維生素D及其受體水平與結直腸腺瘤的相關性研究

祝行琴

（浙江大學醫學院附屬第二醫院 浙江 杭州 310008）

結直腸癌是一種常見的惡性腫瘤，其在我國的發病率正逐年攀升，尤其在東南沿海等發達地區[1]。而結直腸腺癌是由結直腸腺瘤逐步發展而來，因此，通過研究結直腸腺瘤的發病機制能夠進一步揭示結直腸腺癌的起源。維生素D廣為人知的功能是其調節小腸、骨骼和腎臟對鈣離子的吸收及代謝。近年來，有研究者認為維生素D與結直腸癌有著密不可分的聯系[2]。基于以上研究現狀，本研究旨在探討維生素D及其受體與結直腸癌癌前病變——結直腸腺瘤的相關性。

1.資料與方法

1.1 一般資料

2016—2017年期間收集本院被確診為結直腸腺瘤患者病例45例，其中男性22例，女性23例，年齡36～72歲，獲取其全血標本及組織標本。納入標準：經病理學確診的結直腸腺瘤患者，具有完整臨床和病理資料；無免疫相關疾病或其他原發腫瘤病史。以同時期本院健康查體人群30例作為正常對照組，排除自身免疫相關疾病及長期服用激素者。

1.2 ELISA技術測定血漿維生素D濃度

收集全血標本，離心并取上清，于-80℃長期保存。采用25羥基總維生素D定量測定試劑盒(LIAISON 25-OH Vitamin D TOTAL Assay，DiaSorin Inc.USA)，利用LIAISON化學發光分析儀檢測，試劑盒檢測范圍為4.0～150ng/mL。

1.3 RNA的提取

收集組織用液氮冷凍后于存-80℃長期保存。組織加入Trizol試劑后進行勻漿處理，將組織充分裂解。隨后加入氯仿200μL，劇烈震蕩15s，12000g離心15min，將上清液移至另一離心管中，加入等體積異丙醇冰上沉淀，75%乙醇洗滌、空氣干燥后，以適量DEPC水溶解并檢測RNA的純度及濃度。

1.4 熒光實時定量PCR技術

取上述提取的RNA為模板，首先進行逆轉錄PCR將RNA轉錄成cDNA，再以cDNA為模板進行實時定量PCR。VDR引物上游：CTGACCCTGGAGACTTTGAC，下游：TTCCTCTGCACTTCCTCATC。反應條件：變性95℃ 5s、退火55℃ 15s、延伸72℃ 20s，40個循環。以2-△△Ct法分析目的基因相對表達量。

1.5 統計學處理

采用SPSS20.0進行數據分析。正態分布資料以均數±方差描述，兩組比較采用兩獨立樣本t檢驗；非正態資料以中位數(IQR)表示，兩組比較采用Mann-whitney U檢驗分析。

2.結果

2.1 維生素D在結直腸腺瘤患者中低表達

經檢測，正常組血漿中25-OH-D的濃度（41.35ng/ml±4.570ng/ml）明顯高于結直腸腺瘤組（22.28ng/ml±2.445ng/ml，P＜0.01）；同時，我們將腺瘤組的血漿維生素D濃度與患者的年齡、性別、吸煙、飲酒、腫瘤的部位、大小、病理類型等進行相關性分析，發現均無相關性。而將維生素D缺乏作為獨立危險因素進行分析，其腺瘤組表現為（OR：4.875；95%CI：2.144～11.084）。

2.2 維生素D受體在結直腸腺瘤患者中低表達

以正常組的組織作為參照，正常組織VDRmRNA的表達水平（1.00±0.22）明顯高于腺瘤組織（0.52±0.08，P＜0.01），但結直腸腺瘤組織中VDRmRNA的表達與患者的年齡、性別、吸煙、飲酒、腫瘤大小、病理類型等的關系，我們未發現其相關性。

3.討論

有文獻報道稱維生素D缺乏是結直腸癌的危險因素，研究發現循環血中25-(OH)D的水平與大腸癌的患病風險呈負相關[3]。而本研究中兩組血漿維生素D比較來看，正常組明顯高于腺瘤組（P＜0.01），將維生素D缺乏作為危險因素計算出腺瘤組（OR：4.875；95%CI：2.144～11.084），研究結果進一步說明維生素D在腺瘤形成的時期便開始減少，并貫穿從腺瘤到腺癌的過程，可以作為結直腸腺瘤的獨立危險因素。而維生素D發揮生物學效應的重要條件之一便是與維生素D受體相結合。有研究證實，維生素D能在結腸腺癌細胞中與維生素D受體結合，從而通過調節下游靶基因如MYC、EGFR等，促進腫瘤細胞的凋亡，從而抑制細胞增殖[4]。因此，若缺乏維生素D受體，則即使補充維生素D也無法發揮抗腫瘤的作用。結合本研究中的發現，腺瘤組織中的維生素D受體表達顯著降低（P＜0.01），這說明維生素D受體表達水平的降低從結直腸腺瘤階段已經發生了，并貫穿結直腸癌癌變的過程。在結直腸腺瘤患者中維生素D受體表達的底下以及血漿維生素D水平的降低共同影響促進了腺瘤的發生發展并進一步促進腺瘤向腺癌發展的進程。

綜上所述，血漿維生素D可作為結直腸腺瘤的危險因素，維生素D或可作為預防結直腸腺瘤的藥物，但由于服用高劑量的維生素D存在高鈣血癥的風險，因此在注重提高維生素D攝入量的同時再提高維生素D受體的水平使之能更好地結合共同發揮抗腫瘤作用，同時也能不引起高鈣血癥。另一方面，由于維生素D缺乏在正常人群中也普遍存在[5]，將維生素D作為結直腸腺瘤的診斷標志物并不合適。

[1]代珍,鄭榮壽,鄒小農，等.中國結直腸癌發病趨勢分析和預測[J].中華預防醫學雜志, 2012, 46(7): 598-603.

[2] Ranji P,Akbarzadeh A,Rahmati-Yamchi M.Associations of Probiotics with Vitamin D and Leptin Receptors and their Effects on Colon Cancer[J].Asian Pac J Cancer Prev.2015;16(9):3621-7.

[3] Jenab M,Bueno-de-Mesquita HB,Ferrari P,et al.Association between pre-diagnostic circulating vitamin Dconcentration and risk of colorectal cancer in European populations:a nested case-control study[J]. BMJ. 2010,340:b5500.

[4]方瑩,宋皓軍,丁小云. 維生素D抗結直腸癌的研究進展[J].腫瘤, 2014; 11:1064.

[5] Khadilkar VV,Khadilkar AV.Use of Vitamin D in Various Disorders[J]. Indian J Pediatr.2013;80(3):215-8.