病毒性肝炎及肝癌患者血清GP73的表達及意義

萬曉華，劉向祎，王凡，文江平，郭擁軍，王勝來

(首都醫科大學附屬北京同仁醫院檢驗科，北京 100730)

病毒性肝炎及肝癌患者血清GP73的表達及意義

萬曉華，劉向祎，王凡，文江平，郭擁軍，王勝來

(首都醫科大學附屬北京同仁醫院檢驗科，北京 100730)

目的探討血清高爾基體蛋白73(GP73)在病毒性肝炎及肝癌患者中的表達及臨床意義。方法病例資料來源于2013-2015年首都醫科大學附屬北京同仁醫院。應用雙抗體夾心ELISA方法測定192例健康對照組、118例乙型肝炎組、131例丙型肝炎組和78例肝癌組患者的血清GP73水平。結果乙型肝炎組、丙型肝炎組和肝癌組患者的GP73濃度均明顯高于健康對照組，差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)；在乙型肝炎患者中，HBeAg陽性組GP73濃度和HBV-DNA含量明顯高于HBeAg陰性組，差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)；肝癌組患者的GP73與甲胎蛋白(AFP)呈正顯著相關性(r=0.433，P＜0.01)。結論 與健康對照組比較，GP73在不同肝炎組及肝癌組患者中均明顯增高，且隨著疾病進展，GP73有明顯增高趨勢，表明血清GP73測定在病毒性肝炎及肝癌的診斷及監測疾病進程中具有重要意義。

高爾基體蛋白73；病毒性肝炎；乙型肝炎；丙型肝炎；肝癌

高爾基體蛋白73(Golgi protein-73。GP73)是新近發現的一種肝細胞癌相關蛋白[1-2]。肝細胞癌是一種惡性程度高、進展快、預后差的常見的惡性腫瘤，它的發生與乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染密切相關。在我國，HBV感染是肝臟疾病的主要病因，大約7.8%的人口攜帶HBV，近年來，HCV感染也呈日益增高的態勢[3-4]。本研究應用雙抗體夾心酶聯免疫法，分別檢測了乙型肝炎組(包括乙型肝炎HBeAg陽性組和乙型肝炎HBeAg陰性組)，丙型肝炎組、肝癌組和健康對照組的血清GP73水平，探討GP73在不同病例組中的GP73的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例資料來源于2013-2015年首都醫科大學附屬北京同仁醫院。本研究病例組分為三組，分別選取經臨床確診的乙型肝炎組患者118例(包括乙型肝炎HBeAg陽性組58例和乙型肝炎HBeAg陰性組60例)、丙型肝炎組患者131例和肝癌組患者78例。其中乙型肝炎HBeAg陽性是指血清學檢測結果為乙肝表面抗原(HBsAg)陽性、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)陰性、乙型肝炎e抗原(HBeAg)陽性、乙型肝炎e抗體(HBeAb)陰性、乙型肝炎核心抗體(HBcAg)陽性的樣本，乙型肝炎HBeAg陰性是指血清學檢測結果為HBsAg陽性、HBsAb陰性、HBeAg陰性、HBeAb陽性、HBcAg陽性樣本。健康對照組來源于本院體檢科的健康對照人群，選取192例，經臨床確認為身體健康者，包括肝臟生化指標正常、無肝臟疾病史、無酗酒史、無病毒性肝炎史及B超顯示肝臟正常者。本研究健康對照組、乙型肝炎組、丙型肝炎組和肝癌組的中位年齡(范圍)分別為43(21～56)歲、38(18～72)歲、41(22～62)歲和44(27～71)歲，性別構成情況男性/女性分別為88/104、66/52、72/59和46/32。

1.2 檢測方法

1.2.1 樣本采集 采用帶有惰性分離膠的進口真空采血管分別抽取對照組和患者空腹靜脈血4 mL，自然凝集30 min，室溫4 000 r/min離心15 min分離血清，-80℃保存待測。

1.2.2 血清學檢測方法血清GP73檢測試劑盒由北京熱景生物技術股份有限公司(北京)提供高爾基體蛋白73(GP73)定量測定試劑盒，采用雙抗體夾心ELISA方法檢測；乙型肝炎及丙型肝炎樣本均采用雅培i2000SR發光免疫分析儀及配套試劑盒檢測，乙型肝炎檢測項目包括乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗體(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)。丙型肝炎檢測丙型肝炎抗體；乙型肝炎HBV DNA含量檢測試劑盒由中山大學達安基因股份有限公司(廣州)提供商品化試劑盒，采用ABI7300熒光實時定量PCR系統(Applied Biosystems,CA，USA)；肝癌組血清AFP測定采用UniCel DXI 800全自動化學發光分析儀，血清AFP檢測試劑和相應校準品均由美國貝克曼庫爾特公司提供。所有操作嚴格按照儀器及使用說明進行。

