手足口病患兒血清中NSE和S-100β含量的變化

周土木

(浙江衢化醫院 兒內科，浙江 衢州 324004)

手足口病患兒血清中NSE和S-100β含量的變化

周土木

(浙江衢化醫院 兒內科，浙江 衢州 324004)

目的研究血清神經元特異性烯醇化酶(Neutron Specific Enolase, NSE)和S-100β含量對手足口病患兒病情評估和臨床診斷的意義。方法154例手足口病患兒分為危重型組(32例)、重型組(67例)、輕癥組(55例)，選取同期健康體檢兒30例作為對照組；采用RT-PCR方法對病患兒咽拭子樣本進行病原學鑒定，利用酶聯免疫測定法檢測各組血清NSE和S-100β的水平。結果送檢154份病例中，EV71檢測呈陽性率為59.1%，COXA-16檢測呈陽性率為24.7%。NSE和S-100β水平檢測結果顯示，危重型組高于重型組、輕癥組和對照組，重型組高于輕癥組和對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；但輕癥組和對照組的含量差異無統計學意義(P>0.05)；危重型組和重型組患兒血清中S-100β和NSE含量水平呈顯著正相關。結論手足口病患兒血清中NSE和S-100β水平變化與病情的輕重相關，該指標的檢測有助于臨床上對患兒手足口病病情的早期評估和判斷預后。

兒童手足口病；神經元特異性烯醇化酶；S-100β；病情評估

手足口病(Hand-foot-mouth Disease，HFMD)是一種全球性的兒科常見傳染病，主要是由多種腸道病毒感染引起，多發于5歲以下兒童中，常會引起急性傳染[1]。該病情發展迅速，常引起心、肺或腦部并發癥，例如心肌炎、神經源性肺水腫、腦膜炎、腦脊髓炎和腦炎等[2]，致死率較高、嚴重影響了兒童的健康。

目前，臨床上在患兒發病早期能夠很好地對手足口病的病情進行預測和分型的診斷標準不多，特別是對于判斷繼發性腦部并發癥的指標十分有限。血清神經元特異性烯醇化酶(Neutron Specific Enolase, NSE)和S-100β是目前醫學界公認的分別能夠特異性反映中樞神經系統神經元和星形膠質細胞損傷程度的生物學標志物[3]，越來越多研究認為是檢測腦損傷程度和預后評估的敏感指標。本研究通過檢測手足口病不同病情程度患兒血清中NSE和S-100β的含量水平變化，探索NSE和S-100β在手足口病患兒的早期病情程度的判斷和治療上的意義，以期為NSE和S-100β作為指示物的臨床應用提供依據。

1 資料與方法

1.1 對象及分組 選取我院2012年1月—2016年5月收治的154例手足口病患兒，根據《手足口病診療指南(2010年版)》的診斷標準，并經過血清學和病原學檢查鑒定，均出現手、口、足和臀部的皰疹，部分兒童還伴有發熱等癥狀；根據患兒的病情程度分為危重型組(32例)、重型組(67例)、輕癥組(55例)；并選取30例同期健康體檢兒童作為對照組，病原學檢測EV71和COXA-16均呈陰性。患兒中男93例、女61例，年齡1.2～6.8歲，平均2.5±0.8歲；對照組兒童中男18例、女12例，年齡1.4～6.5歲，平均2.5±0.5歲；2組年齡、性別差異均無統計學意義(P>0.05)。本研究通過醫院倫理委員會批準，所有患兒家長知情同意。

1.2 病原學檢查 用消毒的采樣棉簽，輕柔適度的抹拭患兒兩側扁桃體和咽后壁部位，取樣過程中應盡量避免棉簽接觸到舌部。獲取咽拭子樣本后，迅速將取樣棉簽轉入到采樣管中(含有1 mL的Hanks平衡鹽保存液)，并旋蓋擰緊密封，保持濕潤環境。對照組的正常兒童用同樣的方法獲取咽拭子樣本。將獲取的保存于Hanks平衡鹽溶液的咽拭子樣本在12 h內在冰浴的低溫條件下，通過冷藏運輸途徑及時送予衢州市疾病預防控制中心進行腸道病毒CoxA16和EV71的特異性核酸定性檢測。

1.3 樣本采集 本研究中所選擇的患兒病例均是患兒發病的3天內住院治療，在患兒入院的24小時內分別抽取靜脈血3 mL，對照組的正常兒童在相同的時間抽取等量的靜脈血作為對照。所有靜脈血樣本均需要經過離心(3000 rpm, 20 min)處理，然后取上層血清置于-70℃保存，并同時取1mL行常規血白細胞和血糖、血肌酐的生化學項目檢測。

