產β-葡萄糖苷酶芽孢桿菌的篩選及水解大豆異黃酮糖苷研究

劉宏麗，郭曉軍，狄聰穎, 郭威，朱寶成

(河北農業大學 生命科學學院，河北 保定 071000)

產β-葡萄糖苷酶芽孢桿菌的篩選及水解大豆異黃酮糖苷研究

劉宏麗，郭曉軍，狄聰穎, 郭威，朱寶成

(河北農業大學 生命科學學院，河北 保定 071000)

為獲得能高效水解大豆異黃酮糖苷的芽孢桿菌，利用七葉苷平板分離法從動物的新鮮糞便中篩選產β-葡萄糖苷酶的芽孢桿菌菌株，然后對酶活最高的菌株進行種屬鑒定和水解大豆異黃酮糖苷的研究.結果顯示：篩選到1株酶活力較高的芽孢桿菌R2-2，經鑒定為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)；該菌株有較高的糖苷水解能力，黃豆苷水解率最高達到53.65%，染料木苷為48.80%.

β-葡萄糖苷酶；芽孢桿菌；篩選；大豆異黃酮糖苷

大豆異黃酮(soybean isoflavones)具有較好的抗氧化、延緩衰老、防癌抗癌、增強免疫力及改善動物生產性能等功能[1-3]，已被廣泛應用于生物、飼料、醫藥和食品保健等領域.大豆中天然存在的大豆異黃酮通常以3種游離苷元、9種結合型糖苷形式存在，其中結合型糖苷約占總量的97%～98%，游離型苷元僅占2%～3%[4-5].豆粕中的大豆異黃酮以糖苷形式存在，而具有生理活性的成分主要是大豆異黃酮的游離苷元，只有轉化為苷元，才能提高大豆異黃酮的活性[6].β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase)可水解結合于末端非還原性的β-D-糖苷鍵，同時釋放葡萄糖和相應配基[7].目前獲得的高活性大豆異黃酮糖苷水解酶主要來源于植物和微生物[8-9].微生物法轉化大豆異黃酮因具有反應條件溫和、轉化率高、不易變性、成本低、無污染等優點而成為研究熱點.

本實驗旨在篩選出產β-葡萄糖苷酶的芽孢桿菌，能夠高效水解大豆異黃酮糖苷為游離苷元，為提高豆粕中大豆異黃酮的活性提供菌種材料.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

新鮮獺兔糞樣：來源于河北農業大學生命科學學院制藥工程實驗室.

1.1.2 培養基

纖維二糖培養基：酵母膏 2.5 g，纖維二糖 2.5 g，蛋白胨 2.5 g，(NH4)2SO41.0 g，KH2PO40.5 g，MgSO40.2 g，pH 7.2，蒸餾水1 000 mL[10].

七葉苷篩選培養基：酵母膏 5.0 g，蛋白胨 15.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂20.0 g，體積分數為0.1%的七葉苷和3 g/L檸檬酸高鐵銨，pH 7.0，蒸餾水1 000 mL[11].

產酶發酵培養基：蛋白胨10.0 g，酵母膏5.0 g，NaCl 3.0 g，Mandels微量元素溶液(1 000×)，pH自然，蒸餾水1 000 mL.

1.2 產β-葡萄糖苷酶芽孢桿菌的篩選

1.2.1 富集培養

取新鮮糞便樣品1.0 g置于99.0 mL加玻璃珠的滅菌生理鹽水中，振蕩30 min，接種于纖維二糖培養基中，37 ℃、180 r/min培養24 h.

1.2.2 篩選

取1.0 mL富集培養液進行梯度稀釋，然后取10-7～10-4倍稀釋液涂布七葉苷篩選平板，37 ℃倒置培養2～3 d，觀察并挑選出菌落周圍或背面顯現黑色的菌落.將初篩分離得到的菌株接種于產酶發酵培養基，培養48 h后離心取上清液，采用DNS法測定酶活力[11-12].每個菌株進行3次重復.選取酶活力最高的菌株進行后續研究.酶活單位采用國際定義方法：在實驗條件下，1 mL酶液每min分解底物生成1 μmol葡萄糖所需酶量定義為1個酶活單位，用U/mL表示.

1.3 菌株種屬鑒定

1.3.1 形態特征

將菌株接種于NB培養基及NA平板培養基上，分別進行菌體及菌落形態觀察.菌株革蘭氏染色、芽孢染色參考文獻[13]進行.

