三陰性乳腺癌組織中Stathmin、p53蛋白表達變化及意義

李黎洪，陳智偉，陳昱，吳麗婷

(莆田學院附屬醫院，福建莆田 351100)

三陰性乳腺癌組織中Stathmin、p53蛋白表達變化及意義

李黎洪，陳智偉，陳昱，吳麗婷

(莆田學院附屬醫院，福建莆田 351100)

目的觀察Stathmin和p53蛋白在三陰性乳腺癌組織中的表達變化，并探討其意義。方法采用免疫組化法分別檢測106例三陰性乳腺癌組織(觀察組)及42例非三陰性乳腺癌組織(對照組)中Stathmin和p53蛋白表達，Stathmin和p53蛋白表達間的相關性采用Spearman等級相關分析。結果觀察組及對照組癌組織中Stathmin蛋白表達陽性率分別為83.02%(88/106)、35.71%(15/42)，p53蛋白表達陽性率分別為59.43%(63/106)、11.90%(5/42)，兩組乳腺癌組織中Stathmin和p53蛋白表達比較，差異均有統計學意義(χ2分別為31.81、23.76，P均lt;0.05)。Stathmin和p53蛋白在腫瘤TNM分期及有無區域淋巴結轉移方面均存在統計學差異(P均lt;0.05)，而與患者年齡、腫瘤大小及組織學類型均無關(P均gt;0.05)；Stathmin與組織學分級無關(χ2=2.97，P=0.23)，而p53與組織學分級有關(χ2=9.49，P=0.00)；Stathmin與p53蛋白陽性表達呈正相關(r=0.24，P=0.01)。結論Stathmin和p53蛋白在三陰性乳腺癌組織中呈高表達，二者可能在三陰性乳腺癌發生發展及轉移中發揮協同作用。

三陰性乳腺癌；Stathmin蛋白；p53蛋白；免疫組化

我國乳腺癌近年發病率為24.86/10萬，呈上升趨勢及年輕化特點[1]。乳腺癌在形態學與臨床治療反應上具有異質性，可分為管腔型A、管腔型B、正常乳腺樣型、人表皮生長因子受體2(Her-2)過表達型和基底樣癌型。其中基底樣乳腺癌免疫組化法多以雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和Her-2均陰性表達為特征，因此被稱為三陰性乳腺癌[2]。三陰性乳腺癌組織分化程度較低，增殖速度快、浸潤性強，早期即可出現他處轉移，由于不宜行內分泌治療卻又缺乏有效的針對性靶向治療措施，故臨床預后差[3]。Stathmin在人類多種腫瘤中過表達，與腫瘤細胞高度惡性、增殖快、易侵襲遠處器官相關[5]。Stathmin在乳腺癌細胞系中的高表達已有報道，Stathmin低表達與微管穩定性和乳腺癌良好的預后相關[6]。p53是重要的抑癌基因，與乳腺癌的發生發展有關[4]。p53能否作為三陰性乳腺癌預后的獨立因素，目前國外文獻報道尚有爭議，而且聯合檢測Stathmin及p53蛋白在三陰性乳腺癌中的表達情況尚未見報道。2013年1月～2016年12月，我們應用免疫組化法檢測了三陰性乳腺癌組織中Stathmin及p53蛋白表達，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2013年1月～2016年12月于莆田學院附屬醫院手術切除并經病理診斷為三陰性乳腺癌標本106例份(觀察組)，患者均為女性，年齡26～73歲，中位年齡46歲，≤45歲者44例，gt;45歲者62例。患者術前均未經放療、化療、內分泌及其他任何針對腫瘤的治療。腫瘤直徑1.0～10.0 cm，其中lt;2 cm者31例，2～5 cm者52例，≥5 cm者23例；組織病理學類型：浸潤性導管癌79例，浸潤性小葉癌22例，黏液癌2例，神經內分泌癌1例，髓樣癌1例，大汗腺癌1例；組織學分級：Ⅰ級34例，Ⅱ級52例，Ⅲ級20例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期43例，Ⅲ+Ⅳ期63例；有腋窩淋巴結轉移65例，無腋窩淋巴結轉移41例。同時選取經手術切除并經病理診斷為非三陰性乳腺癌組織42例份作為對照組，均為女性，年齡17～69歲，中位年齡44歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 乳腺癌組織中Stathmin及p53蛋白表達檢測 取出兩組存檔的石蠟組織塊，切片、HE染色等常規處理后，采用EnVision免疫組化二步法對兩組樣本中的Stathmin、p53蛋白表達進行檢測，操作步驟按試劑盒說明書進行。Stathmin抗體和p53抗體稀釋度均為1∶200。用已知Stathmin、p53陽性組織切片和磷酸鹽緩沖液分別代替一抗做陰性對照。由兩位主治級別以上的病理醫生對切片染色結果采用雙盲法分別獨立觀察并打分。Stathmin蛋白定位于細胞質，以呈現出清晰的棕黃(褐)色顆粒沉積為陽性表達。p53定位于胞核內，以呈現出明顯的棕黃(褐)色顆粒沉積為陽性表達。結合染色強度及陽性細胞百分比綜合判斷。染色結果行半定量分析：在高倍(×400)鏡下隨機計數10個不重復視野陽性細胞，計數選定區域中染色陽性腫瘤細胞與總體腫瘤細胞的百分比，按染色陽性細胞百分率評分，lt;5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，≥50%為3分；按染色強度計分：細胞無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；將染色計數得分與染色強度得分相加，0分為陰性，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中等陽性(++)，4分以上為強陽性(+++)。+～+++均代表陽性表達，以上結果由病理科醫生盲法獨立完成。

