淋巴結穿刺細胞學檢查聯合HMGB1、Tg檢測對甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移的診斷價值

鄧彥東，馬曉雯，劉文聰，邵云，閆國超

(河北醫科大學第一醫院，石家莊050031)

淋巴結穿刺細胞學檢查聯合HMGB1、Tg檢測對甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移的診斷價值

鄧彥東，馬曉雯，劉文聰，邵云，閆國超

(河北醫科大學第一醫院，石家莊050031)

目的探討超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合高遷移率族蛋白B1(HMGB1)、甲狀腺球蛋白(Tg)檢測對甲狀腺乳頭狀癌患者術后淋巴結轉移的診斷價值。方法選取行甲狀腺乳頭狀癌根治術治療后因頸部淋巴結腫大再次入院患者75例，均進行二次手術切除腫大淋巴結，術后病理顯示淋巴結轉移67例。患者均于二次手術前行超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查，并采用ELISA法檢測穿刺淋巴結組織HMGB1、Tg表達。以術后組織病理學診斷為金標準，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合淋巴結組織HMGB1、Tg檢測對甲狀腺乳頭狀癌術后頸部淋巴結轉移的診斷效能。結果淋巴結細針穿刺細胞學檢查診斷淋巴結轉移55例，漏診12例；診斷淋巴結轉移的特異性為100%，敏感性為82.1%(55/67)。淋巴結轉移者淋巴結組織HMGB1、Tg表達均高于未轉移者(P均<0.01)。淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合HMGB1、Tg表達檢測診斷淋巴結轉移的敏感性為97.0%、準確率為96.0%，均高于各項單項檢測；診斷特異性為87.5%，低于淋巴結細針穿刺細胞學檢查的100%。結論超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合HMGB1、Tg檢測可提高對甲狀腺乳頭狀癌術后淋巴結轉移的診斷敏感性及準確性。

甲狀腺乳頭狀癌；淋巴結轉移；細針穿刺細胞學檢查；超聲；高遷移率族蛋白B1；甲狀腺球蛋白

近年來甲狀腺癌發病率逐年上升，其中甲狀腺乳頭狀癌約占80%[1]。根治性手術是目前臨床治療甲狀腺乳頭狀癌的主要方法，多數患者預后良好；但仍有部分患者術后出現復發或淋巴結轉移，預后差。超聲引導下細針穿刺細胞學檢查是診斷淋巴結是否轉移的最常用方法，診斷特異性高，但敏感性不足。惡性腫瘤發生、發展涉及多種基因的協同作用，且基因改變可能出現在細胞學改變之前[2,3]，因此尋找一種可行性高的術前篩查淋巴結轉移的方法至關重要。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)和甲狀腺球蛋白(Tg)均為甲狀腺癌的標志物[4,5]。本研究探討超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合HMGB1、Tg檢測對甲狀腺乳頭狀癌術后淋巴結轉移的診斷價值。

1 臨床資料

選取海南省人民醫院2012年6月～2013年12月行甲狀腺乳頭狀癌根治術治療，術后(2014年9月～2016年12月)因頸部淋巴結腫大再次入院的75例患者為研究對象，其中男33例、女42例，年齡19～63(45.3±9.4)歲。納入標準：①采用根治性手術切除腫瘤組織，術后病理證實為甲狀腺乳頭狀癌；②根據《2012中國甲狀腺結節和分化型甲狀腺癌指南》推薦的甲狀腺癌術后復發危險度分層為高危型；③患者自愿簽署知情同意書；④具有完整的長期隨訪資料，隨訪時間≥2年。排除標準：①肝、腎功能障礙；②妊娠期或哺乳期；③凝血功能異常；④免疫或代謝系統疾病。患者入院后均行二次手術，將二次手術切除的頸部腫大淋巴結標本置于4%多聚甲醛中固定過夜，經梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等常規流程制備厚度為5～7 μm組織切片，二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫苯和水化，HE染色，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。結果顯示，淋巴結轉移67例(含多區域轉移)，包括Ⅵ區35例(52.2%)、Ⅱ區22例(32.8%)、Ⅲ區13例(19.4%)、Ⅳ區9例(13.4%)。

2 方法與結果

2.1 超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查 患者均于二次手術前行超聲引導下細胞學檢查。采用日本TSK株式會社20 G一次性介入穿刺針，取仰臥位，肩部墊高，先行彩色多普勒超聲(日本東芝，790A)掃描確定穿刺點，以病理變化較明顯且避開大血管和重要神經的位置為穿刺點。穿刺點常規碘伏消毒，75.0%乙醇脫碘，1%利多卡因局部浸潤麻醉；進針直達淋巴結中心，負壓抽吸數次，吸出標本，推至載玻片上，立即涂片，均勻推開，自然晾干，95%乙醇固定2 h以上；HE染色，顯微鏡下觀察，將出現核溝、核內假包涵體、毛玻璃樣核、多核巨細胞及砂礫體等細胞為陽性細胞。結果顯示，出現陽性細胞即淋巴結轉移55例，均與術后組織病理學(金標準)診斷一致；漏診12例；診斷淋巴結轉移的特異性為100%，敏感性為82.1%(55/67)。12例漏診患者中3例因抽吸樣本為液化組織，未能獲得細胞學結果；其余9例均在完成細胞學診斷的前提下漏診。

2.2 淋巴結組織HMGB1、Tg表達檢測 將2.1中細針穿刺所得組織標本與生理鹽水(1∶9)混勻，以電動勻漿器充分勻漿，4 000 r/min離心10 min，取上清液，采用全自動生化分析儀(AU5800，德國貝克曼)以ELISA法(試劑盒購自上海恒遠生物科技有限公司)檢測HMGB1、Tg表達。采用SPSS20.0統計軟件，淋巴結轉移與非轉移者HMGB-1、Tg表達比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。結果顯示，淋巴結轉移者淋巴結組織HMGB1、Tg表達分別為(16.35±3.12)、(1.15±0.52)ng/mL，淋巴結未轉移者分別為(12.26±2.85)、(0.84±0.41)ng/mL，兩者比較P均<0.01。

