麻風樹葉提取物體外抗蠕形螨活性及皮膚安全性的實驗研究

錢 江，陳錦珊，文 磊，洪小蘭，田雅蘭

·論 著·

麻風樹葉提取物體外抗蠕形螨活性及皮膚安全性的實驗研究

錢 江，陳錦珊，文 磊，洪小蘭，田雅蘭

目的探討麻風樹葉治療蠕形螨病的應用價值。方法用80%乙醇熱回流提取法提取麻風樹葉提取液。取蠕形螨感染者面部皮脂，分離并鑒定蠕形螨備用。設不同濃度麻風樹葉實驗組、2%濃度的甲硝唑對照組和生理鹽水對照組，進行體外抗螨實驗。pH儀測定不同濃度麻風樹葉提取物pH值。設麻風樹葉實驗組和75%乙醇對照組，用健康家兔進行皮膚刺激實驗和急性皮膚毒性實驗。結果50、25、12 mg/ml麻風樹葉組與2%甲硝唑組毛囊蠕形螨死亡時間分別為（1.55±0.67）min、（1.61±0.67）min、（2.47±0.80）min和（1.20±0.48）min。50、25 mg/ml麻風樹葉組以及2%甲硝唑組兩兩之間差異無統計學意義（P均＞0.05）。50、25、12 mg/ml麻風樹葉提取液pH值分別為6.07±0.73、6.27±0.82、6.35±0.83，對家兔完整皮膚及破損皮膚刺激評分均為0，且無明顯毒性。結論麻風樹葉提取物具有較強的體外抗蠕形螨活性且具有皮膚安全性。

麻風樹葉；蠕形螨；抗螨

人體蠕形螨病多表現為面部皮膚病，治療多采用依維菌素、甲硝唑等化學藥物[1]，但治療效果不穩定。麻風樹大量野生于我國南方，是民間常用藥物，全身均可入藥，根、莖、皮及葉外用能起到止血、消腫散淤、殺蟲止癢的作用。已有實驗研究發現麻風樹提取物具有體外抗病毒和殺菌的作用，麻風樹全株有殺滅釘螺作用[2-3]。本實驗對麻風樹葉提取物體外抗蠕形螨活性及其皮膚安全性進行了初步研究。

1 對象與方法

1.1 蠕形螨的獲取 選4周內未經任何抗螨治療的中、重度蠕形螨感染患者，在室溫（25～30℃）適應1 h，經常規消毒后，用一次性刺血針鈍端用擠壓刮拭法刮取患者面部皮脂并置于潔凈載玻片上。

1.2 實驗動物來源 選取廈門大學動物實驗中心提供的成年、健康、無皮膚性疾病的清潔級家兔（體質量2.0～2.5 kg）進行實驗。

1.3 材料與試劑 載玻片（25.4mm×75.6mm，1.0～1.2mm）、蓋玻片（24mm×24mm，0.13～0.17mm）均為鹽城市弘達醫學器材有限公司產品，一次性刺血針為重慶華鴻醫療器械有限公司產品。95%乙醇（江西草珊瑚消毒用品有限公司產品，批號：20150917）。pH計為貝爾分析儀器（大連）有限公司BPH-210型實驗室pH計。麻風樹葉由漳州市林業局苗圃培育中心收集提供，并均經廈門大學醫學院中藥教研室鑒定。

1.4 麻風樹葉提取物的制備 取麻風樹葉20 g，清洗后分別干燥、粉碎，用80%乙醇熱回流提取的方法制備提取物，減壓回收至乙醇無醇味。制成200 mg/ml藥液。無菌生理鹽水將麻風樹提取液稀釋為50、25、12 mg/ml 3個濃度備用。甲硝唑制成2%濃度的甲硝唑溶液。

1.5 藥液pH值測定 分別提取10次麻風樹葉提取物，在20℃、70%濕度下測定50、25、12 mg/ml濃度麻風樹葉的pH值，每個樣品平行測定3次，數值用±s表示。同樣方法測定對照組75%乙醇的pH值。

1.6 體外抗螨實驗 實驗隨機分為5組，實驗組為麻風樹葉提取液50、25、12 mg/ml濃度組，陰性對照為生理鹽水組，陽性對照為2%甲硝唑藥物組。每組各觀察蠕形螨15只。在（28±1）℃室溫進行。首先將刮取的皮脂均勻涂于各載玻片上，將光學顯微鏡（40×）下鑒定活動良好的蠕形螨，調至視野中央，滴加等量藥液與皮脂混勻，使之與蟲體充分接觸，加蓋玻片，然后跟蹤觀察并詳細記錄其活動變化和死亡的時間（從蠕形螨接觸藥液開始至死亡經歷的時間）。蠕形螨顎體、足及末體停止活動超過1 min即判為死亡。