1.3.2 16S rRNA基因序列測定、分析及系統進化樹構建

細菌基因組DNA 的提取和 16S rRNA基因的擴增參照楊繼業[14]的方法，PCR產物送交北京華大基因科技股份有限公司進行測序.與EzBioCloud數據庫中的核苷酸序列進行在線同源性序列分析，選取同源性較高的序列，采用MEGA.5軟件進行多序列比對，建立進化樹.

1.3.3 生理生化特性測定

根據菌株的16S rRNA基因序列分析的初步結果，依據文獻[15]進行生理生化特征的測定，觀察并記錄結果.

1.4 水解大豆異黃酮糖苷研究

大豆異黃酮糖苷水解方法參考文獻[16].

大豆異黃酮糖苷水解率計算公式W=(A-B)/A×100%.

式中，W為大豆異黃酮水解率；A為酶解前大豆異黃酮糖苷含量；B為酶解后大豆異黃酮糖苷含量.

高效液相色譜分析條件為色譜柱：Waters C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)；流速：0.8 mL/min；檢測波長：260 nm；進樣量：20 μL；柱溫：30 ℃；流動相：體積分數為0.1%的冰醋酸+乙腈∶甲醇∶水=30∶10∶60(體積比).

2 結果與分析

2.1 β-葡萄糖苷酶產生菌的篩選

由于七葉苷(6,7-2-羥基-香豆素-β-D-葡萄糖苷)被β-葡萄糖苷酶分解會釋放出七葉素(6,7-2-羥基-香豆素)，七葉素能與Fe3+反應形成黑色化合物，可依據菌落背面或周圍顯現黑色來篩選產β-葡萄糖苷酶的菌株，如圖1.經纖維二糖培養基富集培養后，利用七葉苷分離培養基分離篩選、純化獲得18株產酶較高的菌株.

圖1 菌株篩選結果Fig.1 Screening results of aesculin separation culture medium

將初篩獲得的菌株進行產酶發酵，提取粗酶液，按照酶活測定方法繪制葡萄糖標準曲線，測定菌株酶活，進行復篩.葡萄糖標準曲線的線性回歸方程及相關系數為Y=0.009X+0.004，R2=0.998.各菌株的β-葡萄糖苷酶活性見表1，選取酶活最高且產芽孢的R2-2進行后續研究.

表1 各菌株發酵液的β-葡萄糖苷酶活力測定結果

2.2 產酶菌株的種屬鑒定

2.2.1 形態特征

菌株R2-2的菌落、菌體和芽孢觀察結果如圖2所示，其形態特征見表2.

a.菌落；b.菌體(×1 000)；c.芽孢(×2 000).圖2 菌株R2-2的菌落、菌體和芽孢Fig.2 Colony，mycelium and spore of strain R2-2

項目形態項目形態菌落形狀圓形菌體形態桿狀菌落大小中偏小革蘭氏染色+菌落顏色白色，邊緣灰色菌體大小(1．82～1．93μm)×0．65μm菌落邊緣不規則異染粒染色+光學特性不透明芽孢形態圓柱形或橢圓形菌落表面干燥，有火山口芽孢著生位置端生或次端生

+代表陽性；-代表陰性.

2.2.2 16S rRNA基因序列測定、分析及系統進化樹的構建

經測定，菌株R2-2的16S rRNA基因序列的長度為1 275 bp.將基因序列提交NCBI數據庫獲得登錄號MF000350.與EzBioCloud數據庫中的核苷酸序列進行在線同源性序列分析.采用 MEGA.5軟件進行多序列比對，用鄰位連接法構建發育樹(圖3)，結果顯示菌株R2-2與Bacillusamyloliquefaciens親緣關系最接近.

圖3 R2-2菌株16S rRNA基因序列系統發育樹Fig.3 Phylogenetic tree of 16S rRNA sequence of strain R2-2

2.2.3 生理生化實驗

各菌株部分生理生化實驗結果見表3.根據菌株R2-2的形態學特征、16S rRNA 比對分析和生理生化實驗結果，參照中國典型培養物保藏中心、中國科學院微生物研究所提供的菌屬特征描述，可將菌株R2-2鑒定為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens).

表3 菌株R2-2部分生理生化實驗結果

2.3 水解大豆異黃酮糖苷

大豆異黃酮酶解前后產物的HPLC圖譜及分析見圖4、表4.

