銅離子代謝結構域包含體1對膠質瘤細胞增殖與凋亡的作用與機制研究

阮東+郭麗蕊+王芳+袁凡恩+陳謙學+劉寶輝

[摘要] 目的 探討銅離子代謝結構域包含體1（COMMD1）在膠質瘤細胞U87中的作用及機制。 方法 使用siRNA敲低U87細胞內COMMD1的表達量，使用CCK8檢測細胞增殖能力，流式細胞術檢測細胞凋亡率，免疫印跡技術檢測p65、cleaveage-caspase3及BAD蛋白表達量。 結果 CCK-8結果顯示，0、1、2、3 d時siNC組U87細胞活力為（0.401±0.001）、（0.452±0.002）、（0.621±0.002）、（0.823±0.003），siCOMMD1組為（0.402±0.000）、（0.510±0.001）、（1.021±0.002）、（1.612±0.002），兩組相比，在2、3 d時細胞活力差異有統計學意義（P < 0.05）。流式細胞術結果顯示，兩組細胞凋亡率為（7.121±0.520）%和（2.214±0.325）%，siNC組高于siCOMMD1組，差異有統計學意義（P < 0.05）。Western blot結果顯示，下調COMMD1后，p65蛋白表達增加40.132%，BAD表達量增加90.157%，cleaveage-caspase3表達減少56.169%。 結論 COMMD1可以調節膠質瘤細胞U87的凋亡與增殖。

[關鍵詞] 銅離子代謝結構域包含體1；增殖；凋亡

[中圖分類號] R739.4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）10（b）-0004-04

The effect of copper metabolism domain containing 1 in U87 cells proliferation and apoptosis and mechanism study

RUAN Dong1 GUO Lirui2 WANG Fang2 YUAN Fan′en2 CHEN Qianxue2▲ LIU Baohui2▲

1.Department of Neurological Surgery， the First Affiliated Hospital of Hubei University of Science and Technology Xianning Central Hospital， Hubei Province， Xianning 437100， China； 2.Department of Neurological Surgery， Renmin Hospital of Wuhan University， Hubei Province， Wuhan 430060， China

[Abstract] Objective To study the biological function of copper metabolism domain containing 1（COMMD1） in glioma cells U87 and its mechanism. Methods siRNA transfection was applied to knock down COMMD1 expression in U87 cells. CCK-8 and flow cytometry analysis were employed to examine glioma cells proliferation and apoptosis after COMMD1 was knocked down. Western blot was used to detect the expression of p65， cleaveage-caspase3 and BAD levels. Results Data showed that when COMMD1 was knocked down by siCOMMD1， the CCK8 results of siCOMMD1 were （0.402±0.000）， （0.510±0.001）， （1.021±0.002）， （1.612±0.002）， while the CCK8 results of siNC were （0.401±0.001）， （0.452±0.002）， （0.621±0.002）， （0.823±0.003） at 0， 1， 2， 3 d； there were significantly differences in cell viabilities between the two group at 2 d and 3 d （P < 0.05）. Flow cytometry analysis results showed that the apoptosis rate of cells in siCOMMD1 group and siNC group was （2.214±0.325）% and （7.121±0.520）%， there was significantly difference between the two group （P < 0.05）. Western blot results showed that the expression of p65 and BAD increased 40.132% and 90.157%， cleaveage-caspase3 decreased 56.169% when COMMD1 was knocked down. Conclusion COMMD1 can regulate U87 cells apoptosis and proliferation.

[Key words] Copper metabolism domain containing 1； Proliferation； Apoptosisendprint

膠質瘤是成人中樞神經系統最常見最致命的原發性惡性腫瘤，具有高發病率、高死亡率和預后差的特點[1- 2]，尤其是膠質母細胞瘤，其中位生存時間不足1年，主要是因為膠質瘤具有異常增殖、侵襲和抗凋亡的特點[3-5]，而機制尚不清楚。目前認為，膠質瘤治療效果的提高依賴于對其分子機制的進一步研究[6-7]。本研究通過siRNA轉染人腦膠質瘤細胞U87來敲低COMMD1的表達，研究膠質瘤異常增殖與凋亡的機制，對于探討膠質瘤發生機制，進而提高膠質瘤治療效果有重要意義。

1 資料與方法

1.1 細胞培養及siRNA轉染

人膠質母細胞瘤細胞系U87購自中國科學院上海細胞庫。本實驗所使用的靶向COMMD1 siRNA及對照（si Negative control，siNC）均購自上海吉瑪基因。詳細細胞培養及轉染方法參考文獻[8-9]。

1.2 熒光定量PCR及免疫印跡實驗

anti-COMMD1、anti-p65、anti-cleaveage-caspase3、anti-BAD及anti-GAPDH均購自Santa Cruze。具體實驗方法參考文獻[10]。熒光定量PCR結果使用公式2-ΔΔCt進行計算。

1.3 Cell Counting Kit-8（CCK8）及流式細胞術

具體實驗方法參考文獻[11]。CCK8結果計算方法為測試組CCK8值-空白組CCK8值，空白組為無腫瘤細胞，只加入培養基。

1.4 統計學方法