1.3 統計學方法應用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計量數據以中位數和(或)百分位數表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗，兩組間比較采用Mann-Whitney檢驗，相關性采用Spearman相關性分析，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 血清GP73在不同組的分布特征 192例健康對照組的GP73濃度中位數(95%可信區間)為39.90(19.57～99.72)ng/mL，乙 型 肝 炎 組 為 58.35(24.25～210.08)ng/mL，丙型肝炎組為 67.30(12.54～290.56)ng/mL，肝癌組為200.40(31.59～556.79)ng/mL。與健康對照組比較，乙型肝炎組，丙型肝炎組和肝癌組患者的GP73濃度均明顯高于對照組，差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)。此外，乙型肝炎組和丙型肝炎組患者的血清GP73濃度均明顯低于肝癌組，差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)，見表1。

表1 血清GP73濃度百分位數在不同組的分布特征(ng/mL，中位數)

2.2 乙型肝炎HBeAg陽性及HBeAg陰性組患者的血清GP73及HBV DNA含量比較 乙型肝炎HBeAg陽性組患者的血清GP73濃度中位數(95%可信區間)為66.65(20.16～251.57)ng/mL，乙肝HBeAg陰性組血清GP73濃度中位數(95%可信區間)為48.85(21.46～154.39)ng/mL。如表2所示，健康對照組、乙型肝炎HBeAg陽性組及HBeAg陰性組血清GP73濃度差異有顯著統計學意義(P＜0.01)。兩兩比較后發現，HBeAg陽性組和HBeAg陰性組GP73濃度均明顯高于對照組，差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)，且GP73濃度HBeAg陽性組明顯高于HBeAg陰性組，差異有顯著統計學意義(P＜0.01)。

表2 乙型肝炎不同組別血清GP73和HBV DNA含量的分布特征

本研究中，乙型肝炎HBeAg陽性組明顯高于HBeAg陰性組HBV DNA含量，差異有顯著統計學意義(P＜0.01)。HBeAg陽性組HBV DNA含量中位數(95%可信區間)為5.41×106(0～7.97×108)IU/mL，其中有5例HBV DNA檢測陰性，53例HBV DNA檢測陽性。HBeAg陰性組HBV DNA含量中位數(95%可信區間)是 2.85×102(0～1.89×108)IU/mL，其中有 31例HBV DNA檢測陰性，19例HBV DNA檢測陽性。

2.3 血清GP73與乙型肝炎HBV DNA含量的關系 118例乙肝病例中，HBV-DNA陰性組46例，HBV DNA陽性組72例。HBV DNA陰性組的GP73濃度中位數(95%可信區間)為55.65(24.70～205.01)ng/mL，HBV DNA陽性組的GP73濃度中位數(95%可信區間)是59.30(17.73～233.79)ng/mL。與HBV-DNA陰性組比較，GP73濃度在HBV DNA陽性組差異無統計學意義(P＞0.05)。

2.4 肝癌組GP73和AFP表達的相關性 本研究分別檢測了78例肝癌組血清GP73和AFP濃度，GP73濃度中位數(95%可信區間)是200.40(31.59～556.79)ng/mL，AFP濃度中位數(95%可信區間)是131.51(1.80～8.75×104)ng/mL。相關性分析發現GP73和AFP呈明顯的正相關(相關系數為0.433，P＜0.01)。

3 討論

GP73是一種常駐高爾基體Ⅱ型跨膜糖蛋白，在正常人中僅在膽囊上皮細胞中表達，在肝細胞中幾乎不表達；肝細胞受到病毒感染可引起GP73的高表達，肝癌患者中也發現肝細胞GP73表達量明顯上調且血清的GP73含量也顯著增高[1,5-6]。本研究表明，與健康對照組比較，GP73在肝癌組及各乙型肝炎組及丙型肝炎組均明顯增高。

