腦膠質瘤組織SPARC、p15表達及意義

戚繼，孫濤，趙澎，任同

(首都醫科大學附屬北京天壇醫院，北京100050)

腦膠質瘤組織SPARC、p15表達及意義

戚繼，孫濤，趙澎，任同

(首都醫科大學附屬北京天壇醫院，北京100050)

目的探討腦膠質瘤組織富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)、p15蛋白表達變化及其臨床意義。方法采用免疫組化SP法檢測83例腦膠質瘤患者(Ⅰ～Ⅱ級28例、Ⅲ級32例、Ⅳ級23例)腦膠質瘤組織及瘤旁正常腦組織中SPARC、p15表達；分析不同臨床分期、不同存活時間患者瘤組織SPARC、p15陽性表達情況。結果瘤組織SPARC陽性表達率高于瘤旁組織,P<0.05；p15陽性表達率低于瘤旁組織，P<0.05。隨著臨床分級升高， 瘤組織SPARC表達升高(P<0.05)，p15表達下降(P<0.05)；存活不足5年者SPARC陽性表達率高于存活5年及以上者(P<0.05)，p15陽性表達率低于存活5年及以上者(P<0.05)。結論腦膠質瘤組織中SPARC表達上調、p15表達下調。檢測腦膠質瘤組織中SPARC、p15有助于判斷腦膠質瘤患者病情及評估預后。

腦膠質瘤；富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白；p15蛋白；臨床分級；存活時間

腦膠質瘤是顱內腫瘤的高發類型[1，2]，患者預后較差[3]，其發生機制目前仍不明確。膠質瘤早期沒有明顯的臨床癥狀，亦無明確的腫瘤標記物輔助確診，因此早期確診率低。富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)曾被稱為骨連蛋白，參與發育、組織修復等多種生理過程，與黑色素瘤、胰腺癌、肺癌、卵巢癌等的發生發展有關[5]。p15蛋白是一種細胞周期依賴性的蛋白激酶抑制因子，可與CDK4或CDK6結合抑制細胞從G1期進入S期，使細胞周期停滯于G1期，p15蛋白表達缺失可以導致大量細胞進入S期，細胞增殖異常活躍形成腫瘤[6，7]。本研究探討腦膠質瘤組織SPARC、p15表達變化及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 研究對象為2011年1月～2012年1月于我院行手術治療的腦膠質瘤患者83例，其中男34例、女49例，年齡20～59(41.5±9.2)歲。均經術后病理學證實診斷。參照WHO 2007年版中樞神經系統腫瘤分級標準[8]，Ⅰ～Ⅱ級28例，Ⅲ級32例，Ⅳ級23例。患者術前均未接受放化療及腫瘤免疫治療。排除患有其他部位惡性腫瘤的患者，排除患有心、肝、肺等嚴重臟器損傷的患者。術后存活不足5年者69例，5年及以上者14例。

1.2 瘤組織及瘤旁組織SPARC、p15表達檢測 取手術切除的腦膠質瘤組織存檔蠟塊及其瘤旁正常腦組織存檔蠟塊。采用免疫組化SP法檢測SPARC、p15表達。以已知陽性切片為陽性對照，以PBS代替一抗為陰性對照。由兩位病理科醫師閱片。 采用染色強度評分和陽性細胞百分比評分[9]判斷結果。染色強度評分： 細胞質中出現棕黃色顆粒為SPARC陽性細胞，免疫組化SP染色后細胞核中出現棕黃色顆粒為p15陽性細胞。光鏡下細胞質(核)無著色、淡黃色、棕黃色和棕褐色依次記為0、1、2、3分。陽性細胞百分比評分：計數5個400×高倍視野，每個視野計數100個細胞，計算陽性細胞百分比(陽性細胞數/500×100%)。陽性細胞百分比：0～5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。染色強度評分與陽性細胞百分比的乘積為0判為陰性，其余為陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS21.0統計軟件。瘤組織、瘤旁組織SPARC、p15陽性表達率比較以及不同臨床分期、不同存活時間者瘤組織SPARC、p15陽性表達情況比較采用χ2檢驗和Fisher確切概率法。瘤組織SPARC、p15陽性表達情況相關性分析采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 瘤組織及瘤旁組織SPARC、 p15表達 瘤組織及瘤旁組織SPARC陽性表達率分別為81.9%(68/83)、24.1%(20/83),P<0.05；p15陽性表達率分別為25.3%(21/83)、50.6%(42/83)，P<0.05。

