采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定三黃珍珠膏中總砷和可溶性砷的含量

倪 琳，張 平，田向斌，魏學(xué)冰

（甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070）

采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定三黃珍珠膏中總砷和可溶性砷的含量

倪 琳，張 平，田向斌，魏學(xué)冰

（甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070）

目的 探索三黃珍珠膏中總砷和可溶性砷含量的測(cè)定方法。方法 采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）對(duì)三黃珍珠膏中總砷和可溶性砷進(jìn)行定量分析。結(jié)果 測(cè)得總砷及可溶性砷的回收率分別為90.07%、90.56%，檢出限為0.025 2 ng/ml。結(jié)論 該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，可用于三黃珍珠膏中總砷和可溶性砷的定量分析評(píng)價(jià)，為三黃珍珠膏用藥安全提供重要的理論依據(jù)。

總砷；可溶性砷；電感耦合等離子體質(zhì)譜法；三黃珍珠膏

三黃珍珠膏由硫磺、雄黃、藤黃（制）、珍珠、人工麝香組成，具有解毒消腫，去腐生肌，止痛的功效，用于中小面積Ⅱ度燒傷、燙傷、殘留瘡面等癥。方中主藥是硫磺、雄黃，而雄黃的主要成分是二硫化二砷（As2S2）以及少量的三氧化二砷（As2O3）與微量元素，As2S2在加工或者貯藏過(guò)程中很容易氧化生成As2O3[1]，雖然As2O3微溶于水，但其可溶于酸，故在胃酸中溶解，被吸收，從而產(chǎn)生毒性[2]。三黃珍珠膏是由水飛法制得極細(xì)的雄黃粉與硫磺倒入桐油中，加熱至（270±2）℃，之后冷卻至室溫，制成的外用軟膏劑。為了確切了解三黃珍珠膏中總砷，特別是可溶性砷的含量，本文采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）對(duì)其進(jìn)行定量分析，為三黃珍珠膏用藥安全提供重要的理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

（1）電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（ICP-MS，7700e，Agilent公司），微波消解儀（Milestone ETHOS A）。

（2）試藥。砷單元素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，編號(hào) GBW08611 11115，標(biāo)準(zhǔn)值：1 000 μg/ml）；三黃珍珠膏（河南羚銳生物藥業(yè)有限公司，批號(hào)：150301、150302、150303）；標(biāo)準(zhǔn)調(diào)諧液[含鈰（Ce）、鈷（Co）、鋰（Li）、鎂（Mg）、鈦（Ti）、釔（Y），質(zhì)量濃度均為 1 μg/L，編號(hào) 5190-0465，美國(guó) Agilent公司]；硝酸（德國(guó)默克公司）優(yōu)級(jí)純，過(guò)氧化氫為優(yōu)級(jí)純；氬氣（99.999%）；氦氣（99.999%）；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密量取砷元素標(biāo)準(zhǔn)溶液1 ml（1 000 μg/ml），加2%硝酸定容至 100 ml（10 μg/ml），精密量取 0、0.01、0.02、0.10、0.25、0.50 ml（10 μg/ml），分別加2%硝酸定容至100 ml（濃度分別為0、1、2、10、25、50 ng/ml）。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 用于測(cè)定總砷含量的供試品溶液的制備 取本品約0.5 g，精密稱定，置耐壓耐高溫微波消解罐中，加硝酸5 ml、過(guò)氧化氫3 ml，密閉并按微波消解儀的相應(yīng)要求及一定消解程序進(jìn)行消解（0～11 min升溫至 180℃，180℃維持 10 min，再用 20 min升溫至200℃），消解完成后，趕酸約3 ml，冷卻至60℃以下，將消解液轉(zhuǎn)入25 ml容量瓶中，用少量水洗滌消解罐3次，洗液合并于量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得[3～5]。同法同時(shí)制備試劑空白溶液及雄黃藥材溶液。

2.2.2 用于測(cè)定AS2O3中可溶性砷含量的供試品溶液的制備取本品5 g，精密稱定，分別加入稀鹽酸20、20、10 ml，依次超聲處理（250 W、50 KHz）30、30、10 min，濾過(guò)，加水 40 ml，超聲處理兩次，每次30 min，濾過(guò)，合并濾液，置100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。精密吸取0.2 ml上述溶液置5 ml比色管中，加濃鹽酸 0.25 ml、硫脲 1.0 ml，用水稀釋至刻度，搖勻[6，7]，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液及雄黃藥材溶液。

2.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

精密量取鍺、銦、鉍單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用水稀釋制成每1 ml各含1 μg以上元素的混合溶液，即得。

