卵巢癌中Ezrin、Paxillin及CD44的表達及與臨床病理參數的相關性

俞 楨 盧永超

(浙江大學醫學院附屬婦產科醫院婦科，浙江 杭州 310006)

卵巢癌中Ezrin、Paxillin及CD44的表達及與臨床病理參數的相關性

俞 楨1盧永超

(浙江大學醫學院附屬婦產科醫院婦科，浙江 杭州 310006)

目的探討埃茲蛋白(Ezrin)、樁蛋白(Paxillin)及CD44在卵巢癌中的表達及其與臨床病理參數的相關性。方法選取卵巢癌組織120例，良性卵巢腫瘤組織100例，正常卵巢組織100例，應用免疫組化SP法檢測不同組織中Ezrin、Paxillin及CD44蛋白的表達，分析其表達與臨床病理參數的關系，并采用Spearman等級相關分析卵巢癌組織中Ezrin、Paxillin及CD44的相關性。結果卵巢癌組織中Ezrin、Paxillin及CD44的陽性表達率均高于良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織(均P<0.05)。Ezrin、Paxillin陽性表達率與卵巢癌手術病理分期及腹水轉移有關(P<0.05)，與分化程度、病理類型無關(P>0.05)；CD44陽性表達率與卵巢癌手術病理分期、分化程度及腹水轉移有關(P<0.05)，與病理類型無關(P>0.05)。Spearman等級相關分析顯示，卵巢癌組織Ezrin的陽性表達率與Paxillin及CD44的陽性表達率呈正相關(Rs=0.843，0.672；均P<0.05)。結論臨床上可通過檢測Ezrin、Paxillin及CD44蛋白表達明確患者病情惡化情況。

卵巢癌；埃茲蛋白(Ezrin)；樁蛋白(Paxillin)；CD44

有報道顯示，大約75%的卵巢癌患者確診時已處于晚期，喪失了治療的最佳時機〔1〕。埃茲蛋白(Ezrin)在介導細胞骨架運動、黏附和細胞間信號轉導過程中發揮重要作用，與腫瘤發生發展有密切關系〔2〕。樁蛋白(Paxillin)是一種重要的細胞黏附分子，在腫瘤細胞黏附、遷移中發揮重要作用〔3〕。而CD44是一種重要的跨膜糖蛋白，參與細胞的黏附和遷移，與腫瘤轉移和侵襲關系密切〔4〕。本研究旨在探討卵巢癌中Ezrin、Paxillin及CD44的表達及與臨床病理參數的相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2012年2月至2016年2月浙江大學醫學院附屬婦產科醫院收集的卵巢癌組織120例，良性卵巢腫瘤組織100例，正常卵巢組織100例，均經病理學檢查確診。排除標準：先天性卵巢異常者，術前經放、化療及免疫治療者。其中卵巢癌患者年齡34～73〔平均(54.2±10.3)〕歲，國際婦產科聯盟(FIGO)-手術病理分期(2003年版)：Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期88例；分化程度：低分化41例，中分化55例，高分化24例；病理類型：卵巢漿液性癌63例，卵巢黏液性癌20例，卵巢透明細胞癌19例，混合細胞癌18例；存在腹水轉移71例，無腹水轉移49例。良性卵巢腫瘤患者年齡36～74〔平均(54.4±10.4)〕歲。正常卵巢組織者年齡35～75〔平均(54.6±10.3)〕歲。3組一般資料比較無顯著差異(P>0.05)，存在可比性。

1.2研究方法 應用免疫組化SP法檢測不同組織中Ezrin、Paxillin及CD44蛋白表達情況。主要試劑包括濃縮型鼠抗人Ezrin單克隆抗體(NewoM2aekers公司生產)，鼠抗人Paxillin單克隆抗體(武漢博士德公司生產)，即用型CD44單克隆抗體(福州邁新試劑公司生產)。具體步驟嚴格按照試劑說明書進行，包括梯度酒精脫水、磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗、高溫熱抗原修復、PBS沖洗、加入生物學一抗過夜、加入生物學二抗、梯度酒精水化、二氨基聯苯胺(DAB)顯色、二甲苯封片等過程，完成檢測后在顯微鏡下觀察。并采用已知的陽性切片為陽性對照，陰性對照采用PBS液代替。

