過敏性紫癜患兒尿液脂氧素A4、NF-κB的變化及其臨床意義

應倩倩 沈夢嬌 李蘊言 吳菱 狄亞珍 王佳佩 傅詩薇

過敏性紫癜患兒尿液脂氧素A4、NF-κB的變化及其臨床意義

應倩倩 沈夢嬌 李蘊言 吳菱 狄亞珍 王佳佩 傅詩薇

目的探討脂氧素A4（LXA4）、NF-κB在過敏性紫癜（HSP）患兒尿液中的變化及在HSP發病機制中的作用。方法選取50例HSP患兒為病例組，其中紫癜性腎炎（HSPN）患兒20例；同期25例腹股溝疝術前患兒為對照組。留取晨尿，采用ELISA法檢測尿液LXA4、NF-κB水平，比較病例組急性期、恢復早期與對照組LXA4、NF-κB水平，并比較HSPN患兒與非HSPN患兒急性期LXA4、NF-κB水平，分析病例組急性期LXA4和NF-κB的相關性。同時收集各組臨床資料及病例組24h尿蛋白定量等實驗室檢查結果，分析HSPN患兒急性期LXA4、NF-κB水平與24h尿蛋白定量的相關性。結果 病例組急性期、恢復早期尿液LXA4水平均顯著高于對照組（均P＜0.01），且急性期顯著低于恢復早期（P＜0.01）；病例組急性期、恢復早期尿液NF-κB水平亦均顯著高于對照組（均P＜0.05），且急性期顯著高于恢復早期（P＜0.01）。HSPN患兒急性期尿液LXA4水平顯著低于非HSPN患兒，NF-κB水平顯著高于非HSPN患兒，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。病例組急性期尿液LXA4水平與NF-κB水平呈負相關（r=0.347，P＜0.05）。HSPN患兒急性期24h尿蛋白定量與LXA4水平呈負相關（r=0.562，P＜0.05），與NF-κB無相關性（r=0.370，P＞0.05）。 結論NF-κB可能參與HSP發病，并與病情嚴重程度相關，而LXA4可能為腎臟保護因子，且可能通過抑制NF-κB發揮抗炎作用。

過敏性紫癜 兒童 脂氧素A4NF-κB 24h尿蛋白

1 對象和方法

1.1 對象 選取2016年5至11月初次在寧波市婦女兒童醫院住院的HSP患兒50例為病例組，均符合2006年歐洲風濕病防治委員會、歐洲兒童腎臟病防治委員會及美國風濕協會共同制定的診斷標準[10]，男29例，女21例；年齡 2.5～15（7.0±3.0）歲。其中 20 例為 HPSN，男 9例，女 11 例，年齡 2.5～13（6.8±2.8）歲，均符合 2009 年中華醫學會兒科學分會腎臟病學組制定的《紫癜性腎炎診治循證指南(試行)》中的診斷標準[11]?；純壕鶠槭状伟l病，1周內未用過抗組胺藥物、腎上腺皮質激素及免疫抑制劑治療，既往無過敏性疾病史，也無自身免疫性疾病史。選取同期寧波市婦女兒童醫院外科住院的腹股溝疝術前患兒25例為正常對照組，男14例，女11例；年齡3～11（6.4±2.0）歲。病例組與對照組患兒性別和年齡比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。本研究獲得醫院倫理委員會批準和患兒監護人知情同意。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集 病例組分別于急性期、恢復早期，對照組于體檢當日留取晨尿8ml，以3 000r/min離心20min，分離上清液置-80℃冰箱凍存待檢。患兒起病2周內為急性期，以非血小板減少性紫癜、關節炎、關節腫痛、腹痛或胃腸道出血為主要臨床表現，治療后，上述癥狀消失3d為恢復早期[12-13]。

1.2.2 尿液LXA4、NF-κB測定 采用ELISA法檢測各樣本LXA4、NF-κB水平，所有操作均按照試劑盒說明書嚴格執行。比較病例組急性期、恢復早期與對照組LXA4、NF-κB水平，并比較HSPN患兒與非HSPN患兒急性期LXA4、NF-κB水平，分析病例組急性期LXA4和NF-κB的相關性。