1.7 皮膚刺激實驗 按照文獻[4-5]方法進行。

1.7.1 皮膚準備 家兔分為4組，每組8只，雌雄各半，適應環境2 d，標記后分籠飼養。于給藥前24 h，先用手術剪刀在家兔背部兩側各剪出2.5cm×2.5cm面積的皮膚，再用備皮刀剃凈兔毛，不可損傷表皮。無毛區左右對稱，一側用刺血針作“井”字形劃痕的“破損皮膚”，以劃破皮膚、滲血為度。另一側為完好無破損的“完整皮膚”。

1.7.2 給藥 取的濃度為50、25、12 mg/ml麻風樹葉提取液各0.2 ml，分別涂抹于“完整皮膚”和“破損皮膚”的2.5cm×2.5cm的面積區內，涂藥后濕巾覆蓋，用無刺激膠布固定，重復施藥，24 h內共施藥4次，每次0.2 ml，保證濕巾濕潤。給藥24 h后觀察結果。以75%乙醇作陽性對照。

1.7.3 結果觀察 分別用溫開水除去受試藥物后，于1、24、48 h觀察受試部位有無紅斑、水腫等變化，根據皮膚刺激反應評分標準（表1）進行評分，并計算積分，積分值=（Σ1＋Σ2）/合計動物數。然后依皮膚刺激強度評價表（表2）評價麻風樹葉提取物對皮膚的刺激強度。

1.8 急性皮膚毒性實驗 按照文獻[6]方法進行。

1.8.1 皮膚準備及給藥 家兔分為4組，每組8只，雌雄各半，去毛及給藥方法同皮膚刺激性實驗。

表1 皮膚刺激反應評分標準Table 1 Scoring standard of dermal irritation

表2 皮膚刺激強度評價Table 2 Evaluation form of skin stimulus intensity

1.8.2 結果觀察 貼敷24 h后用溫開水除去殘留藥物。給藥后詳細觀察并記錄動物的行為表現和死亡情況，包括皮膚、毛發、黏膜及眼睛的改變，循環、呼吸和中樞神經系統、四肢活動、自主活動及行為方式等相關變化，尤其注意有無流涎、震顫、驚厥、嗜睡、昏迷、腹瀉等現象，連續觀察2周。實驗過程中死亡的動物和/或有出現毒性反應的動物均進行病理組織學鏡檢。以75%乙醇作為對照。

1.9 統計學處理 以SPSS 21.0統計軟件進行統計分析，正態分布的計量資料以±s表示。采用單因素方差分析進行多組間比較，SNK法進行兩兩組間比較。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 pH值測定 見表3。

2.2 體外抗螨實驗 如表4所示，麻風樹葉組蠕形螨死亡時間明顯短于生理鹽水組。50、25、12 mg/ml麻風樹葉組與2%甲硝唑組蠕形螨死亡時間分別為（1.55±0.67）min、（1.61±0.67）min、（2.47±0.80）min和（1.20±0.48）min，50、25 mg/ml麻風樹葉組之間以及與2%甲硝唑組之間差異無統計學意義。12 mg/ml麻風樹葉組與50、25 mg/ml麻風樹葉組、2%甲硝唑組之間差異均有統計學意義（P均＜0.05）。生理鹽水組死亡時間均＞120 min。蠕形螨死亡記錄顯示：麻風樹葉提取物作用于蠕形螨后，螨的體位逐漸固定，足和螯肢停止活動。死亡后可見螨體收縮或破裂，破裂后外周有油滴樣堆積物。

表4 不同藥物作用下抗毛囊蠕形螨死亡時間（min）Table 4 Survival time of follicle mites under the action of different drugs (min)

2.3 皮膚刺激性實驗 麻風樹葉提取物對家兔的完整皮膚和破損皮膚均無刺激性（表5）。

表5 皮膚刺激實驗結果Table 5 The result of skin irritation test

2.4 急性皮膚毒性實驗 給藥后2周內實驗組和對照組實驗家兔活動正常，皮膚、毛發、黏膜、眼睛無明顯改變，循環、呼吸和中樞神經系統等方面未見異常變化，初步顯示麻風樹葉提取物經皮膚短期接觸吸收后未產生急性毒性作用。