1.3評價標準 所有切片在400倍高倍鏡下觀察，參考Mathew的分級標準〔5〕進行判定，(1)Ezrin、Paxillin結果判定標準：均在細胞質內表達，且呈棕黃色顆粒。根據陽性細胞占比情況進行分級，無陽性細胞表達為陰性，陽性細胞占比<50%為弱陽性，≥50%為陽性。陽性表達率=(弱陽性+陽性)/總例數×100%。(2)CD44結果判定標準：在細胞質內表達，且呈棕色顆粒。根據高倍鏡視野中所見陽性表達細胞占比進行判定：<10%為陰性，≥10%為陽性。

1.4統計學方法 應用SPSS20.0軟件進行χ2檢驗和Spearman相關分析。

2 結 果

2.1不同卵巢組織中Ezrin、Paxillin及CD44表達比較 卵巢癌組織中Ezrin、Paxillin及CD44陽性表達率均顯著高于良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織(均P<0.05)。見表1。

表1 不同卵巢組織中Ezrin、Paxillin及CD44表達比較〔n(%)〕

與正常卵巢組織比較：1)P<0.05；與良性卵巢腫瘤組織比較：2)P<0.05

2.2Ezrin、Paxillin、CD44與卵巢癌的臨床病理學參數分析 Ezrin、Paxillin陽性表達率與卵巢癌手術病理分期及腹水轉移有關(P<0.05)，與分化程度、病理類型無關(P>0.05)。CD44陽性表達率與卵巢癌手術病理分期、分化程度及腹水轉移有關(P<0.05)，與病理類型無關(P>0.05)。見表2。

表2 Ezrin、Paxillin、CD44與卵巢癌的臨床病理學參數分析〔n(%)〕

2.3卵巢癌組織中Ezrin、Paxillin及CD44表達的相關性 卵巢癌組織Ezrin的陽性表達率與Paxillin及CD44的表達陽性率呈正相關(Rs=0.843，0.672;均P<0.05)。

3 討 論

卵巢癌是婦科腫瘤中病死率最高的惡性腫瘤，且發病早期具有較強的隱匿性，臨床上一直缺乏早期有效的診斷，待到相關癥狀明顯時，通常已是中晚期〔6〕。

本研究結果表明，Ezrin、Paxillin及CD44均在卵巢癌的發生、發展過程中起著至關重要的作用。Ezrin的臨床表達具有相對的組織及細胞特異性，主要在維持細胞生存及形態方面發揮獨特作用，同時可通過和腫瘤細胞表面黏附分子產生作用，從而對腫瘤細胞的分化、侵襲及轉移造成影響〔7〕。Paxillin可通過和整合素發生作用，從而形成細胞和細胞外基質黏附部位，同時與多種信號蛋白與結構蛋白相互作用，進一步參與細胞形態變化、運動、黏附及侵襲的過程，從而對惡性腫瘤細胞的浸潤轉移產生調控作用〔8〕。CD44屬于跨膜糖蛋白，主要是在細胞的黏附及遷移過程中發揮重要作用，且在多種存在侵襲及轉移的腫瘤中顯著表達〔9〕。此外，本研究結果表明，在臨床治療卵巢癌過程中可通過抑制Ezrin的表達或對其活性進行有效控制，可能有效控制病情穩定，甚至好轉。因此，Ezrin可能成為未來抗腫瘤疾病的有效生物靶點之一。另外，卵巢癌患者的Paxillin表達水平可在一定程度上反映病情嚴重程度。Paxillin可通過調控下游的細胞外信號調節激酶(ERK)表達，從而刺激ERK信號的轉導，進一步共同作用促進卵巢癌細胞的增殖、生長，最終導致病情的惡化〔10〕。因此，對Paxillin表達進行有效控制，亦可能成為臨床治療卵巢癌的有效途徑之一。本文結果還提示CD44參與了卵巢癌的發生、發展過程，其表達水平可反映患者病情的嚴重情況。CD44屬于多功能細胞表面黏附分子，亦是透明質酸的受體，可通過對腫瘤細胞和細胞外基質的結合能力產生影響，進一步促進腫瘤的侵襲及轉移。由此，臨床治療中通過抑制CD44的表達，可能有效防止卵巢癌的侵襲及轉移，為卵巢癌的治療提供了新的思路〔11〕。Ezrin、Paxillin及CD44可能通過不同的方式共同參與了卵巢癌的發生、發展、侵襲和轉移，這對開展卵巢癌分子靶向治療提供了新的思路。

