特殊染色、免疫組化技術結合用于腫瘤病理診斷中的價值

陳惠芹

（廈門大學附屬第一醫院杏林分院病理科，福建 廈門 361002）

腫瘤為臨床常見疾病，近年來人們生活習慣不斷改變，飲食結構逐漸調整，不良行為習慣逐漸暴露，導致患病人數越來越多，且呈現出年輕化趨勢。本病早期癥狀不典型，確診后多數為中晚期，導致最佳治療時機被錯過。臨床診斷腫瘤的主要方法為病理診斷，如活檢穿刺診斷，此為金標準，雖然可以明確病灶分期與類型等，但該方法具備有創傷性，導致患者痛苦感明顯，有較差的依從性，因此臨床迫切尋找一種理想的診斷方法。磁共振、CT為臨床常用診斷方法，雖然可以確診但是有較高概率導致漏診或誤診。近年來臨床大量實踐證實免疫組化技術病理診斷腫瘤臨床價值較高[1-3]，且該技術將抗原修復技術、敏感檢測系統及自動免疫染色系統等充分融合，故而廣受臨床關注。另有文獻稱該技術聯合特殊染色病理診斷腫瘤臨床價值更高，便于臨床制定診治方案[4]。基于此選取70例患者，詳述特殊染色聯合免疫組化技術病理診斷腫瘤的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2016年8月至2017年8月于我院就診的腫瘤患者70例，均經影像學檢查、手術病理等確診為惡性腫瘤。其中男性39例，男性31例，年齡為36～78歲，平均年齡為（49.2±8.3）歲；腫瘤類型：轉移性腫瘤35例，原發性肝癌15例，血管瘤8例，內膽管瘤12例。

1.2 方法：所有患者先行活檢穿刺診斷，結合病灶位置與類型開展針對性穿刺活檢，于超聲引導下開展，將病變組織取出后比較于標準組織，而后使用免疫組化技術聯合PAS特殊染色、網狀纖維染色：①免疫組化技術：試劑主要有中性福爾馬林固定液、脫水液、透明液、浸蠟液、MaxVisionTM試劑盒、DAB試劑盒。取組織塊大小2 cm×1.5 cm×（0.2～0.3 cm）。加固定液固定6～8 h，過度固定可降低抗原的活性。經脫水、透明、浸蠟包埋過程，切片厚度為2～3 μm，應用防脫載玻片。特殊染色組織只需用普通載玻片。免疫組化染色處理切片組織，常規切片脫蠟后用檸檬酸抗原修復液高壓抗原修復法修復，將配制好的檸檬酸抗原修復液加入壓力鍋中，放置于電磁爐上大功率加熱至沸騰，將切片至于耐高溫深色架上，放入已沸修復液中，蓋鍋蓋，扣壓力閥，繼續加熱至壓力閥開始噴氣，計時2 min，而后將壓力鍋移離電磁爐，室溫自然冷卻。PBS沖洗2×3 min，加入Glypican-3抗體，室溫孵育60 min，PBS沖洗3×4 min，除去PBS液滴加1滴即用型MaxVisionTM試劑，室溫孵育15 min后PBS沖洗3×3 min，除去PBS液滴加DAB顯色液，顯微鏡下觀察3 min，水洗，水沖返藍，酒精透明，用樹膠封固。同時開展特殊染色處理，二甲苯脫蠟至水處理切片組織，分別行PAS特殊染色、網狀纖維染色。

1.3 判定標準：免疫組化技術處理后用GLypican-3判定結果，陽性標準為染色成棕黃色。特殊染色陽性標準按照陽性細胞數目與染色強度之乘積，前者＜1%為0分，1%～9%為1分，10%～33%為2分，34%～66%為3分，＞66%為4分；后者主要依據陽性細胞染色強度，無為0分，弱為1分，中等強度為2分，強著色為3分。得出乘積后按照如下標準判定：0分為陰性，1～4分為1+，5～8分為2+，9～12分為3+[5]。

1.4 統計學方法：應用軟件SPSS19.0對上述數據開展統計學分析，[n（%）]表示計數資料，卡方檢驗開展樣本率比較，差異有統計學意義用P＜0.05表示。

2 結 果

兩種方法診斷結果比較及聯合診斷陽性率分析，見表1。

表1 兩種方法診斷結果比較及聯合診斷陽性率分析（n=70）

3 討 論

免疫組化技術類似于特殊染色與電鏡觀察，在診斷疑難病例時該技術應用廣泛。免疫組化染色對腫瘤患者開展病理診斷的基礎在于HE切片，需前面細致觀察HE切片后結合抗體條件與實驗室實際需求篩查實驗期間所需抗體，以準確診斷。在光鏡缺乏的情況下需深入觀察HE切片以了解腫瘤組織，若僅依靠免疫組化技術病理診斷腫瘤則可能導致誤診。在判定結果時要基于細胞形態學，但不能忽視臨床醫師的工作經驗。比如在診斷淋巴瘤時強調免疫組化、臨床資料及形態學特征的融合，免疫組化技術的使用目的在于補充形態學價值，但無法取代形態學作用，一般而言免疫組化主要是用來明確細胞來源及分化程度，而臨床診斷腫瘤的重要指標為形態學[6-7]。

在實驗室病理診斷期間還要合理選擇抗體，一般實驗室抗體主要有上皮類、軟組織類、神經內分泌細胞類、淋巴細胞類等抗體，在選擇時要盡量節約成本，結合實際要求合理選擇。人體腫瘤類型較多且形態各異，結合腫瘤大小與形態有上皮樣細胞、多形性腫瘤細胞、大細胞、梭形細胞等類型，因此在選擇抗體時還需與腫瘤類型相結合。在判定診斷結果時要注意的是各種抗體均可能出現異樣表達現象，因此要結合影像學檢查、臨床癥狀及醫師經驗等合理診斷。本組結果表明免疫組化診斷陽性率為92.8%，陽性率較高，但還是存在無法明確判斷腫瘤具體病理狀況的現象，為提高診斷準確率臨床還會與特殊染色聯合使用。如網狀纖維染色，機體各個器官組織中均存在網狀纖維，通過染色可對病變組織網狀纖維疏密、數量、粗細及是否塌陷、斷裂等變化予以觀察，有利于臨床判斷疾病程度、性質及發展情況，還有利于評估治療轉歸[8]。本組結果表明PAS特殊染色為2.0%，網狀纖維染色為91.4%，聯合檢測為100.0%，說明特殊染色聯合免疫組化技術病理診斷腫瘤準確率高，有推廣價值。

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