3 討 論

蠕形螨俗稱毛囊蟲，分毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨2種，通過直接與間接方式傳播，人群普遍易感。蠕形螨可破壞皮脂腺、毛囊，引起皮脂排出通道堵塞，造成局部皮膚病理損害，常繼發細菌感染，引起毛囊炎、酒渣鼻、痤瘡、脂溢性脫發等表現。從健康或者醫學美容的角度出發，蠕形螨的防治日益引起重視[7-9]。蠕形螨繁殖力強，迅速向臨近毛囊遷徙，至今尚無特效藥治療[10]。

麻風樹又名小油桐、芙蓉樹、黃腫樹、假花生、嗎哄罕、亮桐、南洋油桐，屬大戟科麻風樹屬植物，主要分布于熱帶和亞熱帶地區，在我國分布于云南、貴州、廣東、四川、廣西、福建等省區。現代藥理研究表明，麻瘋樹的莖、葉、皮的白色乳劑內含有毒蛋白、酮類、氰氫酸與川芍嗪等成分；果仁含油、蛋白質、多種氨基酸、萜類、酮類、醇類物質及衍生物以及蛋白質和多膚等物質。具有營養、抗菌、殺病毒、殺蟲、抗腫瘤、保健等作用。作為一種新興的資源植物，麻瘋樹在新藥開發方面具有巨大的研究價值。

本研究結果初步表明，麻風樹葉提取物具有體外抗蠕形螨作用。50、25 mg/ml麻風樹葉提取液的體外抗蠕形螨效果與2%甲硝唑無明顯差異。12 mg/ml麻風樹葉提取液體外抗蠕形螨效果差于2%甲硝唑。初步表明麻風樹葉提取液體的抗螨效果與其濃度相關。體外安全性實驗顯示：麻風樹葉提取物對家兔的破損皮膚和完整皮膚均未引起紅斑、水腫等過敏性反應，提示麻風樹葉提取物對皮膚無刺激性。麻風樹葉提取物對家兔破損皮膚和完整皮膚均無急性皮膚毒性反應，提示麻風樹葉提取物短期作用不會產生毒性反應。50、25、12 mg/ml麻風樹葉提取液pH值完全符合適應皮膚的最佳pH值范圍（4.5～6.6），不會破壞皮膚表面的弱酸環境對酸、堿的一定的緩沖能力，因此不會導致皮膚的衰老和損害[11]。

綜上所述，麻風樹葉提取物具有較強的體外抗螨作用，且具有皮膚安全性，若能進一步進行臨床研究，有望開發研制成新的抗螨藥物。

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Anti-demodecidosis activity and skin safety ofJatropha curcas.lleaves extractin vitro

QIAN Jiang,CHEN Jin-shan,WEN Lei,HONG Xiao-lan,TIAN Ya-lan
Department of Dermatology,175 Hospital of PLA/ Affiliated Southeast Hospital of Xiamen University,Zhangzhou 363000,China

ObjectiveTo test the application value of the extract ofJatropha curcas.lleaves in treatment of demodecidosis.MethodsJatropha curcas.lleaves were extracted with 80% ethanol by using heat reflux method.Facial sebum specimen from demodecidosis-infected patients were used to isolate and identify demodecidosis.Different concentration groups ofJatropha curcas.lleaves,2% metronidazole control group and physiological saline control group were defined.The anti-demodecidosis experiment was performedin vitro.The pH value of different concentrations ofJatropha curcas.lleaves extract was determined.Skin irritation test and acute skin toxicity test were carried out in healthy rabbits,andJatropha curcas.lleaves and 75% ethanol served as experiment and control groups,respectively.ResultsThe mite-killing time was (1.55±0.67) min with 50 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract,(1.61±0.67) min with 25 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract,(2.47±0.80) min with 12 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract,and (1.20±0.48)min with 2% metronidazole.There was no significant different between 50,25 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract groups and 2%metronidazole group (P＞0.05).The pH value was 6.07±0.73 of 50 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract,6.27±0.82 of 25 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract and 6.35±0.83 of 12 mg/mlJatropha curcas.lleaves extract.Score for irritation to normal and wounded rabbit skin was both 0,and acute toxicity test showed no significant toxicity.ConclusionsJatropha curcas.lleaves extract shows a remarkable activity to demodecidosis with skin safetyin vitro.

Jatropha curcas.lleaves; demodecidosis; anti-demodecidosis

R757.3

A

1007-8134(2017)06-0355-03

10.3969/j.issn.1007-8134.2017.06.010

漳州市自然科學基金（ZZ2014J33）

363000 漳州，解放軍第一七五醫院 廈門大學附屬東南醫院皮膚科（錢江、陳錦珊、洪小蘭、田雅蘭）；361000，廈門大學醫學院中醫系（文磊）

（2017-09-26收稿 2017-10-25修回）

（本文編輯 張云輝）