UPLC-MS/MS 同時測定5種南藥中藥材中10種農藥殘留

鄭培，王儒，周敏

(海南省食品藥品檢驗所海口分所，海南 海口 570311)

UPLC-MS/MS 同時測定5種南藥中藥材中10種農藥殘留

鄭培，王儒，周敏

(海南省食品藥品檢驗所海口分所，海南 海口 570311)

目的建立同時測定廣藿香、益智、巴戟天、肉豆蔻、丁香等5種南藥中常見的10種農藥殘留的方法。方法采用安捷倫1290-6460超高效液相色譜質譜聯用儀(UPLC-MS/MS)。色譜柱：安捷倫ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×150 mm，1.8 μm)，柱溫40℃，梯度洗脫，流速0.4 mL/min；采用電噴霧離子源(AJS ESI)，多反應離子監測(MRM)掃描方式。結果10種農藥檢測質量濃度線性范圍為0.5～100 μg/kg(r＞0.998 6)，各被測物質的方法定量限(LOQ)為0.005～0.1 μg/kg，加樣回收率范圍為72.8%～108.8%。結論所建立的方法簡單、快速、準確度及靈敏度高、專屬性好，可用于5種南藥中藥材中常見的10種農藥殘留的測定。

超高效液相色譜-串聯質譜；農藥殘留；廣藿香；益智；巴戟天；肉豆蔻；丁香

廣藿香、益智、巴戟天、肉豆蔻、丁香是主產于海南的5種重要中藥材，但是由于在種植、生產過程中缺乏嚴密的質量控制標準和科學的檢測手段，農殘的污染已成為制約其走向國際草藥市場的主要障礙[1-3]。目前超液相色譜-串聯質譜(LC-MC/MS)聯用技術已成為農藥殘留檢測的主要檢測技術，在食品、環境等領域的農藥殘留分析中已得到廣泛應用，然而對中藥材尤其是南藥中農藥殘留的分析報道卻相對較少。本研究采用UPLC-MS/MS色譜質譜聯用技術，對5種南藥中常見的10種農藥殘留進行了檢測，旨在建立一種快速、有效的檢測方法，以便對其種植、生產和流通中的質量進行控制，促進產業發展，保障公眾用藥安全[4-7]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器設備 安捷倫1290-6460超高效液相色譜質譜聯用儀(UPLC-MS/MS)，安捷倫MassHunter工作站。PL-1001L型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，3-18K型高速離心機(德國西格瑪公司，最高轉速18 000 r/min，離心半徑8.30 cm)，KQ-600TDE型超聲波清洗機(超聲頻率80 KHz，超聲功率700 W)，IKA T25 型均質器(速度范圍[1/min]：6 500-24 000)，R-300型旋轉蒸發儀(瑞士BUCHI公司)，MV5型全自動平行氮吹濃縮儀(美國LabTech公司)。

1.1.2 標準品、試劑與材料 (1)標準品：治螟磷(批號 201612)、樂果(批號 201612)、馬拉硫磷(批號201612)、三唑磷(批號201612)、啶蟲脒(批號201612)，均購自農業部環境保護科研檢測所。三唑酮(批號201612)、辛硫磷(批號201612)、吡蟲啉(批號201612)均購自農業部環境質量監督檢驗測試中心。滅多威(批號160551)、克百威(批號160929)購自北京壇墨質檢科技有限公司。(2)試劑：甲醇、乙腈、甲苯、環己烷、異辛烷、(均為色譜純，購自德國Merck公司)、氯化鈉(分析純)、無水硫酸鈉(650℃灼燒4 h，貯于干燥器中，冷卻后備用)，超純水。(3)材料：Cleanert TPH固相萃取柱：10 mL 2.0 g。

1.1.3 樣品 廣藿香、益智、巴戟天、肉豆蔻、丁香樣品均購自海南壽南山參業有限公司。

1.2 方法

1.2.1 液相色譜條件 色譜柱：安捷倫ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×150 mm，1.8 μm)；進樣量：4 μL；柱溫：柱溫40℃；流速：0.4 mL/min；流動相：A：0.1%甲酸+5 mM甲酸銨水溶液；B：0.1%甲酸+5 mM甲酸銨水甲醇溶液，梯度洗脫程序(見表1)。

