一例豬輪狀病毒和圓環病毒2型混合感染的案例報道

龔雙燕，李小璟，李幽幽，陳瑛琪，蔡 瑤，李雨濛，徐逸飛，徐志文，2，朱 玲，2

（1.四川農業大學動物醫學院，四川 成都 611130；2.四川農業大學動物疫病與人類健康四川省重點實驗室，四川 成都 611130）

一例豬輪狀病毒和圓環病毒2型混合感染的案例報道

龔雙燕1，李小璟1，李幽幽1，陳瑛琪1，蔡 瑤1，李雨濛1，徐逸飛1，徐志文1，2，朱 玲1，2

（1.四川農業大學動物醫學院，四川 成都 611130；2.四川農業大學動物疫病與人類健康四川省重點實驗室，四川 成都 611130）

2017年6月，四川省綿陽市某豬場仔豬出現漸進性消瘦、嚴重腹瀉、嘔吐、部分病豬死亡等臨床癥狀，采集發病豬的腸道、淋巴結等樣品，應用PCR、RT-PCR方法進行實驗室檢測。結果表明，該豬場為豬輪狀病毒（PoRV）和豬圓環病毒2型（PCV2）混合感染。通過采取綜合防控措施，病情得到有效控制，減少了該豬場的經濟損失。

豬輪狀病毒；豬圓環病毒2型；混合感染；診斷

輪狀病毒（rotavirus）屬呼腸孤病毒科輪狀病毒屬，可引起各種幼齡動物腹瀉[1]，其中豬輪狀病毒（porcine rotavirus,PoRV）是引起仔豬病毒性腹瀉的主要病原之一，感染仔豬主要表現為腹瀉、嘔吐，嚴重者脫水，且易繼發其他細菌性感染，導致仔豬死亡率升高，生長緩慢，給世界各國的畜牧業造成嚴重的經濟損失[2]。PoRV存在多種血清型，各血清型間無交叉保護或交叉保護性很差[3-4]。資料顯示，我國豬群中輪狀病毒的感染以A群為主，在A群PoRV中VP7是中和抗原基因，它編碼輪狀病毒外殼上的主要糖蛋白和中和抗原蛋白，在各毒株中高度保守[5]。

豬圓環病毒?。≒CVD）是由豬圓環病毒2型（PCV2）引起的一種傳染病。PCV2可導致斷奶仔豬多系統衰竭綜合征的發生，也與豬皮炎腎病綜合征和仔豬先天性震顫相關[6]。PCV2不僅造成豬生長緩慢、飼料報酬降低，還可造成機體免疫抑制，引起其它疾病的暴發[7]，嚴重危害養豬業的發展。

1 發病情況、臨床癥狀和剖檢病變

2017年6月，四川省綿陽市某豬場病豬普遍表現出眼眶周圍呈黑色，精神沉郁，食欲不振；2周齡內仔豬突發嘔吐、腹瀉排出糊狀或者水樣糞便，呈黃綠色、灰色或者黃白色，并混雜一定量的絮狀物，散發腥臭味，死亡率高達95%以上。

解剖病死豬觀察病變發現，肺臟肉變，肺門淋巴結及腸系膜淋巴結不同程度腫大出血，脾腫大發黑，有胸腔積液，腸內有灰綠色或黃白色黏稠液體，血液凝固不良，剖檢采樣后經實驗室檢驗，結合臨床癥狀，診斷為PCV2及PoRV混合感染。對發病豬曾用抗生素類藥物治療，療效不理想。該豬場注射豬傳染性胃腸炎、輪狀病毒二聯弱毒疫苗（哈爾濱獸醫研究所研制）和豬圓環病毒疫苗，并采取綜合防治措施后，病情得到有效控制，減少了豬場的經濟損失。

2 實驗室檢測

2.1 試驗地點

病料（1頭病死仔豬編號1和1頭肥育豬編號2）送至四川農業大學動物生物技術中心進行檢測。

2.2 試驗試劑

DNA、RNA提取試劑盒，Taq DNA聚合酶，RNA反轉錄試劑盒，均購自TaKaRa公司；引物均由上海Sangon生物工程公司合成。

2.3 試驗器材

美國Thermo Micro21R微量離心機購自賽默飛成都分公司；PCR儀購自成都百樂科技有限公司；Eppendorf（EP）管、10 mL注射器。

2.4 檢測方法

先提取病料RNA和DNA，采用反轉錄-聚合酶鏈式反應RT-PCR檢測PoRV，聚合酶鏈式反應PCR方法檢測PCV2。試驗方法均按照試劑盒說明書及分子克隆實驗指南（第3版）[8]操作。所用引物如下。

根據GenBank已發表的PCV2序列，筆者自己設計一對特異引物PCV2-F、PCV2-R，預計擴增產物大小為178 bp，PoRV引物源自本實驗室檢測用引物，均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成（表1）。

