單增李斯特菌vip基因缺失菌株的構建與篩選

李 森， 牟俊潔， 劉武康

(上海理工大學 醫療器械與食品學院，上海 200093)

單增李斯特菌vip基因缺失菌株的構建與篩選

李 森， 牟俊潔， 劉武康

(上海理工大學 醫療器械與食品學院，上海 200093)

單增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)是廣泛存在于自然界及食物中的食源性致病菌，作為胞內寄生菌，它可以引起強烈的細胞免疫，是潛在的優良疫苗載體。vip是單增李斯特菌的毒力基因，與其侵襲能力密切相關。因此構建vip基因敲除株可為單增李斯特菌疫苗載體的研發打下重要基礎。從單增李斯特菌EGDe基因組中擴增出vip基因上、下游序列，連接到穿梭載體pKSV7中得到敲除載體pKSV7-Δvip，將其以電穿孔的方式轉入單增李斯特菌后，通過同源重組利用氯霉素和溫度雙重壓力篩選得到vip基因的敲除突變株，并對敲除菌株的生長曲線進行分析發現vip敲除對細菌的生長沒有顯著影響，為進一步研究vip基因功能、單增李斯特的致病機制和疫苗載體的研發提供參考。

單增李斯特菌；vip基因敲除；突變株；同源重組

LI Sen, MU Jun-jie, LIU Wu-kang

(Schl.ofMed.Instrum. &FoodEngin.,ShanghaiUni.ofSci. &Techonol.,Shanghai200093)

單核細胞增多性李斯特菌簡稱單增李斯特菌(Listeriamonocytogenes，LM),廣泛存在于自然界中，是一種人畜共患病的病原菌[1]，主要通過污染的食物引起人、畜的李斯特菌病，易感染者為新生兒、孕婦、40歲以上的成人和免疫功能缺陷者，死亡率高達30%以上[2]。單增李斯特菌對食品的污染與危害，已引起世界各國的普遍關注和高度重視，被世界衛生組織列為四大食源性致病菌之一[3]。單增李斯特菌主要隨污染食物進入腸道，侵襲腸道上皮細胞穿透腸道屏障后進入血液循環引起其他器官的感染。……