由圖4a知黃豆苷出峰時間為4 min左右，染料木苷出峰時間為5 min左右，黃豆苷元出峰時間為9 min左右，染料木素出峰時間為15 min左右.由圖4b可知大豆異黃酮酶解前圖中含有黃豆苷和染料木苷峰，而黃豆苷元和染料木素的峰非常小，未見黃豆黃苷與黃豆黃素.這是因為黃豆黃素苷類主要存在于大豆胚芽中，在豆粕的提取物中檢測不到[17].有少量苷元存在是由于大豆自身含有少量的大豆β-葡萄糖苷酶，有一定的水解能力，但酶活較低[18].將酶解后異黃酮產物進行HPLC檢測，結果如圖4c，仍可見到黃豆苷、染料木苷的峰，同時檢測到黃豆苷元和染料木素的峰，可以認定實驗菌株所產β-葡萄糖苷酶具有水解大豆異黃酮糖苷的能力.

經計算(表4)酶解之后大豆異黃酮糖苷含量明顯減少，苷元含量明顯增加.經菌株R2-2所產β-葡萄糖苷酶水解，黃豆苷的峰面積從54.20%降低到25.12%，水解率達到53.65%.染料木苷的峰面積從41.92%降低到21.59%，水解率達到48.8%.黃豆苷元的峰面積由2.02%增加到22.08%；染料木素的峰面積由1.5%增加到16.88%.大豆異黃酮糖苷總水解率達51.40%.黃豆苷元的含量增加了10.93倍，染料木素含量增加了11.25倍，游離型苷元含量明顯增加.由結果可知實驗所得菌株具有較高的糖苷水解能力，可大大提高大豆異黃酮的活性.

表4 大豆異黃酮酶解前后單體變化及糖苷水解率

a.大豆異黃酮標準品;b.大豆異黃酮酶解前;c.大豆異黃酮酶解后.1.黃豆苷;2.染料木苷;3.黃豆苷元;4.染料木素.圖4 大豆異黃酮酶解前后HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatogram before and after enzymatic hydrolysis of soybean isoflavone

3 討論

大豆異黃酮苷元可促進動物生長、提高繁殖能力、增強機體免疫，是一種優質的生物活性物質.豆粕中的大豆異黃酮主要為糖苷形式[19]，糖苷形式的大豆異黃酮不能被哺乳動物腸道直接吸收，必須經微生物產生的糖苷酶除去糖基，生成的苷元才能發揮生物活性[20].用于轉化大豆異黃酮糖苷的酶有β-葡萄糖苷酶、β-半乳糖苷酶等，研究最多的是β-葡萄糖苷酶[21].國內外對產β-葡萄糖苷酶菌株的篩選及研究多集中在真菌(如曲霉[22-23]、木霉[24-25]、酵母菌[26-27]等)、雙歧桿菌[9，28]、乳酸桿菌[29]，對芽孢桿菌的研究較少.曲霉、木霉等真菌是好氧菌，而豆粕發酵為厭氧發酵；酵母菌雖然是兼性厭氧菌，但酶活較低[27]；雙歧桿菌和乳酸桿菌的產酶能力往往受到營養成分和培養條件的影響[30].以上各菌在應用于豆粕發酵時均會受到不同的限制，不利于實際生產.

Bau′等[31]檢測了開菲爾發酵劑發酵豆乳過程中大豆異黃酮成分含量變化，黃豆苷元增加了9倍，染料木素增加了4.8倍.Raimondi[28]利用22株雙歧桿菌轉化黃豆苷，B.adolescentisMB243菌株轉化48 h時β-葡萄糖苷酶酶活為0.47 U/mg，培養7 d黃豆苷水解率100%，苷元增加97%.本實驗利用菌株R2-2發酵的粗酶液進行大豆異黃酮糖苷水解，反應30 min黃豆苷和染料木苷的水解率即達到53.65%和48.80%.黃豆苷元和染料木素的含量分別增大了10.93倍和11.25倍，水解大豆異黃酮糖苷效果顯著.王彩肖[32]等誘導S1酵母菌產β-葡萄糖苷酶活力提高到0.011 3 U/mL.陳紅漫[33]等篩選到1株β-葡萄糖苷酶的芽孢桿菌ZL-110，酶活為0.277 U/mL.實驗篩得解淀粉芽孢桿菌R2-2酶活達0.283 U/mL，不低于以上報道.本實驗利用七葉苷顯色原理從動物糞便中篩選到產β-葡萄糖苷酶的芽孢桿菌R2-2.芽孢桿菌由于具有其他菌屬不具備的生產和應用的優越性，如適應性強、繁殖周期短、兼性厭氧等，有利于進行菌劑的工業生產，為進一步豆粕發酵研究奠定菌種基礎，對豆粕的綜合利用和提高其附加值具有重要意義.