表1 梯度洗脫程序

1.2.2 質譜條件 安捷倫1290-6460超高效液相色譜-質譜聯用儀(UPLC-MS/MS)，電噴霧離子化方式(AJS ESI)，多反應監測離子掃描模式(動態MRM)，Agilent Mass Hunter軟件用于定性和定量分析。干燥氣和霧化器均為氮氣，干燥氣溫度300℃，干燥氣流量9 L/min，霧化器壓力35 psi，鞘流氣溫度350℃，鞘流氣流量12 L/min，毛細管電壓4 000 V(+)，3 500 V(-)，噴嘴電壓 0 V。MRM 參數見表 2，TIC及MRM色譜圖見圖1和圖2。

表2 10種被測物質的MRM質譜分析參數

圖1 MRM色譜圖

圖2 TIC色譜圖

1.2.3 溶液的制備

1.2.3.1 混合標準品溶液的制備 取治螟磷、樂果、馬拉硫磷、三唑酮、三唑磷、滅多威、克百威、啶蟲脒、辛硫磷、吡蟲啉標準品適量，用甲醇配成濃度均為1.0 μg/mL的混合對照品溶液，-20℃保存，備用。

1.2.3.2 供試品溶液的制備 (1)提取：分別稱取廣藿香、益智、巴戟天、肉豆蔻、丁香試樣2g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，15 000 r/min勻漿提取1 min，加入2 g氯化鈉，再勻漿提取1 min，1 0 000 r/min離心5 min，取全部上清液于150 mL雞心瓶中，在離心管中再加入15 mL乙腈，重復勻漿提取1 min，10 000 r/min離心5 min，取全部上清液與之前的提取液合并，于40℃水浴旋轉蒸發至2 mL。(2)凈化：將溶液轉移至Cleanert TPH固相萃取柱(柱上加入約2 cm高無水硫酸鈉，先用10 mL乙腈-甲苯(3+1)溶液預洗柱)，容器用2 mL乙腈-甲苯溶液(3+1)洗滌2次，合并洗液置于Cleanert TPH固相萃取柱上，用25 mL乙腈-甲苯溶液(3+1)洗脫并用雞心瓶接收洗脫液，洗脫液于40℃水浴中旋轉濃縮至2 mL，將濃縮液置于全自動平行氮吹濃縮儀上吹干，加入1 mL的乙腈-水溶液，混勻，0.2μm濾膜過濾。

2 結 果

2.1 線性關系與定量限 精密量取1.2.3項下的混合標準品溶液適量，逐倍稀釋，依次得到0.5 ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL等6個系列濃度的混合對照溶液，按2.1項下的條件測定，得到各被測物質的線性范圍及回歸方程相關系數，同時將0.5 ng/mL的混合標準品溶液不斷稀釋后測定，以信噪比為10確定各被測物質的定量限(LOQ)，見表3。結果表明，10種被測物質的線性范圍為0.5～100 ng/mL，相關系數r值為0.998 6～0.999 9，定量限為 0.005～0.1 μg/mL，各成分在線性范圍內均具有良好的線性關系，線性范圍和定量限滿足檢測的要求。

表3 10個化合物的線性回歸方程、線性范圍及定量限(LOQ)

2.2 穩定性試驗 取濃度為10 ng/mL的混合標準溶液，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h進樣，測得治螟磷、樂果、馬拉硫磷、三唑酮、三唑磷、滅多威、克百威、啶蟲脒、辛硫磷、吡蟲啉面積的相對標準偏差(RSD值)分別為1.3%、1.9%、1.6%、1.1%、1.4%、0.8%、1.2%、0.9%、1.5%、2.0%。結果表明，供試品溶液在24 h內穩定。

2.3 準確度與精密度試驗 取5種中藥材各6份，分別精密加入低、高兩個質量濃度的混合標準品(4.0 μg/kg、40.0 μg/kg)，按 1.2.3.2 項下方法制備供試品溶液，測定。計算各成分的加標回收率和相對標準偏差，見表4。結果表明：10種被測物質的平均回收率為72.8%～108.8%，相對標準偏差為0.6%～4.8%，符合試驗要求。