2.3 超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合淋巴結HMGB1、Tg表達檢測對甲狀腺乳頭狀癌術后頸部淋巴結轉移的診斷效能 采用受試者工作特征(ROC)曲線分析超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合淋巴結HMGB1、Tg表達檢測對甲狀腺乳頭狀癌術后頸部淋巴結轉移的診斷效能。結果顯示，HMGB1診斷甲狀腺乳頭狀癌術后頸部淋巴結轉移的最佳截斷值為13.52 ng/mL(≥13.52 ng/mL為陽性，<13.52 ng/mL為陰性)，Tg診斷甲狀腺乳頭狀癌術后頸部淋巴結轉移的最佳截斷值為1.06 ng/mL(≥1.06 ng/mL為陽性，<1.06 ng/mL為陰性)。淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合HMGB1、Tg表達檢測診斷淋巴結轉移的敏感性為97.0%、準確率為96.0%，均高于各項單項檢測；診斷特異性為87.5%，低于淋巴結細針穿刺細胞學檢查的100%。見表1、2。

表1 淋巴結HMGB1、Tg檢查結果與病理結果(例)

表2 淋巴結細針穿刺細胞學檢查及HMGB1、Tg表達檢測對甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移的診斷效能(%)

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中最常見的病理類型，惡性程度低，但淋巴結轉移率高(30%～80%)。術后復發和頸部淋巴結轉移是導致甲狀腺癌患者死亡的主要原因[6]。既往研究多集中于甲狀腺乳頭狀癌的術前淋巴結轉移率及轉移模式，而對于術后轉移研究較少。

目前，確定淋巴結轉移的金標準仍然是病理學診斷，但該結果只能在再次手術后獲得，不適合術前篩查。術前篩查淋巴結轉移的方法主要有正電子發射型計算機斷層掃描、CT、MRI、超聲、細針穿刺細胞學檢查等。其中，正電子發射型計算機斷層掃描診斷敏感性和特異性均較高，但費用昂貴，不易普及[7]；CT、MRI檢查對大體積淋巴結的診斷敏感性較高，對于直徑<1 cm者難以定性；彩色多普勒超聲具有操作簡單、安全無創、經濟實用等優點，是頸部淋巴結轉移常用檢查工具之一，尤其適用于臨床篩查，但其診斷敏感性和特異性均不理想[8]；細針穿刺細胞學檢查因取樣范圍及取樣量有限，容易發生漏診[9]。Tg是甲狀腺腫瘤的經典標記物，主要由甲狀腺濾泡上皮分泌，存在于甲狀腺組織，只有少量進入血液循環，在甲狀腺炎癥、甲狀腺結節、甲狀腺癌和轉移淋巴結中其表達均顯著升高[10，11]。血清Tg水平受多種因素影響，促甲狀腺素可促進Tg分泌，INF-γ、TNF-α和維甲酸可抑制Tg分泌。甲狀腺乳頭狀癌患者經手術、淋巴結清掃和131I治療后，其細胞和組織中Tg應處于極低水平，對于術后Tg仍較高者，應考慮復發或淋巴結轉移的可能性[12]。既往研究顯示，單純檢測Tg診斷甲狀腺乳頭狀癌術后復發的敏感性為55%～80%[13]。高遷移率族蛋白(HMG)在高等動物的基因復制、重組、轉錄等方面均發揮重要調控作用，根據分子量和分子結構可分為A、B、N三個家族，其中HMGB1在B家族含量最為豐富，是一個高度保守的序列，在哺乳動物中其基因序列具有高度同源性[14]。細胞外的HMGB1與受體結合后可刺激細胞增殖、分化、遷移，并誘發炎性反應，與腫瘤的發生、發展及炎性浸潤密切相關。當細胞發生壞死和損傷后，HMGB1由細胞內釋放入血，其組織表達升高；當發生腫瘤時，局部組織可釋放大量HMGB1，造成慢性炎癥，同時破壞健康細胞，促進腫瘤細胞向周圍組織浸潤與遷移。有研究報道，甲狀腺乳頭狀癌患者HMGB1表達高于健康人群，且頸部淋巴結轉移者HMGB1表達高于非轉移者[15]。

本研究經術后病理證實發生淋巴結轉移67例(含多區域轉移者)，以Ⅵ區最為常見，無Ⅰ區轉移者，與其他報道[11]基本相似。術前淋巴結細針穿刺細胞學檢查診斷淋巴結轉移55例，12例漏診，診斷淋巴結轉移的特異性為100%，敏感性為82.1%；12例漏診者中3例因抽吸樣本為液化組織，無法判斷細胞結構，其余9例漏診原因可能為細針穿刺取樣范圍局限，未獲得完整細胞，或該區域細胞尚未出現典型的惡性形態特征[11,12]。

分析本研究結果，超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合HMGB1、Tg檢測診斷診斷甲狀腺乳頭狀癌術后淋巴結轉移的敏感性和準確率均高于各項單項檢測；診斷特異性為87.5%，低于淋巴結細針穿刺細胞學檢查的100%。

綜上所述，超聲引導下淋巴結細針穿刺細胞學檢查聯合HMGB1、Tg檢測可提高甲狀腺乳頭狀癌術后淋巴結轉移的診斷敏感性及準確性。

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邵云(E-mail: 13331369972@163.com)

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2017-03-06)