1.4 NSE和S-100β水平的檢測 從-70℃確認溫度冰箱中取出各患兒血清樣本，采用酶聯免疫測定法(ELISA)檢測NSE和S-100β的水平，測定方法嚴格按照NSE ELISA試劑盒(R&D Systems, USA)和S-100β ELISA試劑盒(R&D Systems, USA)說明書的方法操作，并記錄好各樣本的指標數據。

1.5 統計學分析 利用SPSS 19.0進行統計學處理，計量資料2組間采用t檢驗，多組間采用單因素方差分析LSD檢驗方法，數據均符合正態分布；計數資料用χ2檢驗，相關分析采用Pearson直線相關性分析方法。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 基本臨床資料 各組患兒和對照組在年齡、性別構成、血肌酐含量和血白細胞計數方面，差異無統計學意義(P>0.05)；但危重組患兒的血清中血糖含量顯著高于重型組、輕癥組和對照組(P<0.05)，而重型組、輕癥組和對照組之間血糖含量差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2 病原學檢測 送檢154份咽拭子樣本，經RT-PCR鑒定，結果顯示EV71陽性患兒91例，占比59.1%，COXA-16陽性患兒38例，占比24.7%，EV71和COXA-16均呈陽性的患兒共8例，占比5.2%，兩者均呈陰性的患兒共17例，占比11.0%。在危重型患兒中，EV71陽性和COXA-16陽性病例分別占66%和18%；而在重型患兒中，EV71陽性和COXA-16陽性病例分別占70%和9%。輕癥組患兒中，引起手足口病的病原主要為EV71(42%)和COXA-16(47%)，對照組健康兒童均未檢測出EV71和COXA-16。

表1 各組患兒和對照組的基本臨床資料比較

2.3 血清中NSE和S-100β水平 危重型患兒血清中NSE和S-100β水平均高于重型組、輕癥組和對照組，重型組患兒血清中NSE和S-100β水平也高于輕癥組和對照組；差異均有統計學意義(P<0.05)；而輕癥組和對照組患兒的NSE和S-100β水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.4 血清中NSE和S-100β水平相關分析 對手足口病不同病情程度的患兒血清中NSE與S-100β含量水平進行Pearson相關性分析，結果顯示，手足口病病情危重型組和重型組患兒血清中S-100β與NSE的含量水平呈顯著正相關(r=0.641、0.512，均P<0.05)。但是在手足口病病情輕癥組和對照組健康患兒的血清中S-100β與NSE的含量水平并未顯示出明顯的相關性(P>0.05)。見圖1。

NSES?100β危重型組(n=32)2463±282?#213±038?#重型組(n=67)1837±246?165±029?輕癥組(n=55)1065±171083±015對照組(n=30)959±113079±011F94005119334P00000000

注：*分別與輕癥組、對照組比較，P<0.05；#與重型組比較，P<0.05。

圖1 手足口病患兒血清中NSE與S-100Β含量水平Pearson相關性分析

2.5 轉歸分析 手足口病輕癥組中有21例患兒的血清中S-100β含量水平高于1.2 ng/mL，定義為高水平組，有34例患兒血清中S-100β含量水平低于1.2 ng/mL，定義為低水平組[4]。預后轉歸結果顯示，高水平組有10例患兒轉化為手足口病重癥或危重癥病情(47.6%)，低水平組患兒有8例(23.5%)轉化為重癥或危重癥病情；S-100β高水平組患兒轉化為重癥或危重癥的發生率高于低水平組，差異有統計學意義(χ2=4.637，P<0.05)。

3 討論

手足口病是由多種腸道病毒感染所引起，其中尤以屬于小RNA病毒科的腸道病毒71型(EV71)和柯薩奇病毒A組16型(COXA16)的致病性最高，對兒童的危害性也極其嚴重[5]。EV71病毒可以直接感染患兒的髓質和脊髓，引發不同程度的中樞神經系統病變的癥狀，繼而導致腦脊髓膜炎、神經源性肺水腫等與神經系統相關疾病的發生，EV71病毒感染的情況多發生在手足口病重癥或危重癥病例中。本研究中，危重癥組和重癥組患兒血清中檢測出EV71呈陽性的比例分別達到了66%和70%，顯著高于輕癥組中EV71陽性率(42%)，這一結果與之前研究者的報道一致[6]。HFMD具有傳播途徑多且復雜和傳染性強等特點，尤其是對于重癥HFMD患兒，其致死率和致殘率一致高居不下。因此，尋找合適的生物標志物，在早期診斷中就能夠發現重癥患兒以及評估患兒腦神經損傷程度，及早進行針對性的治療是目前HFMD的臨床治療亟需解決的問題。