1.2.3 收集及整理臨床資料 收集并整理病例組與對照組性別、年齡、現病史、既往史等臨床資料及病例組24h尿蛋白定量等實驗室檢查結果,分析HSPN患兒急性期LXA4、NF-κB水平與24h尿蛋白定量的相關性。

1.3 統計學處理 采用SPSS 18.0統計軟件。計量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數資料組間比較采用χ2檢驗；兩變量間相關性分析采用Pearson相關。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患兒尿液LXA4、NF-κB水平比較 病例組急性期、恢復早期尿液LXA4水平均顯著高于對照組（均P＜0.01），且急性期顯著低于恢復早期（P＜0.01）；病例組急性期、恢復早期尿液NF-κB水平亦均顯著高于對照組（均P＜0.05），且急性期顯著高于恢復早期（P＜0.01），見表 1。

表1 兩組患兒尿液LXA4、NF-κB水平比較

2.2 HSPN患兒與非HSPN患兒急性期尿液中LXA4、NF-κB水平比較 HSPN患兒急性期尿液LXA4水平顯著低于非HSPN患兒，NF-κB水平顯著高于非HSPN患兒，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表2。

2.3 尿液LXA4、NF-κB與24h尿蛋白定量的相關性分析 病例組急性期尿液LXA4水平與NF-κB水平呈負相關（r=0.347，P＜0.05）。HSPN患兒急性期24h尿蛋白量為 0.02～0.86（0.318±0.294）g/24h，LXA4水平為293.851～608.039（446.453±98.260）pg/ml，NF-κB 水平為 317.740～743.973（547.097±99.692）ng/L，HSPN 患兒急性期 24h尿蛋白定量與LXA4水平呈負相關（r=0.562，P＜0.05），與 NF-κB 無相關性（r=0.370，P＞0.05）。

表2 HSPN患兒與非HSPN患兒急性期尿液中LXA4、NF-κB 水平比較

3 討論

HSP是以小血管為主要病變的系統性血管炎，具有發病率高、病程長、反復發作的特點。然其發病機制不明，目前研究認為的發病模式是各種刺激因子，包括感染原和過敏原作用于具有遺傳背景的個體，激發輔助性T淋巴細胞及B淋巴細胞擴增并增強其活性，產生大量以免疫球蛋白A為主的免疫復合物，沉積在全身小血管壁而致血管炎性免疫反應。

LXs產生于機體發生炎癥、過敏和血管病變時，是一類重要的內源性抗炎介質。LXA4是家族中的一員，有明確抗炎、促進炎癥消退的作用，可通過不同方式調控多種炎癥信號通路發揮抗炎活性，其中包括NF-κB信號通路[14]。NF-κB為p50/p65形成的異源二聚體，當細胞未受到外界刺激時，NF-κB/p65與其抑制蛋白IκB結合，以未活化的狀態存在胞質中；而當受到刺激后，NF-κB/p65與IκB解離，隨即NF-κB/p65被激活而進入胞核，調控TNF-α、IL-8等細胞因子相應基因的轉錄并促進細胞因子釋放，導致炎癥級聯反應的發生，而這些因子增多又可以激活NF-κB，進一步加重細胞損傷。NF-κB信號通路與免疫密切相關，既參與機體防御病原體的入侵，又是炎癥反應的啟動閘門，其異常激活在多種自身免疫性疾病如炎癥性腸病、川崎病發病中起重要作用[15-16]。既往研究表明LXA4與腎臟疾病相關，在腎臟纖維化、腎臟缺陷-再灌注損傷及多種腎臟炎性疾病中均有腎保護作用[17]。動物實驗表明LXA4在急性腎損傷中起保護作用的部分機制是通過抑制NF-κB的激活，從而降低炎性因子表達及炎性細胞浸潤[18]。

