桑葉黃酮對(duì)衰老模型小鼠抗氧化能力影響的探究

□何東與

（成都七中萬(wàn)達(dá)中學(xué) 四川 成都 610036）

桑葉黃酮對(duì)衰老模型小鼠抗氧化能力影響的探究

□何東與

（成都七中萬(wàn)達(dá)中學(xué) 四川 成都 610036）

研究桑葉中黃酮對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影響。采用連續(xù)30天腹腔注射D-半乳糖（200mg/kg）建立小鼠亞急性衰老模型。建模之后，分別灌胃低、高劑量桑葉黃酮（0.3g、0.6g/kg），同時(shí)衰老模型組和藥物治療組灌胃同等體積生理鹽水與抗壞血酸（0.5g/kg）。21天后檢測(cè)小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含量。結(jié)果表明：與正常對(duì)照組相比，衰老模型組中SOD水平極顯著降低，MDA含量升高；與衰老模型組比，桑葉黃酮高劑量組可以明顯提高小鼠機(jī)體SOD活性，降低MDA含量。因此，桑葉黃酮能抑制體內(nèi)過(guò)氧化物的生成，有效清除體內(nèi)的自由基，提高衰老小鼠的抗氧化能力，為桑葉的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用提供一定依據(jù)。

桑葉；黃酮；衰老；抗氧化

機(jī)體的衰老是由多種因素累積而成，隨著分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，人們對(duì)機(jī)體內(nèi)大量存在的自由基及其產(chǎn)生的危害有了越來(lái)越多的認(rèn)識(shí)[1;2]。研究表明，過(guò)量的自由基是導(dǎo)致機(jī)體衰老和死亡的重要因素之一。因此，如何清除生物體內(nèi)過(guò)量的自由基已經(jīng)成為抗衰老研究的核心問(wèn)題[3]。

桑葉中富含的多糖、黃酮、蛋白質(zhì)、氨基酸等活性成分具有降血脂、降血糖、抗凝血等作用[4;5]。黃酮類(lèi)化合物是桑葉的主要功能成分之一，包括槲皮素、異槲皮素、二氫山柰素等[6-8]。目前，對(duì)于桑葉黃酮對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)其對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的影響，觀察其抗衰老作用，為桑葉的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用提供一定科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

桑葉，購(gòu)自于當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，經(jīng)四川師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物學(xué)教研室鑒定。總蛋白測(cè)定試劑盒（BCA法）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒，均購(gòu)自于北京天根生化科技有限公司；其它石油醚、無(wú)水乙醇、抗壞血酸、D-半乳糖、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、亞硝酸鈉、硝酸鋁、NaOH等均為國(guó)產(chǎn)分析純。電子天平（賽多利斯）、燒杯、玻璃棒、超聲清洗儀（寧波新芝）、溫度計(jì)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Buchi）、100mL容量瓶、分光光度計(jì)（AJ耶拿）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 桑葉黃酮的提取。按照文獻(xiàn)方法提取桑葉黃酮：利用建立蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的方法檢測(cè)黃酮含量并配置成生藥濃度1g/mL溶液備用[4;6;9]。

1.2.2 動(dòng)物衰老模型建立。25只ICR小鼠，雄性，22-26克，購(gòu)自四川省成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。小鼠自由進(jìn)食、飲水。隨機(jī)分為正常對(duì)照組（5只）與D-半乳糖組（20只），D-半乳糖組連續(xù)腹腔注射（200mg/kg）溶液30天，建立小鼠衰老模型，正常對(duì)照組腹腔注射同等體積的生理鹽水。

1.2.3 桑葉黃酮灌胃治療。將注射D-半乳糖的20只小鼠再隨機(jī)分為4組：衰老模型組、藥物治療組、桑葉黃酮低、高劑量組。桑葉黃酮低、高劑量組按體重每天分別灌胃0.3g、0.6g/kg；藥物治療組灌胃按體重灌胃0.5g/kg抗壞血酸；衰老模型組與正常對(duì)照組給予等體積的生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥21天。灌胃結(jié)束后禁食1天，眼球采血，分離血清，按試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清中SOD和MDA含量。

1.2.4 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。采用Excel的方差分析與多重比較，數(shù)據(jù)用±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑葉黃酮對(duì)小鼠血清中的SOD和MDA含量的影響

與正常對(duì)照組相比，衰老模型組小鼠在持續(xù)D-半乳糖的作用下，血清的SOD活性顯著降低（P＜0. 01），MDA含量升高（P＜0.01），表明小鼠衰老模型建立成功。在灌胃桑葉黃酮后，與衰老模型組相比，桑葉黃酮高劑量組在SOD活性顯著升高（P＜0.01），MDA含量降低（P＜0.05）；低劑量組小鼠無(wú)明顯差異（P＞0. 05）。藥物治療組小鼠血清中SOD活性較衰老模型組小鼠升高顯著（P＜0.01），MDA含量降低（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 桑葉黃酮對(duì)小鼠血清中的SOD和MDA含量的影響（±s n=5）

表1 桑葉黃酮對(duì)小鼠血清中的SOD和MDA含量的影響（±s n=5）

注：與正常對(duì)照組相比，** P＜0.01;與衰老模型組相比，△P＜0.05,△△P＜0.01

3 討論

機(jī)體抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度存在密切的關(guān)系。抗氧化酶能夠清除和分解體內(nèi)過(guò)量的O2-和H2O2等自由基，作為重要的抗氧化酶之一，SOD活性可以反應(yīng)機(jī)體的抗氧化能力[2;10]。而MDA是一種脂質(zhì)過(guò)氧化物，可反映出機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)的過(guò)氧化程度，MDA含量的高低間接反映了機(jī)體受到自由基攻擊的嚴(yán)重程度。大量研究表明，當(dāng)機(jī)體受到自由基攻擊而被氧化時(shí)，抗氧化劑的注射和使用，使得MDA含量下降，機(jī)體抗氧化能力得到明顯增強(qiáng)[11]。

根據(jù)衰老的代謝紊亂學(xué)說(shuō)，D-半乳糖的持續(xù)注射導(dǎo)致細(xì)胞代謝紊亂，自由基氧化與抗氧化作用動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)，使個(gè)體細(xì)胞易受自由基的傷害，最終導(dǎo)致機(jī)體衰老[12]。本研究中，小鼠在注射D-半乳糖后，SOD活性顯著降低，MDA含量升高，說(shuō)明衰老模型建立成功。在衰老組小鼠灌胃桑葉黃酮后，與衰老模型組比較，高劑量組SOD活性顯著升高，MDA含量顯著降低，表明桑葉黃酮可顯著提高衰老小鼠機(jī)體的抗氧化能力，降低衰老小鼠脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA含量，有效清除體內(nèi)產(chǎn)生的過(guò)量自由基，具有明顯的抗氧化作用，但其抗氧化機(jī)理仍然需要進(jìn)一步的研究。

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10.16675/j.cnki.cn14-1065/f.2017.22.061

1004-7026（2017）22-0080-02

R285.5

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