對于慢性乙型肝炎患者，本研究及文獻[7-9]表明，血清GP73含量明顯高于健康對照組。許正鋸等[7]在對573例慢性HBV感染者研究發現血清GP73水平與慢性HBV感染者病情進展呈正相關關系，在不同血清HBV DNA含量之間比較，患者血清GP73水平差異無統計學意義，與本研究結果一致。鹿雷明[8]研究發現GP73是反映HBV相關性肝病患者進展重要指標，并與肝損害程度顯著相關。Xu等[9]對253例不同病理類型的慢性乙型肝炎患者研究發現，GP73是一個反映肝炎疾病進展程度的有效標志物，血清GP73的水平與HBV DNA的復制水平并不相關，這與本研究一致。但Xu等[9]對比HBeAg陽性的乙型肝炎和HBeAg陰性的乙型肝炎血清GP73含量無統計學差異，而本研究中，乙型肝炎HBeAg陽性組的GP73水平顯著高于HBeAg陰性組。

對于丙型肝炎患者，國外有報道GP73在含量明顯高于健康對照[10-11]，但國內鮮有文獻報道。Riener等[10]研究發現HCV感染者GP73明顯高于健康對照組，并提示GP73是HCV感染肝臟疾病進展的有效標志物。Hu等[11]通過細胞培養研究發現，HCV感染的細胞GP73分泌量增加，當GP73含量增加時，HCV的復制量也進一步加劇，反之，GP73不表達或表達量很少時，HCV復制受抑制，這一現象從細胞及蛋白水平暗示了HCV和GP73正相關的作用機制，從而為GP73在HCV患者的抗病毒治療中的作用提供了新的思路。

肝癌是第五大常見癌癥和癌癥的第三個死亡的主要原因之一，慢性乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒(HCV)感染是肝癌發生發展的重要病因之一。AFP是肝癌診斷的重要血清標志物[12-13]。本研究發現，肝癌組GP73明顯高于健康對照組，且GP73和AFP有明顯的相關性。血清GP73有望成為一個有用的指標，用以監測疾病的進展和HBV或HCV感染，進而早期預防肝癌的指標[3]。多項研究發現當GP73和AFP聯合檢測可明顯提高診斷效率，有利于原發性肝癌的診斷與鑒別診斷[13-15]。付超等[16]研究發現，肝細胞癌患者不同治療階段，GP73也略有不同，原發性肝細胞癌治療后組患者血清GP73含量明顯低于治療前組，而復發患者和肝轉移癌患者沒有明顯差異，提示GP73對肝癌的預后和復發有輔助診斷的價值。

本研究存在以下局限：(1)各組病例數相對較少；(2)丙型肝炎組未能同時檢測HCV RNA的情況，從而無法探究在丙型肝炎組血清GP73含量與HCV RNA的關系；(3)由于肝癌組病例數較少，本研究未對肝癌組依據病理分級進一步分組比較。對于GP73在病毒性肝炎及肝癌中的臨床意義，更深入的研究依賴于病例數的進一步加大及病理分組的進一步細化。

綜上所述，與健康對照組比較，GP73在不同肝病病例組均有明顯增高，尤其在肝癌組，增高幅度更為明顯。GP73有望成為乙型肝炎和丙型肝炎等肝癌高危人群篩查的良好指標。

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Expression and clinical significance of serum GP73 in patients with virus hepatitis and liver cancer.

WAN Xiao-hua,LIU Xiang-yi,WANG Fan,WEN Jiang-ping,GUO Yong-jun,WANG Sheng-lai.Department of Clinical Laboratory,Bejing Tongren Hospital,Capital Medical University,Beijing 100730,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of serum Golgi protein-73(GP73)in healthy controls and patients with virus hepatitis and liver cancer.MethodsSerum samples were obtained from patients who admitted to Beijing Tongren Hospital,Capital Medical University from 2013 to 2015.By Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA),serum GP73 was measured in 192 healthy controls,118 patients with HBV infection,131 patients with HCV infection and 78 patients with liver cancer.ResultsThe GP73 value in different liver diseases group was significantly higher than that in the healthy controls,respectively(P＜0.01).The GP73 value and quantitative HBV DNA of HBeAg-positive group were significantly higher than those of HBeAg-negative group,respectively(P＜0.01).GP73 had the significant positive correlation with AFP in liver cancer group(r=0.433,P＜0.01).ConclusionCompared with the healthy controls,GP73 in patients with different liver diseases is significantly increased.These results suggested that GP73 might play an important role in the diagnosis of liver diseases and monitor of disease progression.

Golgi protein-73(GP73);Virus hepatitis;Hepatitis B;Hepatitis C;Liver cancer

R512.6

A

1003—6350（2017）23—3872—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.23.028

北京市首都臨床特色項目(編號：z141107006614007)；北京市優秀骨干人才項目(編號：2016-2018)

劉向祎。E-mail：13693328516@163.com

2017-04-28)