腎癌組織miR-222、miR-122表達變化及其臨床意義

蔡成寬，支運來，王鯤鵬，涂傳全，楊文發，孫方滸

(連云港市第一人民醫院，江蘇連云港222002)

腎癌組織miR-222、miR-122表達變化及其臨床意義

蔡成寬，支運來，王鯤鵬，涂傳全，楊文發，孫方滸

(連云港市第一人民醫院，江蘇連云港222002)

目的探討微小RNA-222(miR-222)、miR-122在腎癌發生、發展中的作用。方法選擇腎癌患者72例，收集其術中切除的腎癌組織及其配對癌旁正常組織標本。采用實時熒光定量PCR法檢測腎癌組織及其配對癌旁正常組織miR-222、miR-122表達，分析腎癌組織miR-222、miR-122表達與患者臨床病理參數的關系及二者的相關性。結果腎癌組織及癌旁正常組織miR-222相對表達量分別為2.38±0.64、1.12±0.55，miR-122相對表達量分別為2.86±0.39、0.98±0.43；腎癌組織miR-222、miR-122相對表達量均高于癌旁正常組織(P均<0.01)。腎癌組織miR-222、miR-122表達與患者性別、年齡、病理類型、腫瘤直徑均無關(P均>0.05)，與患者病理分級、TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移均有關(P均<0.01)。腎癌組織miR-222、miR-122相對表達量呈正相關(r=0.517，P<0.05)。結論腎癌組織miR-222、miR-122表達均升高，二者可能協同促進腎癌的發生、發展；癌組織miR-222、miR-122表達變化有助于病情評估。

腎癌；微小RNA-222；微小RNA-122； 疾病進展

腎癌發病率在泌尿系統惡性腫瘤中僅次于膀胱癌，約占成人惡性腫瘤的2%[1,2]。腎癌的發病機制尚不完全清楚，目前臨床上也無早期診斷腎癌以及評估病情嚴重程度的特異性指標。微小RNA(miRNA)是內源性非編碼RNA分子，長度為19～25個核苷酸，通過與mRNA的3′-UTR區結合而降解靶mRNA或者抑制翻譯過程，進而介導并調控基因表達，參與細胞增殖、分化及凋亡過程[3,4]。miR-222、miR-122是參與調控惡性腫瘤發生、發展過程的重要miRNA，在乳腺癌[5]、胃癌[6]、肝癌[7]等惡性腫瘤組織或者細胞中均呈異常高表達，但是其在腎癌組織中的表達變化鮮見報道。本研究觀察了miR-222、miR-122在腎癌組織中的表達變化，并分析其與腎癌患者臨床病理參數的關系，探討其在腎癌發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2016年12月于我院擬行手術治療的腎癌患者72例，男45例，女27例；年齡38～79歲，平均62.7歲；均經術后病理檢查證實診斷。組織類型：透明細胞癌58例，乳頭狀癌14例；腫瘤直徑：<2.5 cm 37例，≥2.5 cm 37例；病理分級：G1級(高分化)31例，G2級(中分化)22例，G3級(低分化)19例；TNM分期[8]：Ⅰ、Ⅱ期39例，Ⅲ、Ⅳ期33例；浸潤深度：T1、T2期20例，T3、T4期52例；淋巴結轉移29例，無淋巴結轉移43例。患者的臨床資料均保存完整，手術前均未接受放、化療以及其他可能影響本研究結果的抗腫瘤治療方案。排除合并其他類型惡性腫瘤患者。收集患者術中切除的腎癌組織及其配對癌旁正常組織(距離癌組織邊緣>5 cm)各72例份，迅速置于液氮中進行冷凍并保存于-80 ℃冰箱中。本研究通過醫院倫理委員會審核，患者及家屬均知情同意。

1.2 腎癌組織及其配對癌旁正常組織miR-222、miR-122表達檢測 采用實時熒光定量PCR法。將保存于液氮中的腎癌組織以及癌旁組織標本在液氮中進行研磨，按照TRIzol試劑盒說明提取總RNA，紫外分光光度儀檢測RNA吸光度(OD)值，OD260/OD280>1.8說明提取得到的總RNA純度較好。1%瓊脂糖變性凝膠電泳檢測RNA完整性較好，按照All-in-oneTMmiRNA RT-qPCR detection Kit試劑盒上說明書反轉錄成cDNA。miR-222引物序列：上游引物： 5′-GTTCGTGGGAGCTACATCTGGC-3′，下游引物：5′-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3′，引物長度200 bp；miR-122引物序列：上游引物：5′-CAAGCGTTGGAGTGTGACA-3′，下游引物：5′-CGTCCTACCATTCTCCAGC-3′，引物長度180 bp；內參U6引物序列：上游引物：5′-ATGGTTCGTGGGTGAGGTAGTAGGTTGT-3′，下游引物5′-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3′ ，引物長度200 bp。PCR反應體系20 μL：2×All-in-one qPCR Mix 10 μL，(2 μmol/L)All-in-one miRNA qPCR Primer 2 μL，PCR通用引物2 μL，cNDA(按照1∶5稀釋)2 μL，50×ROX參比染料0.4 μL，補充無RNA酶的超純水至20 μL。PCR反應條件：95 ℃預變性10 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸10 s，共40循環。采用2-ΔΔCt法計算miR-222、miR-122相對表達量。