1楊 娜，韓燕燕，張梅娜，等.計算機輔助超聲診斷提高卵巢癌診斷的準確性〔J〕.現代生物醫學進展，2017；17(2)：276-9.

2Kawaguchi K，Yoshida S，Hatano R，etal.Pathophysiological roles of ezrin/radixin/moesin proteins〔J〕.Biol Pharm Bull，2017；40(4)：381-90.

3於安康，程 帆，袁 潤，等.Talin和Paxillin在膀胱尿路上皮癌的表達及其意義〔J〕.武漢大學學報(醫學版)，2016；37(3)：422-5.

4黃麗珊，盧碧燕，李仲均，等.CD44v6在卵巢上皮性腫瘤中的表達及其對卵巢癌細胞株侵襲和遷移能力的影響〔J〕.現代腫瘤醫學，2016；24(4)：625-9.

5張麗華，王 婧，武 昕，等.Moesin和RhoA蛋白在外陰鱗癌中的表達及意義〔J〕.中國婦幼保健，2015；30(3)：414-6.

6Yang Y，Zhao X，Li X，etal.Effects of anti-CD44 monoclonal antibody IM7 carried with chitosan polylactic acid-coated nano-particles on the treatment of ovarian cancer〔J〕.Oncol Lett，2017；13(1)：99-104.

7楊 波，李勝澤，馬 玲，等.miR-132靶向調控Ezrin抑制卵巢癌細胞增殖、促進凋亡的實驗研究〔J〕.中國免疫學雜志，2017；33(1)：72-5，80.

8Theocharis S，Kotta-Loizou I，Giaginis C，etal.Expression and clinical significance of concomitant FAK/SRC and p-Paxillin in mobile tongue squamous cell carcinoma〔J〕.Anticancer Res，2017；37(3)：1313-9.

9Nakamura K，Sawada K，Kinose Y，etal.Exosomes promote ovarian cancer cell invasion through transfer of CD44 to peritoneal mesothelial cells〔J〕.Mol Cancer Res，2017；15(1)：78-92.

10Yoo SM，Latifkar A，Cerione RA，etal.Cool-associated tyrosine-phosphorylated protein 1 is required for the anchorage-independent growth of cervical carcinoma cells by binding paxillin and promoting akt activation〔J〕.J Biol Chem，2017；292(9)：3947-57.

11林 潔，席晨光，王玉湘，等.CD44及CK18在卵巢漿液性癌中的表達及臨床意義〔J〕.現代婦產科進展，2016；25(4)：245-8.

R73

A

1005-9202(2017)23-5854-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.23.048

1 紹興市上虞人民醫院婦科

盧永超(1979-)，男，博士，副教授，主要從事婦科腫瘤研究。

俞 楨(1982-)，女，在讀碩士，主治醫師，主要從事婦科腫瘤研究。

〔2017-05-11修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)