參黃補益顆粒的含量測定方法研究

陳 婷

（福建省腫瘤醫院藥劑科，福建 福州 350014）

近年來，中藥藥理、藥效研究表明，補益氣血的中藥能促進骨髓造血功能的修復，促進放化療等引起的骨髓功能損傷的修復，從而提高癌癥患者的生活質量并延長其生存期[1]。參黃補益顆粒的處方是中醫科專家長期在臨床使用的驗方，由湯劑制成顆粒劑，本處方是由黃芪、淫羊藿等幾味中藥組成，具有益氣生血，補腎填精的功效。適用于放、化療后白細胞減少，貧血及免疫功能低下者。本研究采用HPLC法測定參黃補益顆粒中淫羊藿苷的含量[2]。

1 儀器與試藥

Agilent1200型快速液相色譜儀（美國安捷倫），RE-2000型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠），HHS21-8電熱恒溫水浴鍋（北京長安科學儀器廠），LIBRORAEU-210型電子天平（日本島津），SHZ-ⅢB型循環水真空泵（上海亞榮生化儀器廠），DHG-9145A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒新科技有限公司）。

淫羊藿苷對照品（批號：110737-200415，含量測定用），黃芪、淫羊藿、甘草、肉蓯蓉等藥材購于福建省尤溪仙錦藥業有限公司，黨參購于安徽省本草國藥飲片有限公司，乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 參黃補益顆粒的制備：取處方量黃芪、黨參、淫羊藿、肉蓯蓉、甘草等，加80%乙醇浸泡0.5 h，回流提取2次，每次1.5 h，合并提取液。將提取液濃縮至適量；加入阿膠粉、糊精、甜菊苷及水適量，混勻，制成顆粒，干燥，制成1000g，即得。制得的本品為褐色或棕褐色的顆粒或粉末，氣香、味甘。依據《中國藥典》2015年版一部附錄ⅠC顆粒劑下規定，對制得的三批樣品（101112、101114、101116）的粒度、水分、溶化性進行了檢查，三批樣品粒度均＜15%，水分＜6%，均在5min內全部溶化，符合藥典規定，檢查合格。

2.2 色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（伊利特 Hypersil ODS2，4.6 mm×200 mm，5 μm），流動相A為0.2%磷酸溶液，流動相B為乙腈，按下表1進行梯度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測波長270 nm，柱溫40 ℃[3]。淫羊藿苷分離度為1.63，分離良好，理論塔板數為170339。見表1。

表1 梯度洗脫

2.3 樣品提取方法。對照品儲備液的制備：精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加入甲醇，制成每1 mL含40 μg淫羊藿苷的溶液，即得。

供試品溶液的制備：稱取參黃補益顆粒約2.5 g于25 mL容量瓶中，加入適量的蒸餾水，超聲直至顆粒完全溶解后，取出，放冷至室溫，然后加入流動相稀釋至刻度，搖勻，所得即為供試品溶液。

陰性對照液的制備：除藥物外，稱取其他各原料按相同方法制成顆粒，按照供試品溶液的制備方法制備，即得。

結果見圖1，表明除藥物外的其他原輔料對測定無干擾，淫羊藿苷的保留時間約為28.6 min。

2.4 線性關系考察：精密量取上述淫羊藿苷對照品儲備液各0.5、1.0、2.0、5.0、7.0 mL分別于10 mL量瓶中，加入流動相稀釋至刻度，搖勻，連同儲備液本身，制得濃度10.0～200.0 μg/mL的淫羊藿苷對照品溶液。過濾，精密吸取各濃度對照品溶液的續濾液10 μL進樣，按上述色譜條件進行分析。以峰面積對對照品溶度進行線性回歸，淫羊藿苷的線性方程為A＝14.38C－0.058，r=0.999 9，結果表明，在10.0～200.0 μg/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.5 加樣回收率試驗：精密稱取參黃補益顆粒9份，每份0.3g，分別加入淫羊藿苷對照品適量，按上述方法制備高、中、低濃度的供試品溶液各3份，精密吸取10 μL進樣分析。按下式計算回收率，結果表明淫羊藿苷的回收率均在95%～105%，RSD值均＜2%，結果符合要求。

式中 A為樣品中被測成分含量 B為加入對照品量 C為實際測出成分含量

圖1 參黃補益顆粒HPLC色譜圖

2.6 重復性試驗：制備供試品溶液6份，每份精密吸取10μL其續濾液，進樣測定淫羊藿苷的峰面積。結果，RSD值為0.77%，表明該方法重現性符合規定。

2.7 精密度試驗：制備供試品溶液，精密吸取10 μL其續濾液，連續進樣6次，測定淫羊藿苷的峰面積。結果RSD值＜2%，表明該方法精密度良好。

2.8 穩定性試驗：精密吸取“2.7”項下的供試品溶液，每隔2 h進樣1次，測定淫羊藿苷的峰面積，結果RSD值為0.29%，實驗結果表明供試品溶液在10 h內穩定。

2.9 樣品測定：取參黃補益顆粒劑三批樣品（101112、101114、101116）制備供試品溶液，按外標法計算供試品中各有效成分含量，結果見表2。

表2 三批樣品測定結果（n＝3）

3 討 論

本處方中的黃芪、黨參、淫羊藿、甘草、肉蓯蓉等對白細胞介素-2（IL-2）、腫瘤壞死因子（TNF）等細胞因子具有誘生作用并可以提高其活性，進而誘導腫瘤細胞凋亡。臨床使用的湯劑煎液體積大，味苦，服用攜帶不便且易發霉不能久貯，本研究將其制成顆粒劑后，既保持了湯劑吸收快，顯效迅速的特點且其體積小，運輸、攜帶、服用方便，同時加入的矯味劑甜菊苷掩蓋了中藥的苦味，提高了患者的依從性。淫羊藿苷是淫羊藿的主要成分，因此我們選擇淫羊藿苷作為質量控制標準[4]，方法簡便、快速，而且結果可靠，可對參黃補益顆粒的質量進行控制。

[1] 陳義萍,徐勇.補中益氣湯治療腫瘤研究進展[J].亞太傳統醫藥,2016,12(16)：65-67.

[2] 龍國友,李開斌,劉興鵬,等.HPLC法測定芪膠升白膠囊中朝藿定C和淫羊藿苷的含量[J].藥物分析雜志,2015,35(4)：719-722.

[3] 俞吉,朱裕林,桑冉,等.高效液相色譜法測定骨疏靈顆粒中淫羊藿苷含量[J].實用藥物與臨床,2015,18(6)：691-693.

[4] 楊炳川,楊浩然,方應權,等.HPLC法測定復方玄駒膠囊中淫羊藿苷的含量[J].中國藥房,2015,26(9)：1282-1283.