[1] 李萬林，鐘姣姣，王少龍,等.大豆異黃酮生理功能及其檢測方法的研究進展[J].飲料工業，2014，17(4):54-59.

LI W L，ZHONG J J，WANG S L,et al.Research progresses in physiological functions of and detection methods for soybean isoflavones[J].Beverage Industry，2014,17(4):54-59.

[2] 何恩銘，沈瑞池，林志楷，等.大豆異黃酮抗腫瘤效應研究進展[J].亞熱帶植物科學，2013，42(4):356-360.DOI: 10.3969/j.issn.1009-7791.2013.04.019.

HE E M，SHEN R C，LIN Z K，et al.A review on anti-tumor effects of soy isoflavones[J].Subtropical Plant Science，2013,42(4):356-360.DOI: 10.3969/j.issn.1009-7791.2013.04.019.

[3] 羅佳捷，范覺鑫，張彬.大豆異黃酮在動物生產中的研究進展[J].飼料博覽，2012，1:9-11.DOI: 10.3969/j.issn.1001-0084.2012.01.004.

LUO J J，FAN J X，ZHANG B.Research progress of soybean isoflavone in animal production[J].Feed Review，2012,1:9-11.DOI: 10.3969/j.issn.1001-0084.2012.01.004.

[4] KUMAR N B，CANTOR A，KATHY A R D，et al.The specific role of isoflavones on estrogen metabolism in premenopausal women[ J].Cancer，2002，94(4): 1166 -1174.DOI: 10.1002/cncr.10320.

[5] 金鳳燮.天然產物生物轉化[M].北京:化學工業出版社,2009:223 -243.

[6] ROUTLEDGE E J，PARKER J，ODUM J，et al.Some alkyl hydroxy benzoate preservatives (parabens) are estrogenic [J].Toxicology and Applied Pharmacology，1998，153 (1): 12-19.

[7] 楊曉寬.β-葡萄糖苷酶研究進展[J].河北科技師范學院學報，2012，26(1):77-81.DOI: 10.3969 / J.issn.1672-7983.2012.01.016.

YANG X K.Research progress onβ-glucosidase[J].Journal of Hebei Normal University of Science & Technology,2012,26(1):77-81.DOI: 10.3969 / J.ISSN.1672-7983.2012.01.016.

[8] HESSLER P E，LARSEN P E，CONSTANTINOU A I，et al.Isolation of isoflavones from soy-based fermentations of the erythromycin-producing bacterium Saccharopolyspora erythraea[J].Appl Microbiol Biotechnol，1997，47: 398-404.DOI: 10.1007/s002530050947.

[9] TSANGALIS D，ASHTON J F，MCGILL A E J，et al.Enzymatic transformation of isoflavone phytoestrogens in soy milk byβ-glucosidase-producingBifidobacteria[J].J Food Sci,2002,67:3104-3113.DOI: 10.1111/j.1365-2621.2002.tb08866.x.

[10] 潘艷，張益波，郭志敏，等.β-葡萄糖苷酶高產菌株篩選、誘變及其發酵的研究[J].食品研究與開發，2012，33(5):149-152.DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2012.05.043.

PAN Y，ZHANG Y B，GUO Z M，et al.Study on screening and mutation ofβ-Glucosidase-producing strain[J].Food Research and Development，2012，33(5):149-152.DOI: 10.3969/j.issn.1005-6521.2012.05.043.

[11] 黃琴，朱婷，蔣承建，等.產β-葡萄糖苷酶的菌種的篩選鑒定及其酶學特性[J].基因組學與應用生物學，2011，30(5):590-595. DOI: 10.3969/gab.030.000590.

HUANG Q，ZHU T，JIANG C J，et al.Isolation，identification and the enzymatic characteristics of the strain producingβ-glucosidase[J].Genomics and Applied Biology，2011,30(5):590-595.DOI: 10.3969/gab.030.000590.

[12] 施特爾馬赫.酶的測定方法[M].錢嘉淵，譯.北京:中國輕工業出版社出版，1992：102-119.

[13] 沈萍，陳向東.微生物學實驗[M].第4版.北京：高等教育出版社，2007.

