青蒿素類化合物檢測分析方法研究進展

（中國藥科大學中藥學院 江蘇省中藥評價與轉化重點實驗室 江蘇 南京 211198）

肖立清 劉吉華（通訊作者）

青蒿素是我國發現并被國際公認的天然抗瘧藥物。青蒿素類化合物分子結構中無共軛結構和發色基團，方法學的開發有較大困難。本文對青蒿素類化合物各類檢測分析方法進行了歸納。

1.化學分析法

青蒿素類化合物均含有過氧橋結構，可以用過氧基的氧化還原性質進行定量分析（如碘量法）。但是準確性低，現應用較少。

2.光譜法

紅外光譜法廣泛用于青蒿素類原料藥及其制劑的鑒別中，該方法不破壞樣品，操作簡單。

3.色譜法

色譜法集分離與在線分析于一體，是目前各國藥典收載最多的方法之一。

3.1 薄層色譜法

薄層色譜法具有成本低、快速、直觀等優點，中國藥典2015年版青蒿素類原料藥和制劑的鑒別方法均收載了薄層色譜法，但其靈敏度、分離能力都不如液相色譜法。

3.2 氣相色譜法

青蒿素類化合物對熱不穩定，在運用氣相色譜法測定時，一般都是基于青蒿素類化合物的分解產物間接定量，通常以氮氣或氦氣作為流動相，無須使用有毒的有機溶劑。

3.3 液相色譜法

3.3.1 與紫外檢測器聯用 青蒿素和稀堿反應可生成化合物Q292，其在292nm波長處具有紫外吸收，進一步酸化堿液，則生成在260nm波長處有紫外吸收的化合物Q260。基于以上原理，可建立柱前衍生或柱后衍生-HPLC法檢測青蒿素類化合物。

3.3.2 與蒸發光散射檢測器聯用 蒸發光散射檢測器響應值不依賴樣品的光學性質，不需要柱前或柱后衍生化，對青蒿素類藥物的檢測提供了新的手段。

3.3.3 與質譜檢測器聯用 液相色譜與質譜聯用技術同時具有液相色譜的高分離能力和質譜的高靈敏度、高專屬性，現已被廣泛應用。S Ali等[1]綜述了近年來蒿甲醚和雙氫青蒿素在生物樣品中的液相分析方法，與HPLC-UV、HPLC-ECD相比，HPLCMS/MS方法靈敏度與準確度更高、選擇性更好。

4.電化學分析法

電化學分析法，基于物質的電化學性質進行檢測，具有操作方便、易于實現自動化的特點。梁邵成等[2]制備了經單壁碳納米管修飾的裸玻碳電極，可提高分析方法的靈敏度。

5.免疫分析法

免疫分析法不需要經過繁瑣的樣品前處理，能快速準確地測定樣品。Y Mitsui等[3]制備抗青蒿琥酯多克隆抗體，建立競爭性酶聯免疫分析法（ELISA），檢測限可達0.1ng/mL。

6.其他方法

各種方法的聯用可以取長補短，如提高靈敏度。化學發光酶聯免疫法，其檢測原理與ELISA相似，經過酶和發光兩級放大，靈敏度得到了很大的提升。Laura Zehnacker等[4]以化學發光酶聯免疫分析法測定血漿中的雙氫青蒿素，最低定量限可達90 pg/mL。

7.結論與展望

隨著科學技術的進步，青蒿素類化合物的檢測分析方法均得到了進一步的提高，但這些方法仍存在不足。伴隨著新型材料的發展和分子印跡技術的成熟，研究者制備出可以特異性識別青蒿素類化合物的分子印跡聚合物[5]，并成功與固相萃取技術等結合起來，若再輔以計算機軟件，這將展現出良好的應用前景[6]。

[1] Ali S, Jafery N,Farhat K,et al.Analysis of Artemether& Dihydroartemisinin by high performance high liquid chromatography in biological fluids-issues & solutions[J].Pak J Pharm Sci, 2017, 30(4):1395-1401.

[2]王輝, 楊培慧, 梁紹成,等.雙氫青蒿素在單壁碳納米管修飾電極的伏安行為與測定[J]. 藥物分析雜志, 2010(3):431-434.

[3] Mitsui Y. Development of a simple and specific direct competitive ELISA for the determination of artesunate using an anti-artesunate polyclonal antiserum[J]. Tropical Medicine & Health, 2016, 44(1):37.

[4] Zehnacker L,Nevers M C,Sinou V,et al.Development of sensitive direct chemiluminescent enzyme immunoassay for the determination of dihydroartemisinin in plasma[J]. Analytical& Bioanalytical Chemistry, 2015, 407(25):7823-7830.

[5] Zhou J.Sensitive Artemisinin Electrochemical Sensor Based on Polymerized Molecularly Imprinted Membranes[J].International Journal of Electrochemical Science, 2016:3114-3122.

[6] Mar M,Kupka T,Wieczorek P P,et al.Computational modeling of molecularly imprinted polymers as a green approach to the development of novel analytical sorbents[J].trac-trends in analytical chemistry, 2018, (98):64-78.