郎艷美[19]報道HSP患兒急性期血清中LXA4水平增高，恢復期進一步增高，且HSPN患兒水平低于僅有皮膚紫癜的HSP患兒，提示LXA4有抗炎作用，并具有保護腎臟作用。Wu等[6]研究表明在HSP患兒急性期尿液中也能檢測到LXA4的升高。華冉等[20]研究發現HSP患兒急性期血清中NF-κB水平升高，恢復期下降，表明NF-κB參與HSP的發病。本研究發現HSP患兒急性期尿液中LXA4顯著高于對照組，經治療后，患兒恢復早期的尿液中LXA4水平進一步升高，與文獻報道一致[21]，推測LXA4可能通過合成增多來促進炎癥消退。HSP患兒急性期及恢復早期NF-κB水平均顯著高于對照組，恢復早期顯著低于急性期，提示NF-κB參與HSP發病，隨著病情好轉而下降。HSPN患兒尿液LXA4水平顯著低于非HSPN患兒，NF-κB水平顯著高于非HSPN患兒，且HSPN患兒24h尿蛋白定量與尿液LXA4水平呈負相關，而與NF-κB水平無相關性，提示LXA4、NF-κB水平能反映炎癥嚴重程度，且LXA4水平可反映腎損害程度，LXA4不足可能加重腎損害。LXA4有望成為HSP患兒腎損害的預測指標，且監測尿液較監測血液更便捷，因其無創，患者的痛苦較少。HSP患兒急性期LXA4水平與NF-κB水平呈負相關，猜測LXA4生成增多可能有利于NF-κB水平下降，進一步猜測LXA4可能通過拮抗NF-κB發揮抗炎作用，調控NF-κB信號通路可能成為HSP等血管炎癥病變的治療新靶點，在HSP患兒中LXA4是否通過抑制NF-κB信號通路來發揮抗炎作用還需要進一步研究。

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（本文由浙江省醫學會風濕病學分會推薦）

Urinary lipoxin A4and NF-κB levels in children with Henoch-Schnlein purpura and their clinical significance

YING Qianqian,SHEN Mengjiao,LI Yunyan,et al.
Medicine School,Ningbo University,Ningbo 315000,China

Objective To investigate the changes of lipoxin A4(LXA4)and nuclear factor-κB(NF-κB)levels in the urine of children with Henoch-Schnlein purpura(HSP),and their clinical significance. Methods Fifty children with HSP,including 20 with HSP nephritis(HSPN),and 25 age-matched children with inguinal hernia(control group)were enrolled in the study.The morning urine specimens were collected and ELISA was used to determine the levels of LXA4and NF-κB.LXA4and NF-κB levels were compared between case and control groups,and among different subgroups,and the correlation between LXA4and NF-κB was analyzed. Results The urinary LXA4levels in acute phase and early recovery phase ofHSP patients were significantly higher than those in controlgroup(both P＜0.01),and the urinary LXA4levels in acute phase patients were significantly lower than those in early recovery phase (P＜0.01).The urinary NF-κB levels in acute phase and early recovery phase of HSP patients were also significantly higher than those in control group(both P＜0.05),while the urinary levels of NF-κB in acute phase was significantly higher than those in early recovery phase(P＜0.01).The urinary levels of LXA4in acute phase of HSP patients without kidney damage were significantly higher than those in HSPN,and the urinary levels of NF-κB were significantly lower(P＜0.05).There was a significantly negative correlation between the urinary levels of LXA4and NF-κB(r=0.347,P＜0.05)in acute phase HSP patients.Meanwhile,there was a significantly negative correlation between LXA4 and 24-h urinary protein(r=0.562,P＜0.05),while there was no correlation between NF-κB and 24-h urinary protein(r=0.370,P＞0.05)in acute phase of HSPN. Conclusion NF-κB may be involved in the pathogenesis of HSP,and associated with disease severity.LXA4 may protect kidney against inflammation by inhibiting NF-κB.

Henoch-Schnlein purpura Children Lipoxin A4Nuclear factor-κB 24-hour urinary protein

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.21.2017-1597

浙江省醫藥衛生平臺研究計劃（2015ZDA027）；寧波市醫學科技項目（2015C50014）；寧波市自然基金項目（2014A610280）

315000 寧波大學醫學院（應倩倩、沈夢嬌、傅詩薇）；寧波市婦女兒童醫院小兒風濕免疫科（李蘊言、吳菱、狄亞珍、王佳佩）

狄亞珍，E-mail：dyz028sci@163.com

2017-07-07）

陳麗）