變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關基因ropA的克隆及蛋白表達

超 博， 張 紅， 李文月， 邵思奇， 張志民

(吉林大學口腔醫(yī)學院 牙體牙髓病科，吉林 長春 130041)

變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關基因ropA的克隆及蛋白表達

超 博， 張 紅， 李文月， 邵思奇， 張志民*

(吉林大學口腔醫(yī)學院 牙體牙髓病科，吉林 長春 130041)

克隆并表達變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關基因ropA。以變形鏈球菌UA159的耐氟菌株全基因組為模版，PCR擴增ropA基因并與pMD-18T克隆載體連接構建重組克隆質粒，測序鑒定。BamHⅠ、Hind Ⅲ雙酶切重組克隆質粒,回收目的基因片段并與pProEX HTa表達載體通過粘性末端連接構建重組表達質粒，轉化入大腸埃希菌感受態(tài)細胞DH5α，IPTG誘導，SDS-PAGE檢測RopA表達量。測序結果為變形鏈球菌UA159的耐氟菌株ropA基因堿基序列與親代菌株UA159完全一致。SDS-PAGE結果顯示IPTG成功誘導RopA蛋白表達，并且隨誘導時間的延長蛋白表達增多。變形鏈球菌UA159耐氟菌株的耐酸相關基因ropA未發(fā)生突變，說明變形鏈球菌耐氟菌株耐酸性增強不是由ropA堿基序列的改變導致。本研究成功誘導RopA蛋白表達，為后續(xù)研究RopA蛋白功能奠定了基礎。

變形鏈球菌；耐氟菌株；耐酸相關基因ropA；克隆；蛋白表達

氟化物是目前應用最廣泛的防齲制劑[1]。臨床常用的防齲制劑氟化物可以進入正在形成的礦化的磷灰石中形成氟磷灰石使磷灰石的晶體穩(wěn)定性得到增強，還能抑制細菌的質子移位ATP酶及磷酸轉移酶系統(tǒng)，降低細菌的產(chǎn)酸能力，預防齲病的發(fā)生[2]。但是長期局部高濃度氟化物的使用可能導致口腔中耐氟菌株的選擇性生長[3]。耐氟菌株不僅能降低局部用氟產(chǎn)生的抑齲效果,而且較親代菌株更不易被氟化物所抑制。……