2.4 測(cè)定條件

采用氦氣碰撞反應(yīng)池模式，用 1 μg/L Li、Co、Y、Ce、Ti、Mg的調(diào)諧液對(duì)儀器條件進(jìn)行優(yōu)化，調(diào)諧質(zhì)量軸、分辨率、靈敏度、雙電荷、氧化物。儀器參數(shù)設(shè)置：以氬氣為載氣，氦氣為碰撞氣體；等離子體流量為15.0 L/min；采樣深度 8.00 mm；載氣體積流量為1.0 L/min；霧化器為Barbinton，石英雙通道霧化室；等離子體射頻功率1.55 KW；碰撞模式為氦氣流量4.5 ml/min；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)數(shù)為30 r/min，分析模式為全定量。

2.5 測(cè)定方法

測(cè)定采用74Ge作為內(nèi)標(biāo)。儀器的內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣管在儀器分析工作過(guò)程中始終插入內(nèi)標(biāo)溶液中，依次將儀器的樣品管插入各個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液中進(jìn)行測(cè)定（濃度依次遞增），以測(cè)量值（3次讀數(shù)的平均值）為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將儀器的樣品管插入供試品溶液中，測(cè)定，取3次讀數(shù)的平均值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算相應(yīng)濃度。在同樣的分析條件下進(jìn)行空白試驗(yàn)，并按要求扣除空白干擾。

2.6 工作曲線與線性關(guān)系

取2.1項(xiàng)下配制的不同濃度的砷元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)2.5項(xiàng)下測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，測(cè)量值（3次讀數(shù)的平均值）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程：Y=633.506 1X+26.000 0，相關(guān)系數(shù)：r=0.998 6。

2.7 檢測(cè)限

以連續(xù)測(cè)定空白樣品溶液響應(yīng)值的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差（3SD）所對(duì)應(yīng)的待測(cè)元素濃度作為檢測(cè)限，結(jié)果為0.025 2 ng/ml。

2.8 精密度試驗(yàn)

取砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液及內(nèi)標(biāo)溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄結(jié)果，精密度RSD為2.69%。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品6份，分別按2.2.1，2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，在確定的測(cè)定條件下進(jìn)行分析，RSD分別為2.85%、3.16%。

2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別按2.2.1，2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，分別于 0、1、2、4、6、10、12 h 測(cè)定，計(jì)算結(jié)果。12 h內(nèi)供試品含量較穩(wěn)定，RSD分別為2.75%、2.44%。

2.11 加樣回收率試驗(yàn)

分別取含有量已知的供試品（批號(hào)：150301）6份，每份0.25 g和2.50 g，精密稱定，加入砷元素質(zhì)量相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)品，按2.2.1，2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法提取，平行制備 6份供試品溶液，進(jìn)樣分析，計(jì)算總砷及可溶性砷元素的回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，該方法準(zhǔn)確可靠，回收率為80.00%～120.00%，能基本滿足樣品中砷元素的分析測(cè)定。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.12 樣品測(cè)定結(jié)果

取3個(gè)批號(hào)的三黃珍珠膏樣品按2.2.1，2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按2.5項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定樣品中總砷及可溶性砷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

（1）原標(biāo)準(zhǔn)中的“用法用量”描述為外用，將患處清瘡，涂藥適量，亦可將藥膏涂在無(wú)菌紗布上貼敷在創(chuàng)面。一般創(chuàng)面45 cm2涂藥膏1 g，每日或隔日換藥一次。每日最高用量為18 g。

采用ICP-MS法測(cè)定雄黃藥材的三氧化二砷含量為20.19 mg/g，1 g三黃珍珠膏含有毒的三氧化二砷（3批平均為）0.021 3 mg，按每日最高用量18 g計(jì)算，18 g三黃珍珠膏含三氧化二砷（18×0.021 3）0.383 4 mg，即每日最高用量含三氧化二砷0.3 mg。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[6～14]，三氧化二砷對(duì)人體毒性極大，成人經(jīng)口中毒劑量5～50 mg，致死量100～120 mg。故原標(biāo)準(zhǔn)中的“用法用量”在安全范圍內(nèi)。

（2）建議三黃珍珠膏的藥品說(shuō)明書中添加警示標(biāo)識(shí)，說(shuō)明制劑中含兩味毒性藥材雄黃、藤黃，提示該藥材可能存在的不良反應(yīng)，并對(duì)早期中毒癥狀進(jìn)行描述，注明出現(xiàn)早期中毒癥狀應(yīng)立即到醫(yī)院就診；注明使用療程，避免長(zhǎng)期、超量使用，嚴(yán)格掌握適應(yīng)證，并注明與含雄黃制劑可能發(fā)生相互作用的藥物，更好地保障用藥安全性。

（3）關(guān)于采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法對(duì)三黃珍珠膏中總砷和可溶性砷進(jìn)行定量分析的相關(guān)文獻(xiàn)未見(jiàn)報(bào)道，本研究發(fā)現(xiàn)該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可為三黃珍珠膏用藥安全提供重要的理論依據(jù)。

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1671-1246（2017）21-0103-02