘繛?50 mL，完成定容后肌醇標(biāo)準(zhǔn)液濃度為每毫升0.2 mg。隨后，試驗人員利用試驗設(shè)備，吸取容量瓶內(nèi)部的肌醇標(biāo)準(zhǔn)液，吸取總量為10 mL，將其加入到容量為200 mL的容量瓶當(dāng)中，再次利用蒸餾水對其進(jìn)行定容。此時，容量瓶內(nèi)部的肌醇溶液濃度為每毫升10 μg，完成中間液制備，將兩組液體共同存放如冰箱中低溫保存。試驗開展時，由試驗人員將中間液取出，進(jìn)行吸取10 mL液吸取，并將兩次吸取中間液分別放入到100 mL容量瓶和50 mL容量瓶內(nèi)部，利用蒸餾水進(jìn)行定容。

（2）與此同時，試驗人員需要同時開展菌液的制備處理。首先選定在無菌環(huán)境當(dāng)中，利用酵母菌進(jìn)行活化，并將其在30 ℃培養(yǎng)基當(dāng)中進(jìn)行24 h培養(yǎng)。為了能夠保證培養(yǎng)活力，在培養(yǎng)當(dāng)中需要培養(yǎng)到二至三代，再將其后代斜面當(dāng)中的菌種作為儲備菌種，放入2 ℃環(huán)境中保存，保存時間控制在半個月以內(nèi)。在開展試驗前一天從保存環(huán)境去除，運用生理鹽水對其進(jìn)行滅菌，使其成為菌懸液，進(jìn)入到離心管內(nèi)部。啟動離心管，進(jìn)行3 min離心處理，每分鐘離心2000轉(zhuǎn)。完成后通過漩渦振蕩器進(jìn)行菌懸液于生理鹽水的混合完成三次以上的洗滌。洗滌完成后，將其加入試管內(nèi)部，借助分光光度計對其波長進(jìn)行測量。測量結(jié)果顯示透光率達(dá)到60%以上時表明該菌懸液的透光率能夠利用增減菌液量的方式來實現(xiàn)調(diào)節(jié)。

（3）完成處理之后，試驗人員需要將已經(jīng)完成制備的肌醇溶液進(jìn)行處理，通過高壓滅菌器對標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行高壓消化，消化時長為一小時，溫度為120 ℃。處理之后將其冷卻至室溫，再利用鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液進(jìn)行調(diào)試，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槲⑺嵝浴H值測試為5，進(jìn)行250 mL量瓶定容。此時，利用蒸餾水-肌醇標(biāo)準(zhǔn)液與已經(jīng)完成測定的培養(yǎng)基共同加入試管當(dāng)中，試管內(nèi)部肌醇含量為0～10 μg。除不含有肌醇（即為0肌醇試管）不進(jìn)行菌懸液接入外，其余試管均加入50 μL菌懸液。開啟漩渦振蕩器對每一個試管進(jìn)行震蕩，使其內(nèi)部肌醇標(biāo)準(zhǔn)液與菌懸液混合，再打開培養(yǎng)箱，調(diào)整培養(yǎng)箱內(nèi)部溫度，溫度達(dá)到30 ℃后，加入混合溶液進(jìn)行培養(yǎng)，并對培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行測量。

2.3 結(jié)果分析

通過對試驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計和分析可以看到，在肌醇變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線當(dāng)中，肌醇試樣0～10 μg試管呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。其中肌醇含量與吸光度之間呈現(xiàn)出正比關(guān)系。通過計算統(tǒng)計可以得出肌醇、吸光度二者變量的回歸方程為y=0.0875x+0.7328，其中相關(guān)系數(shù)R2約為0.994。與此同時，在對所選樣本維生素飲料進(jìn)行平行試驗當(dāng)中，可以透過試驗結(jié)果對所選幾種不同品牌的維生素功能飲料進(jìn)行數(shù)據(jù)觀察，最終得到精密度情況。三組維生素飲料測試樣本雖然存在一定的精密度差別，但是彼此之間差別較小，表明三個品牌維生素飲料內(nèi)部肌醇水平相對接近。除此之外，在所進(jìn)行的回收率試驗方面，通過與其他類型食品試驗的對比分析，能夠較為明顯地觀察到維生素飲料實驗品在肌醇標(biāo)準(zhǔn)溶液方面回收率情況。相比于其他類型食品試驗，維生素飲料的回收率相對穩(wěn)定，大體區(qū)間維持在98.6%～100.3%，準(zhǔn)確度較高。

3 討論

通過試驗方式對維生素飲料試驗樣品進(jìn)行肌醇水平的微生物檢測可以看到，所采用的葡萄汁酵母菌測定方法，具有簡單、實用等特點。所完成的結(jié)果檢出符合微生物測定要求，其檢出限更低、靈敏度更高，保障了檢出結(jié)果的準(zhǔn)確無誤。這些結(jié)果都從側(cè)面證明了微生物操作方法能夠較好地還原食品當(dāng)中肌醇含量水平。但同時，微生物檢測方法所存在的不足之處，也同樣是明顯的。其中檢驗過程復(fù)雜，檢驗標(biāo)準(zhǔn)液、中間液制備過程過于繁瑣。對于實驗室和試驗人員的要求極高，因此所受到的客觀影響因素液較為普遍[1]。

筆者提出，在今后的微生物試驗檢測方法應(yīng)用當(dāng)中，試驗檢測人員需要注重多個方面的檢測細(xì)節(jié)。首先，在器皿的洗滌方面，試驗人員應(yīng)當(dāng)對試驗器皿是否存在污染進(jìn)行觀察，對污染較為嚴(yán)重的器皿，需要選用堿性洗液對其加以洗滌，再利用蒸餾水對其進(jìn)行加熱處理，以保證處理完成后的器皿可以直接應(yīng)用于試驗現(xiàn)場之中[2]。其次，對于應(yīng)用材料葡萄汁酵母菌的活化過程，需要采用專門使用的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基需要保證菌種自身所擁有的生長特點，并維持在一個完全標(biāo)準(zhǔn)化的無菌環(huán)境中進(jìn)行操作。值得注意的是，試驗人員在肌醇測定過程中所采用的培養(yǎng)基，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格控制配制流程，一旦配制流程出現(xiàn)錯誤，很有可能造成培養(yǎng)成功率降低，對測定結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生不利影響。因此，要確保檢測過程的順利進(jìn)行，就要杜絕外界干擾的發(fā)生[3]。

4 結(jié)語

將微生物檢測方法作為測定食品中肌醇含量的主要方法，能夠有效提升檢測的靈敏度，具有方便快捷的優(yōu)勢，且檢測所需時間較短，檢出限較低，與其他檢測方法相比，具有不可比擬的優(yōu)勢，在食品檢測過程中具有較強的推廣價值，值得被廣泛借鑒使用。