血清神經元特異性烯醇化酶(Neutron Specific Enolase, NSE)和S-100β是目前醫學界公認的能夠特異性反映患者腦損傷程度的生物學標志物[3]。NSE主要存在于神經元和神經內分泌細胞中，正常情況下，血清中的NSE的含量水平很低，但當神經組織遭到破壞后，腦部的包膜和血-腦脊液屏障受損而通透性升高，NSE隨之大量滲透到血液中，導致血液中NSE水平升高[7]。因此，NSE常被認為是檢測腦損傷程度和預后評估的敏感指標[8]。李俊等[9]研究發現重型顱腦損傷患者血清NSE的水平顯著升高；張永英[10]發現病毒性腦炎患兒的血清中NSE含量水平顯著高于健康兒。本研究中，手足口病重型組或危重型組患兒的血清中NSE含量均維持在較高水平，且隨著病情的加重，其含量水平也隨之而升高，相較于輕癥組和對照組差異顯著。這說明患兒血清中NSE的含量水平對于患兒病情程度具有良好的指示性。

S-100β蛋白存在于星形膠質細胞和雪旺細胞中，當顱腦受到外力打擊而受損后，中樞神經系統的組織遭到破壞，進而神經膠質細胞中的S-100β蛋白會因此而滲入到腦脊液，然后通過已受到損傷的血-腦屏障進入到外周血中，引起血清中S-100β含量的升高。因此，通常將S-100β作為中樞神經系統星形膠質細胞完整性的特異標志物[11]。史艷平等[12]對189例危重癥或重癥HFMD患兒的腦脊液和血清中S-100β含量水平檢測分析發現，HFMD病情越嚴重，患兒血清中S-100β含量水平越高。本研究中，HFMD重型組或危重型組患兒的血清中S-100β含量均維持在較高水平，且隨著病情的加重，其含量水平也隨之而升高，相較于輕癥組和對照組差異顯著。同時，我們也注意到輕癥組中S-100β含量水平較高的患兒病情轉為危重型或重型的概率要高于S-100β含量水平較低的患兒，這提示在臨床治療過程中，對于重癥患兒要盡早發現、及時治療，同時要關注輕癥患兒血清中S-100β含量水平的變化，警惕患兒病情的進一步惡化。

Pearson相關性分析結果顯示，HFMD病情危重型組和重型組患兒血清中S-100β與NSE的含量水平呈顯著正相關，但在輕癥組和對照組并沒有發現兩者之間存在顯著相關性。NSE和S-100β作為腦損傷的生物學指示物，在對HFMD患兒早期的病情診斷和預后評估中能夠提供有價值的客觀依據，特別是反映危重型和重型患兒的腦損傷程度，對于臨床上HFMD危重型和重型患兒的發現和及時治療具有重要的指導作用。

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PatternofvariationinthelevelsofserumNSEandS-100βinchildrenwithhand-foot-mouthdisease

ZHOU Tu-mu

(DepartmentofPediatrics,ZhejiangQuhuaHospital,ZhejiangQuzhou324004,China)

ObjectiveTo evaluate the implications of the recognition of the pattern of variation in the levels of serum neuron specific enolase (NSE) and S-100β for the assessment and diagnosis of hand, foot and mouth disease (HFMD) in children.Methods154 cases of children with HFMD were firstly divided into three experimental groups, namely, critical type group (n=32), severe group (n=67) and mild disorder group (n=55) according to the clinical symptoms and signs; 30 healthy children were chosen as the control group. Secondly, RT-PCR method was used to identify the virus type of throat swab samples of children with HFMD and the levels of NSE and S-100β were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).FindingsOf the 154 cases, 59.1% were found positive cases in EV71 test and 24.7% were found positive cases in COXA-16 detection. The results showed that the levels of NSE and S-100β of the critical type group were higher than those in the severe group, the mild disorder group and the control group, and those of the severe group were higher than those in the mild group and the control group. The differences were statistically significant (P<0.05). However, the levels of the mild group and the control group were not significantly different (P>0.05). There was a significant positive correlation between serum S-100β and NSE levels in patients from the critical type group and the severe group.ConclusionThe changes of serum NSE and S-100β levels in children with HFMD are correlated to the severity of the disease. And the detection of these indices can well inform the early assessment and prognosis of the disease.

hand-foot-mouth disease (HFMD); neutron specific enolase (NSE); S-100β; disease assessment

2017-02-17

周土木(1966 - )，男，浙江衢化人，本科，主治醫師。

10.3969/j.issn.1674-6449.2017.06.015

R725.1

A

1674-6449(2017)06-0647-04