表1 PCR引物序列

3 結果與防治措施

（1）圖1中1、2泳道為豬圓環病毒檢測結果，條帶大小為178 bp，呈陽性；圖2中1、2泳道為豬輪狀病毒檢測結果，條帶大小為500 bp，呈陽性。圖1、圖2中分別設有陰、陽性對照，證明本試驗是成立的，可信度極高。根據檢驗結果，結合臨床癥狀、剖檢變化，診斷該豬場發生的疾病為PCV2及PoRV混合感染。

圖1 兩份病豬樣品PCV2電泳結果

圖2 兩份病豬樣品PoRV電泳結果

（2）針對診斷結果，采取防治措施：①免疫接種。對未發病豬群使用豬傳染性胃腸炎、輪狀病毒二聯弱毒疫苗（哈爾濱獸醫研究所研制）和豬圓環病毒疫苗進行免疫預防。兩種疫苗免疫時間要有一定的間隔，注射疫苗保證免疫到位，提高豬群整體的免疫力，防制疾病繼續發生和擴散；新生仔豬可在吮乳前肌內注射傳染性胃腸炎、輪狀病毒二聯弱毒疫苗1 mL，至少經過30 min才能夠再吮乳，并在斷奶前7～10 d肌內注射2 mL，能夠持續保護6個月；妊娠母豬可分別在分娩前5～6周和1周肌內注射1 mL，能夠持續保護1年；架子豬、肥育豬和種公豬可肌內注射1 mL，能夠持續保護6個月；②其次加強飼養管理。豬場嚴格采取全進全出制，確保從沒有感染疾病的地區引進豬群。豬圈要經常進行清掃，且飼養不同批次的豬圈必須經過全面徹底的消毒處理；確保飼喂全價飼料，營養豐富，并注意給母豬及仔豬供給生長所必須的各種營養元素，提高機體抵抗疾病的能力。

（3）目前，輪狀病毒還沒有特殊性的防治措施。主要推薦采取對癥治療，即避免發生脫水，抑制腹瀉，控制繼發感染其他病菌。常用措施是立即停止喂乳，停止飼料飼喂，可使用葡萄糖鹽水替代乳汁，如飲用葡萄糖甘氨酸溶液，能夠顯著緩解嘔吐和腹瀉癥狀。

（4）豬圓環病毒病是一種免疫抑制疾病，病原可破壞機體的免疫系統，導致機體抗病力降低。PCV2經常與高致病性藍耳病病毒、豬偽狂犬病病毒、副豬嗜血桿菌等病原發生混合感染或繼發感染，與輪狀病毒混合感染相比較為罕見，如果豬場發病后，疫情會更加嚴重，病死率也大幅增加。目前對豬圓環病毒病的防制主要是使用滅活疫苗對豬群進行免疫預防，同時結合生物安全、飼養管理和藥物預防等綜合防控措施，以達到防治該病的目的。

綜上所述，對豬輪狀病毒病和豬圓環病毒病的防制，應采取健全的生物安全措施、科學免疫接種、定期病原監測和加強飼養管理等綜合防控措施，才能有效控制疾病的發生。若要消除PoRV和PCV2，可考慮清除帶毒豬，以達到凈化疾病的目的，凈化實施過程中由于涉及大量種豬的淘汰和引進更新，投入的時間和經濟成本都會很高，可考慮先由原種豬場實施。

[1] 殷震.動物病毒學[M].北京：科學出版社，1997.

[2] 王玲，蒲萬霞，孟小琴，等.2007年甘肅省仔豬輪狀病毒性腹瀉的流行病學調查研究[J].中國動物檢疫，2008，25（11）：40-41.

[3] Hoshino Y,Nishikawa K,Benfield D A,et al.Mapping of antigenic sites involved in serotype-cross-reactive neutralization on group A rotavirus outercapsid glycoprotein VP7[J].Virology,1994,199(1):233.

[4] Akopian T A,Lunin V G,Kruglyak V A,et al.Nucleotide sequence of the cDNA for porcine rotavirus VP7 gene(strain K)[J].Virus Genes,1992,6(4):393-396.

[5] 師東方，李一經，賈永清，等.豬輪狀病毒中國分離株JL94 VP7基因的克隆與序列分析[J].中國獸醫雜志，2003，39（8）：8-11.

[6] 周繼勇，陳慶新，葉菊秀，等.豬圓環病毒2型感染的血清學分析[J].中國獸醫學報，2004，24（1）：1-3.

[7] 王慧，宋宏曉，師麗剛，等.豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病病毒混合感染的檢測分析[J].中國畜牧獸醫，2012，39（9）：173-177.

[8]J.薩姆布魯克，D.W.拉塞爾，薩姆布魯克，等.分子克隆實驗指南[M].第3版.科學出版社，2002.

S858.285.3

A

1002-1957(2017)06-0097-02

2017-10-20

四川省科技支撐計劃（2017NZ0038）；“十二五”農村領域國家科技計劃課題（2015BAD12B04-2.3）

龔雙燕（1994-），女，重慶開縣人，在讀碩士研究生，研究方向是動物傳染病病原分子生物學.E-mail:gsymanas@163.com

朱 玲，女，教授，博士，研究方向為動物傳染病病原分子生物學.E-mail:abtcxzw@126.com

（編輯：柳青）