1.3 統計學方法 采用SPSS22.0統計軟件。對計數資料采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，Stathmin、p53蛋白表達間的相關性采用Spearman等級相關分析。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組乳腺癌組織中Stathmin和p53蛋白表達比較 Stathmin和p53蛋白在兩組乳腺癌組織中均有不同程度表達，觀察組Stathmin蛋白表達呈+、++、+++各為3、35、50例,p53蛋白表達呈+、++、+++各為11、25、27例；對照組Stathmin蛋白表達呈+、++、+++各為3、10、2例,p53蛋白表達呈+、++、+++各為0、3、2例。觀察組及對照組癌組織中Stathmin蛋白表達陽性率分別為83.02%(88/106)、35.71%(15/42)，p53蛋白表達陽性率分別為59.43%(63/106)、11.90%(5/42)，兩組乳腺癌組織中Stathmin和p53蛋白表達比較，差異均有統計學意義(χ2分別為31.81、23.76，P均lt;0.05)。

2.2 Stathmin和p53蛋白表達與三陰性乳腺癌患者臨床病理特征的關系 見表1。Stathmin和p53蛋白表達在三陰性乳腺癌TNM分期及區域淋巴結轉移方面均存在統計學差異(P均lt;0.05)；在患者年齡、腫瘤大小及組織學分型方面均無統計學差異(P均gt;0.05)；不同的組織學分級中，Stathmin表達無統計學差異(χ2=2.97，P=0.23)，而p53表達卻存在統計學差異(χ2=9.49，P=0.00)。

表1 Stathmin和p53蛋白表達與三陰性乳腺癌患者臨床病理特征的關系

2.3 三陰性乳腺癌組織中Stathmin與p53蛋白表達的相關性分析 Stathmin蛋白表達陽性88例，其中p53蛋白表達陽性57例；Stathmin蛋白表達陰性18例，其中p53蛋白表達陽性6例；Stathmin與p53蛋白在106例三陰性乳腺癌組織中的表達呈正相關(r=0.24，P=0.01)。

3 討論

三陰性乳腺癌的發生發展受多種因素的調節，與原癌基因激活及抑癌基因失活密切相關。Stathmin是一種高度保守的細胞質蛋白，通過被蛋白激酶磷酸化影響微管形成及細胞有絲分裂過程，調節細胞周期，從而影響細胞的增殖、分化及功能[7]。阻斷Stathmin可使細胞分裂停止于G2/M期，抑制細胞增殖。研究發現，Stathmin在急性淋巴細胞白血病、人成骨肉瘤、喉磷狀細胞癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤細胞中存在高表達，Stathmin參與多種惡性腫瘤的發生發展過程[6～9]。p53基因位于人染色體17p13.3l，與細胞周期調控、細胞凋亡、DNA修復等相關。正常的p53蛋白能抑制腫瘤細胞增殖、誘導細胞凋亡，正常p53不易被檢測到，當p53發生突變后，失去了抑癌功能，并誘導正常細胞向癌細胞轉化，同時阻礙其他野生型p53發揮其功能，最終促進腫瘤的發生、演進及轉移[5]。p53與癌癥患者的不良預后密切相關[10]。

本研究發現，與非三陰性乳腺癌組織相比，三陰性乳腺癌組織中Stathmin及p53蛋白表達增加，差異有統計學意義，表明Stathmin及p53與乳腺癌發生發展有關。該結果與國外類似研究一致[11,12]。進一步分析顯示，在TNM分期不同的條件下，與無淋巴結轉移者相比，淋巴結轉移乳腺癌組織中Stathmin及p53蛋白表達水平更高，且呈遞升式演變，差異有統計學意義，此與國外類似研究基本一致[13]。說明Stathmin及p53可能與三陰性乳腺癌的發生、病情進展及轉移密切相關，二者有望成為三陰性乳腺癌發生發展、轉移過程中的重要標志物。Masciarelli等[14]體外研究發現，在腫瘤細胞株中，p53突變能通過結合啟動子，阻礙其轉錄功能下調miR-223的表達。相關性分析結果顯示，Stathmin與p53蛋白表達呈正相關，表明p53對Stathmin蛋白表達具有促進或失去“監控”作用，側面證實了正常的p53對Stathmin表達可能存在正性調控作用及二者之間的互相關系。此與Masciarelli等[14]的結果基本一致，提示Stathmin可能是體內正常p53作用的靶基因，二者聯合檢測可作為三陰性乳腺癌進展及轉移評估的重要指標。同時，若能通過抑制p53及Stathmin蛋白在腫瘤中的表達，可為三陰性乳腺癌的治療提供新的靶點。本研究結果還顯示，p53與組織學分級呈正相關，三陰性乳腺癌組織學分級越高、分化越差、預后越差，突顯了其在乳腺癌演進過程中扮演重要角色。p53高表達率提示三陰性乳腺癌預后不良，檢測三陰性乳腺癌中p53表達可作為指導臨床診治及判斷預后的重要參考指標。

綜上所述，Stathmin和p53蛋白在三陰性乳腺癌組織中呈過表達，二者可能在三陰性乳腺癌發生發展及轉移中發揮作用。但本研究為回顧性研究，不足之處在于選取的病理樣本為近年來診斷的三陰性乳腺癌病例，不僅病例樣本較少且未做進一步的病例隨訪及生存率分析。

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