復制家兔DIC實驗

張小寧　程繼軍

摘 要 通過查找文獻綜合總結家兔DIC實驗的實驗方法，確定實驗方案，進行復制家兔DIC的病理生理實驗模型，經過幾次實驗失敗，主要難點就在于給藥的速度，如何能保證家兔在實驗中存活，通過多次實驗改進，總結失敗原因，最終確定兔腦粉濃度為2%，注射時間從15min延長至45min，最終實驗結果經過檢測出現DIC的結果。

關鍵詞 彌散性凝血 DIC 兔腦粉

中圖分類號：R364.1 文獻標識碼：A

1手術操作

（1）取2只家兔并稱重，分成甲兔和乙兔。

（2）甲兔和乙兔均從耳緣靜脈注入3%戊巴比妥鈉1ml/kg麻醉，仰臥固定在家兔手術臺上。剪去頸部被毛，沿頸正中做切口，分離皮膚與肌肉。

（3）甲兔從耳緣靜脈注射4%兔腦粉生理鹽水溶液2ml/kg，15min內注完。重復上述放血步驟，分離血漿備用。

（4）30min后，重復上述放血步驟，分離血漿備用。乙兔從耳緣靜脈注射生理鹽水2ml/kg，分別在相應時間點按上述方法取血，分離血漿備用。

（5）DIC指標的檢測。

①凝血酶原時間的測定：取血漿0.1ml，放入裝有4%兔腦粉0.1ml的小試管內，置于37℃水浴。隨后加入0.025mol/L的氯化鈣0.1ml，用秒表計時，輕輕地搖動。直至溶液停止流動或出現不溶顆粒，記錄時間為凝血酶原時間。重復3次，取平均值。

②凝血酶時間的測定：取被檢血漿0.2ml放入小試管中，置于37℃水浴。加入適當濃度的凝血酶懸液0.2ml，開動秒表，輕輕地搖動。直至溶液停止流動或出現不溶顆粒，記錄時間為凝血酶時間。重復3次，取平均值。

③3P實驗：取被檢血漿0.2ml，放入小試管中，加入1%硫酸魚精蛋白溶液0.1ml。輕輕搖勻，室溫下放置30min。隨后將試管輕輕搖動，有白色纖維或凝塊出現的為陽性。渾濁均勻，無白色纖維的為陰性。

④血小板計數：取血小板稀釋液0.38ml，放入小試管中。用血紅蛋白吸管吸取血液20 l，立即加入試管中，充分混勻。用滴管取一小滴滴入計數室內，靜置15min。用高倍鏡計數，數5個中方格中血小板數目，乘以1000，即為每立方毫米血小板數。

經過多方討論，考慮到兔腦粉中含有的組織因子，能夠快速凝血，通常生理實驗中，2-3ml血液中滴加一滴兔腦粉浸液2s就能凝固，因此，將4%的兔腦粉浸液改為2%，確定具體的實驗方法為：

2手術操作

（1）取2只家兔并稱重，分成甲兔和乙兔。

（2）甲兔和乙兔均從耳緣靜脈注入20%烏拉坦5ml/kg麻醉，仰臥固定在家兔手術臺上。剪去頸部被毛，沿頸正中做切口，分離皮膚與肌肉。暴露一側頸總動脈，穿線，做頸總動脈插管。從頸總動脈的三通管處放血5 ml，迅速加入含0.45ml 3.8%枸櫞酸鈉溶液抗凝的試管中。2000rpm€？min離心，取上層血漿備用。

（3）甲兔從耳緣靜脈注射2%兔腦粉生理鹽水溶液2ml/kg稀釋至30ml，15min內注完。重復上述放血步驟，分離血漿備用。

（4）30min后，重復上述放血步驟，分離血漿備用。乙兔從耳緣靜脈注射生理鹽水2ml/kg，分別在相應時間點按上述方法取血，分離血漿備用。

（5）DIC指標的檢測。

本實驗中的難點就在于給藥部分，所以在手術中注射兔腦粉浸液時，速度的控制和給藥量的控制都是十分關鍵的，如果控制不好，家兔就會在手術中死亡導致實驗失敗。

第一次實驗，按照正常的手術順序進行手術，手術完成后，抽取對應體重的兔腦粉浸液，從耳緣靜脈進行注射，緩慢推注，注射1ml之后，家兔出現劇烈反應，20s之后死亡。

綜合第一次實驗結果，直接從耳緣靜脈注射，藥物濃度過高，都是導致家兔死亡的原因。因此，要改變給藥濃度，將對應體重的兔腦粉浸液用生理鹽水稀釋至30ml ，耳緣靜脈注射。

第二次實驗，按照正常的手術順序進行手術，手術完成后，將稀釋后的兔腦粉加入簡易的輸液器中，控制滴速，十分鐘之后提高滴速，提速后30s后，家兔劇烈掙扎至死亡。綜合第二次預試結果，滴速過快導致同時一時間血管中藥物濃度過高，發生凝血反應，致使家兔死亡。通過前兩次的實驗，發現15min之內注射完高濃度藥物不可行，極其容易發生凝血致使家兔死亡。因此決定延長注射時間，稀釋藥物濃度。

第三次實驗，手術完成后，從耳緣靜脈進行生理鹽水輸液，將對應體重的2%兔腦粉浸液從輸液器的滴壺處在45min內逐漸加入，分別取家兔給藥前，給藥15min，給藥30min，給藥45min，給藥60min時的家兔血液，進行離心，取上層血清，檢測方法是用凝血酶時間和3P實驗進行檢測，發現家兔從45min開始出現彌散性凝血的表現。

3結論

綜合三次實驗，本實驗難點就是如何保證家兔在給藥期間的存活情況。兔腦粉的快速凝血作用是我們之前就考慮到的，但是，家兔的死亡速度是我們始料不及的，因此我們首先從藥物濃度開始調節，通過查詢文獻將2%的兔腦粉浸液使用生理鹽水稀釋至30ml，在15min注射完畢。通過輸液器滴速20滴/ml的計算，要保證在15min將30ml的藥物耳緣靜脈給藥，就要在前5min控制速度在1ml/min，中間5min控制速度在2ml/min，最后5min控制速度在3ml/min，開始實驗后，在最后的5min提速時，家兔突然死亡，分析原因同一時間大量兔腦粉浸液進入家兔體內沒有及時擴散，致使發生瞬間凝血反應，這是導致家兔死亡的原因。那么就要從延長給藥時間和稀釋給藥濃度這兩方面來改變實驗方法，通過實驗得到了驗證。endprint