1.3 腎癌組織miR-222、miR-122表達與患者臨床病理參數的關系 收集患者的臨床資料，分析腎癌組織miR-222、miR-122表達與患者臨床病理參數的關系。采用Pearson積矩相關法分析miR-222與miR-122表達的關系。

2 結果

2.1 腎癌組織及癌旁正常組織miR-222、miR-122表達比較 腎癌組織及癌旁正常組織miR-222相對表達量分別為2.38±0.64、1.12±0.55，miR-122相對表達量分別為2.86±0.39、0.98±0.43；腎癌組織miR-222、miR-122相對表達量均高于癌旁正常組織(P均<0.01)。

2.2 腎癌組織miR-222、miR-122表達與患者臨床病理參數的關系 腎癌組織miR-222、miR-122表達與患者性別、年齡、病理類型、腫瘤直徑均無關(P均>0.05)，與患者病理分級、TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移均有關(P均<0.01)。見表1。

表1 腎癌組織miR-222、miR-122表達與患者臨床病理參數的關系

2.3 腎癌組織miR-222、miR-122的關系 腎癌組織miR-222、miR-122相對表達量呈正相關(r=0.517，P<0.05)。

3 討論

隨著醫學技術的快速發展，從分子水平上研究腎癌的發病機制已逐漸成為研究熱點。miRNA是一類內源性非編碼小分子RNA，可促進靶基因mRNA的降解或者抑制翻譯過程，進而調控細胞內靶基因蛋白表達[9]。研究發現，miRNA不僅參與了細胞的分化、增殖、代謝和凋亡等系列過程，在惡性腫瘤的發生、發展過程中也有重要調控作用[10]。 研究發現，在易發生移位、缺失或者斷裂區域等脆弱位點，有超過50%的腫瘤相關miRNA基因通過介導致癌基因或抑癌基因，參與惡性腫瘤的侵襲、轉移等過程[11～13]。miR-222基因位于X染色體p11.3區約1 kb的區域內，在多種惡性腫瘤組織中呈異常表達[14]。Yang等[15]研究發現，miR-222可靶向抑制p27基因表達，進而通過阻斷肝癌細胞周期而抑制其增殖。Li等[6]研究顯示，miR-222在由幽門螺桿菌所致的胃癌黏膜中表達上調。Zhang等[16]研究表明，miR-222高表達提示膀胱癌患者預后不良。miR-122是肝臟特異性miRNA，位于人類18號染色體的q21.31區。研究表明，miR-122在非酒精性脂肪肝病、肝炎相關損傷以及肝臟惡性腫瘤等疾病中呈高表達[17]。Xing等[18]研究顯示，miR-122高表達提示肝癌患者預后較差。有研究顯示，miR-222和miR-221可介導PTEN的表達而調控胃癌腫瘤細胞的生長、侵襲，并且其表達上調可促進胃癌細胞的增殖[19]。本研究結果顯示，腎癌組織miR-222、miR-122表達均高于癌旁組織，提示miR-222、miR-122高表達可能參與了腎癌的發生過程。本研究結果顯示，分化程度低、臨床分期晚、腫瘤浸潤深以及出現淋巴結轉移者癌組織miR-222、miR-122表達明顯上調，提示miR-222、miR-122參與了腎癌的進展過程。本研究Pearson積矩相關分析結果顯示，miR-222與miR-122呈正相關關系，提示miR-222表達水平上調可能促進miR-221的高表達，兩者相互作用進而促進腎癌細胞生長并抑制其凋亡，最終參與腎癌細胞的發生、發展過程，但是其具體機制仍需進一步探討。

綜上所述，miR-222、miR-122均可促進腎癌的發生、發展，二者可能具有協同作用；癌組織miR-222、miR-122表達變化有助于腎癌的病情評估。

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江蘇省科技計劃發展項目(BK2014187)。

孫方滸(E-mail： sunfanghu_5123@yeah.net)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.44.020

R737.11

B

1002-266X(2017)44-0063-03

2017-03-19)