[14] 楊繼業，郭曉軍，郭威，等.產有機酸芽孢桿菌的篩選、鑒定及產芽孢條件優化[J].飼料工業，2015，369(4):44-51.DOI:10.13302/j.cnki.fi.2015.04.010.

YANG J Y，GUO X J，GUO W，et al.Screening and identification of a strain ofBacillussp.producing organic acids and optimization of its spore production conditions[J].Feed Industry，2015,369(4):44-51.DOI:10.13302/j.cnki.fi.2015.04.010.

[15] 東秀珠，蔡妙英.常見細菌系統鑒定手冊[M].北京：科學出版社，2001.

[16] 齊斌，劉賢金.產大豆異黃酮β-葡萄糖苷酶菌株的篩選及酶學性質研究[J].食品科學，2007，28(8): 290-293.DOI: 10.3321/j.issn:1002-6630.2007.08.069.

QI B，LIU X J.Study on screen of soybean isoflavoneβ-glucosidase-producing strain and its enzymatic properties[J].Food Science，2007,28(8): 290-293.DOI: 10.3321/j.issn:1002-6630.2007.08.069.

[17] 潘利華，羅建平，羅水忠，等.高活性大豆異黃酮糖苷酶的分離原料篩選、純化及性質研究[J].食品科學，2009，30(1):164-168.DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2009.01.039.

PAN L H，LUO J P，LUO S Z，et al.Seleetion of plant source used for separating isoflavone-glucosidase with high aetivity and its purification and properties[J].Food Science，2009,30(1):164-168.DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2009.01.039.

[18] 高榮海，劉長江，李長彪，等.大豆異黃酮糖苷水解研究進展[J].糧食與油脂，2006(8): 10-12.DOI: 10.3969/j.issn.1008-9578.2006.08.003.

GAO R H，LIU C J，Ll C B，et al.Research advance on hydrolyzation of soybean isonavone glycoside[J].Cereals & Oils，2006(8): 10-12.DOI:10.3969/j.issn.1008-9578.2006.08.003.

[19] 崔洪斌.大豆生物活性物質的開發與應用[M].北京:中國輕工業出版社，2001:178-179.

[20] 于卓騰.大豆黃酮對仔豬腸道微生物的影響和雌馬酚產生菌的分離及其特性的研究[D].南京農業大學，2007.

YU Z T.Effects of daidzein on the gastrointestinal mcicrobial community of piglets and isolation and study characterisation of equol-producing bacteria[D].Nanjing Agricultural University,2007.

[21] 楊守鳳，徐建雄.β-葡萄糖苷酶轉化大豆異黃酮及其保健功能的研究進展[J].飼料研究，2014，01:6-12.

[22] 劉德海，馬煥，謝復紅，等.一株產β-葡萄糖苷酶煙曲霉菌株的鑒定及其產酶特性[J].中國釀造，2015，34(6):118-122.DOI:10.11882/j.issn.0254-5071.2015.06.026.

LIU D H，MA H，XIE F H，et al.Identification ofβ-glucosidase producingAspergillusfumigatusand its enzyme production characteristics[J].China Brewing，2015，34(6):118-122.DOI:10.11882/j.issn.0254-5071.2015.06.026.

[23] 朱婧，覃擁靈，陳桂光，等.β-葡萄糖苷酶高產菌株的選育及酶法轉化葡萄糖生產龍膽低聚糖[J].食品與發酵工業，2010，36(4):21-25.DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2010.04.024.

ZHU J，QIN Y L，CHEN G G，et al.Selection of the highβ-glucosidase mutant and production of gentiooligosaccharid[J].Food and Fermentation Industries，2010,36(4):21-25.DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2010.04.024.

[24] 張秋卓，蔡偉民.纖維素酶高產菌株的復合交替誘變選育[J].工業微生物，2008，38(6):32-37.DOI:10.3969/j.issn.1001-6678.2008.06.007.

ZHANG Q Z，CAI W M.Selecuion of high cellulase-yielding mutant by compound mutagenesis[J].Industrial Microbiology，2008,38(6):32-37.DOI:10.3969/j.issn.1001-6678.2008.06.007.

[25] KRISHNA S H，PRASANTHI K，CHOWDARY G V.Simultaneous saccharification and fermentation of pretreated sugar cane leaves to ethanol[J].Process Biochemistry,1998,33(8):825-830.DOI.org/10.1016/S0032-9592(98)00051-X.

[26] RICCARDO N B，GIOVANNI S，ROSA P，et al.Selection,characterization and compareson of β-glucosidase from mould and yeasts employable for enological application[J].Enzyme and Microbial Technology,2004,35:58-66.

