LysM Cre Cb b/ Cbl小鼠模型的建立和免疫表型分析

譚晨聲，楊燚，張進平

(蘇州大學 生物醫學研究院，江蘇 蘇州 215123)

譚晨聲，楊燚，張進平

(蘇州大學 生物醫學研究院，江蘇 蘇州 215123)

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.2 染色試劑 Giemsa染色液購自珠海貝索生物技術有限公司；天狼星紅染色液(Direct Red)購自Fluke公司；HE染色液購自廣州市秀威貿易有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.2 制片和染色 取35 d左右小鼠的肺臟，按常規方法固定、脫水、石蠟包埋、制備切片，分別進行HE染色和天狼星紅染色。肺灌洗液用甩片機甩片，然后用Giemsa染色液染色。用Nikon Eclipse 90i全自動顯微鏡觀察并拍照。

1.2.4 流式細胞儀檢測 取35 d左右小鼠肺灌洗液、脾臟細胞、骨髓、外周血等，用相應熒光抗體染色20 min，部分細胞用CD16/32抗體封閉后再染相應流式抗體。然后用PBS洗完后，用FACS CantoII分析各亞群細胞的變化。

1.3 統計學處理

實驗數據用均數±標準差表示。兩組間比較采用t檢驗分析。P<0．05為差異具有統計學意義。

2 結 果

A.小鼠35 d死亡時，dKO小鼠明顯體積變小；B.小鼠生存率統計；C.小鼠35 d時體重

A.Mice died about the 35th day, dKO mice showed significantly smaller size; B.The statistics of Mice survival rate; C.Mice weight at 35 days

圖4Lysozyme2在不同免疫細胞中的表達

Fig4Lysozyme2expressionindifferentimmunecells

3 討 論

圖5FACS檢測cDC在不同組織中的比例檢測(aP<0.01)

Fig5TheproportionofcDCindifferenttissuesbyFACS(aP<0.01)

圖6CD11b+Gr1+細胞在骨髓和脾臟中比例檢測(aP<0.05，bP<0.01)

Fig6TheproportionofCD11b+Gr1+cellsinbonemarrowandspleen(aP<0.05，bP<0.01)

圖7脾臟和肺灌洗液中Mφ細胞檢測(aP<0.05，bP<0.01，cP<0.0001)

Fig7TheproportionofMφinspleenandLunglavagefluidbyFACSanalysis(aP<0.05，bP<0.01，cP<0.0001)

[4] DACCORD C,MAHER T M.Recent advances in understanding idiopathic pulmonary fibrosis [J].F1000Research,2016,5.

(InstitutesofBiologyandMedicalSciences,SoochowUniversity,Suzhou,215123，China)

國家自然科學基金面上項目(31270939，81471526，81771667)；組織器官區域免疫特性與疾病重大研究計劃培育項目(91442110)；江蘇省自然科學基金面上項目(BK2012617)；江蘇省高校自然科學研究重大項目(13KJA310004)；江蘇省自然科學基金青年項目(BK20170349)

譚晨聲(1992-)，女,山東濟寧人，在讀免疫學專業碩士研究生，研究方向：淋巴細胞發育和分化。Email:739290738@qq.com

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孫茂民)