2.2 不同臨床分級、存活時間者瘤組織SPARC、p15表達，隨著臨床分級升高，瘤組織SPARC表達升高(P<0.05)、p15表達下降(P<0.05)；存活不足5年者SPARC陽性表達率高于存活5年及以上者(P<0.05)，存活不足5年者p15陽性表達率低于存活5年及以上者(P<0.05)；見表1。Spearman等級相關分析結果顯示，瘤組織SPARC、p15表達呈負相關(rs=-0.810，P<0.01)。

表1 不同臨床分級及存活時間者瘤組織SPARC、p15表達

3 討論

腦膠質瘤在腦部呈浸潤性生長，通常與正常的腦組織沒有明確的界限，且不局限于一個腦葉[10]。患者早期沒有明顯癥狀，常規影像學、血常規等無創檢查手段不能確診。SPARC蛋白的編碼基因SPARC定位于染色體5q31～32，SPARC蛋白相對分子質量32 kD,是一種富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白，是一種非結構性糖蛋白，又稱為骨連接素或基膜40。SPARC蛋白廣泛分布于人體組織，通過于細胞外基質不同蛋白的相互作用，參與人組織的生成及結構維持、細胞增殖、細胞遷移等多種生理過程。SPARC與多種腫瘤的發生發展有關。但是SPARC與腫瘤的關系存在異質性，如其在乳腺癌、黑色素瘤組織中表達上調，而在胰腺癌組織中表達下調。這可能是由于不同腫瘤組織內含有的蛋白水解酶對SPARC的剪切位點不同，產生的蛋白水解片段也不相同，不同的蛋白水解片段產生的生物學效果也不相同；另外不同腫瘤的受體表達情況不同，這也可能導致不同腫瘤對SPARC的反應不同[12～15]。本研究結果顯示，膠質瘤組織中SPARC 陽性表達率高于瘤旁組織，表明腦膠質瘤組織中SPARC表達上調。進一步研究發現，瘤組織SPARC表達隨臨床分期而升高，表明檢測腦膠質瘤組織SPARC表達有助于判斷患者病情。本研究結果顯示，存活不足5年者SPARC陽性表達率高于存活5年及以上者。提示瘤組織SPARC表達有助于腦膠質瘤患者的預后判斷。腦膠質瘤惡性程度較高，不同臨床分期的腦膠質細胞瘤治療方案和預后差距較大。對腦膠質細胞瘤的分期標準進行改進以獲得準確的臨床分期和最恰當的治療方案一直是神經外科努力的方向。本研究結果為神經外科工作者今后的研究提供了方向。

p15基因又稱細胞周期依賴性激酶抑制基因，是一種和多種腫瘤相關的抑癌基因，定位于9p21，與編碼的p15蛋白和p16蛋白一起，通過結合CDK4或CDK6(p15/p16-CDK4/CDK6-Rb通路)抑制細胞增殖，抑制腫瘤[16～20]。本研究結果顯示，瘤組織p15陽性表達率低于瘤旁組織；提示瘤組織p15表達下降可能參與了腦膠質瘤的發生過程；臨床分期越晚，瘤組織p15表達越低。提示檢測瘤組織p15表達有助于判斷病情。本研究結果顯示，存活不足5年者p15陽性表達率低于存活5年及以上者。提示檢測瘤組織p15表達有助于膠質瘤患者的預后判斷。細胞周期調控主要通過p53通路和Rb通路。p15是Rb通路的重要組成部分。p15可以通過調控CDK4蛋白的表達影響Rb的磷酸化，進而發揮細胞周期調控作用，p15表達缺失與多種腫瘤的發生發展有關。本研究結果表明，腦膠質瘤組織中p15蛋白表達缺失可能是腦膠質細胞惡性轉化為腦膠質瘤細胞的重要原因，檢測腦膠質瘤組織中p15蛋白表達可能助于判斷腦膠質瘤患者的病情，并有助于醫師確定治療方案和評估預后。

SPARC、p15均參與了腦膠質瘤的發生發展過程。SPARC發揮作用可能通過調節腫瘤細胞因子表達、局部血管生成、細胞外基質合成、上皮細胞間質細胞轉化等多種途徑，這些途徑可能與p15有交叉，故腦膠質瘤組織中SPARC、p15表達存在相關性。本研究結果顯示，腦膠質瘤組織中SPARC、p15表達呈負相關，驗證了筆者的推測。

綜上所述，腦膠質瘤組織中SPARC表達上調、p15表達下調。檢測腦膠質瘤組織中SPARC、p15有助于判斷腦膠質瘤患者的病情及評估預后。但是本研究樣本量較小，今后需要進一步擴大樣本量以驗證本研究結果的正確性。

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