[27] 蔣文鴻.昌黎與濟源產區高產β-葡萄糖苷酶野生非釀酒酵母的篩選及鑒定[D].楊凌：西北農林科技大學，2014.

JIANG W H.Screening and identification of high producingβ-glucosidase wild non-saccharomyces Yeast strain from JIYUAN and CHANGLI[D].Yangling: Northwest A & F University，2014.

[28] RAIMONDI S，RONCAGLIA L，LUCIA M D，et al.Bioconversion of soy isoflavones daidzin and daidzein byBifidobacteriumstrains[J].Appl Microbiol Biotechnol，2009，81:943-950.DOI:1007/s00253-008-1719-4.

[29] SUBROTA HATI，SHILPA VIJ，BRIJ PAL SINGH.et al.β- Glucosidase activity and bioconversion of isoflavones during fermentation of soymilk[J].J Sci Food Agric，2015，95: 216-220.DOI:10.1002/jsfa.6743.

[30] OTIENO D O，ASHTON J F，SHAH N P.Evaluation of enzymic potential for biotransformation of isoflavone phytoestrogen in soymilk byBifidobacteriumanimalis，LactobacillusacidophilusandLactobacilluscasei[J].Food Research International，2006，39(4): 394-407.DOI.:org/10.1016/j.foodres.2005.08.010.

[31] BAU′ T R，GARCIA S，IDA E I.Changes in soymilk during fermentation with kefir culture: oligosaccharides hydrolysis and isoflavone aglycone production[J].Food Sci Nutr，2015,66(8): 845-850.DOI:10.3109/09637486.2015.1095861.

[32] 陳紅漫，趙璐，楊佳影，等.一株產胞外中性β-葡萄糖苷酶菌株的鑒定及酶學特性研究[J].食品科學，2009，30(15)：160-163.DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2009.15.036.

CHEN H M，ZHAO L，YANG J Y，et al.Identification of a novelBacillusstrain capable of producing neutralβ-G lucosidase and characterization of its enzy matic properties[J].Food Science,2009，30(15): 160-163.DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2009.15.036.

[33] 王彩肖，武偉偉，李艷.產β-D-葡萄糖苷酶酵母菌的篩選及產酶性質研究[J].釀酒科技，2014，10：14-18.DOI：10.13746/j.njkj.2014.0167.

WANG C X，WU W W，LI Y.Screening of yeast strains with high-yield ofβ-D-glucosidase and study on theirβ-D-glucosidase-producing properties[J].Liq-Mak Sci Technol,2014,10:14-18.DOI:10.13746/j.njkj.2014.0167.

ScreeningofBacillusstrainsproducingβ-glucosidaseandstudyonhydrolysisofsoybeanisoflavoneglycosides

LIUHongli，GUOXiaojun，DICongying，GUOWei，ZHUBaocheng

(College of Life Sciences，Agricultural University of Hebei，Baoding 071000，China)

In order to obtainBacillusstrains capable of efficiently hydrolyze soybean isoflavone glycosides，this study screenedBacillusstrains producingβ-glucosidase from fresh feces of animals with the help of Aesculin separation culture medium.Then the strains with relatively higherβ-glucosidase activity were identified and the ability of hydrolyzing isoflavone glucosides were studied.The results showed that a strains ofBacillusR2-2 with relatively higherβ-glucosidase activity was screened out.The identity of strains R2-2 wasBacillusamyloliquefaciens.Strain R2-2 showed rather high efficiency in hydrolyzing isoflavone glucosides.The daidzin hydrolysis rate reached 53.65%，and genistin hydrolysis rate was 48.80%.

β-glucosidase;Bacillus; screen; soybean isoflavone glycosides

10.3969/j.issn.1000-1565.2017.06.010

2017-03-28

河北省重點研發計劃農業關鍵共性技術攻關專項(16226604D)；河北省技術創新引導計劃科技型中小企業技術創新資金專項(15C1303121015)；滄州市科技支撐計劃項目(161201007D)；保定市科學技術研究與發展計劃項目(16ZN007)

劉宏麗(1990—)，女，河北衡水人，河北農業大學在讀碩士研究生.E-mail:1559239136@qq.com

朱寶成(1962—)，男，河北滄州人，河北農業大學教授，博士生導師，主要從事農牧微生物應用技術研究.

E-mail:zhu2222@126.com

S816

A

1000-1565(2017)06-0621-09

趙藏賞)