表4 回收率考察結果(n=6)

3 討 論

近年來，由于缺乏嚴密的質量控制標準和科學檢測手段，在中藥材種植過程中超范圍超劑量使用農藥的現象呈上升的趨勢，隨著更加嚴格的國際農殘標準出臺，我國出口的中藥產品農殘超標的事件時有發生，甚至被檢測出了克百威、三唑磷等劇毒、高毒的農藥，不僅造成了巨大的經濟損失，還嚴重影響了我國中藥產品的聲譽，中藥材中農藥殘留的問題已經引起了國內外的普遍關注[8-10]。

本實驗建立了超高效液相色譜-質譜聯用(UPLC-MS/MS)方法，可在短時間內同時檢測5種南藥中藥材中的10種農藥殘留量。研究結果表明，該方法簡便，靈敏度夠高，分析速度快，精密度、穩定性好，適用于中藥材中的多種農藥殘留檢測，為南藥的種植和生產提供了質量控制的技術方法和科學研究的依據，也為其農藥殘留標準的制定提供了參考。

[1]符乃光,張俊清,賴偉勇,等.海南廣藿香等四種南藥的有機氯農藥殘留含量現狀研究[J].時珍國醫國藥,2005,16(8):730-731.

[2]張俊清,符乃光,賴偉勇,等.海南檳榔等4種南藥農殘含量現狀研究[J].中國藥學雜志,2005,40(6):460-462.

[3]樓步青,徐鴻華.南藥規范化種植調研及發展策略[J].時珍國醫國藥,2011,22(8):1999-2000.

[4]蘇靖,戴榮繼.液質聯用技術在中藥研究中的應用[J].生命科學儀器,2014,12(1):38-42.

[5]羅芬.液-質聯用技術在中藥分析中的應用[J].亞太傳統醫藥,2014,10(11):52-54.

[6]郭興杰,安芳,林麗娜.液質聯用技術與中藥現代化[J].世界科學技術-中醫藥現代化,2009,11(1):142-146.

[7]中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會,國家食品藥品監督管理總局.GB 23200.11-2016桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉中413種農藥及相關化學品殘留量的測定液相色譜-質譜法[S].北京:中國標準出版社,2016.

[8]綠色和平組織.藥中藥——中藥材農藥污染調查報告[R/OL].[2015-08-18].

[9]康傳志,郭蘭萍,周濤,等.中藥材農殘研究現狀的探討[J].中國中藥雜志,2016,41(2):155-159.

[10]錢韻旭.國外新農殘標準對中藥出口的影響及對策研究[D].沈陽:沈陽藥科大學,2014.

Simultaneous determination of ten pesticide residues in five Chinese medicinal materials by UPLC-MS/MS.

ZHENG Pei,WANG Ru,ZHOU Min.Haikou Branch of Hainan Provincial Institute for Drug and Food Control,Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo establish a method for simultaneous determination of 10 pesticide residues in five Chinese medicinal materials(Pogostemon cablin,Alpinia oxyphylla,Morinda officinalis,Myristica fragrans,Syzygium aromaticum).MethodsThe Agilent 1 290-6 460 ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry analysis of enzymatic assays(UPLC-MS/MS),Agilent Jet Stream electrospray ionization(AJS ESI),multiple reaction monitoring(MRM),Agilent MassHunter software were used to peform qualitative and quantitative analysis.ResultsThe linear ranges of 10 pesticide residues was 0.5-100 μg/kg(r＞0.9986),and the limit of quantity(LOQ)was 0.005-0.1 μg/kg,while the recovery rate was 72.8%-108.8%.ConclusionUPLC-MS/MS method is simple,sensitive,and accurate,which can be used for the determination of 10 pesticide residues in Pogostemon cablin,Alpinia oxyphylla,Morinda officinalis,Myristica fragrans,Syzygium aromaticum.

Ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry analysis of enzymatic assays(UPLC-MS/MS);Pesticide residues;Pogostemon cablin;Alpinia oxyphylla;Morinda officinalis;Myristica fragrans;Syzygium aromaticum

R28

A

1003—6350（2017）20—3352—05

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.20.028

鄭培。E-mail：12123089@qq.com

2017-07-18)