藍莓人參保健酒中主要人參皂苷的檢測

夏秀東,劉小莉,王 英,李 瑩,范琳琳,臧 泉,周劍忠*

(1.江蘇省農業科學院 農產品加工研究所,江蘇 南京 210014;2.江蘇南京中亮有機蔬果食品有限公司,江蘇 溧水 211200)

藍莓人參保健酒中主要人參皂苷的檢測

夏秀東1,劉小莉1,王 英1,李 瑩1,范琳琳1,臧 泉2,周劍忠1*

(1.江蘇省農業科學院 農產品加工研究所,江蘇 南京 210014;2.江蘇南京中亮有機蔬果食品有限公司,江蘇 溧水 211200)

利用HPLC法,檢測了兩種藍莓人參保健酒中主要人參皂苷Rg1、Rc、Rb2和Rd的含量。結果顯示：藍莓酒中添加人參的保健酒和藍莓配制酒添加人參的保健酒中的Rg1和Rd含量沒有顯著性差異,而后一種保健酒中的Rc和Rb2含量則均顯著高于前一種保健酒中的；本研究所用的檢測方法可準確分析兩種藍莓人參保健酒中的主要人參皂苷含量。

藍莓酒;藍莓配制酒;藍莓人參保健酒;人參;人參皂苷；檢測

藍莓因含有大量的花青素、酚酸、黃烷醇等多種生物活性物質而成為最受歡迎的功能性保健漿果之一。藍莓具有抗氧化、抗炎、抗癌、抗輻射、抗衰老、免疫調節、保護視力、軟化血管等多種保健功能,有“第三代水果”和“生命之果”的美譽[1]。隨著人們對功能性保健食品需求量的不斷增加,對保健飲品的需求也不斷增加,其中以藍莓為原料的保健飲品備受人們的喜愛。

人參為五加科人參屬植物的干燥根或干燥莖,皂苷類及多糖類是其主要的生物活性成分,其中皂苷類更具有廣泛的藥理作用。人參因具有抗疲勞、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗骨質疏松、抗衰老、調節免疫、調血脂、降血糖、保肝、保護中樞神經及心腦血管系統等功效而被廣泛應用于藥品和食品中,在我國有著2000多年的藥用歷史[2]。人參在世界范圍內的食品添加劑中得到了廣泛使用,中國政府也批準了人參為新功能性食品,人參的使用量連年增加。人參具有廣泛的藥理學活性和臨床應用,已應用色譜方法從人參根、根莖及其炮制品紅參中分離、鑒定了 130余個皂苷類成分,人參皂苷(ginsenoside)幾乎反映了人參的全部生物學活性[3]。因此,人參皂苷已作為評價人參質量的重要指標性成分,人參質量的評價已從感官向物質基礎分析邁進,更加科學化[4]。

本研究將人參添加到藍莓酒和藍莓配制酒中,比較分析了它們的主要人參皂苷含量,旨在為開發新型保健果酒提供理論依據。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

供試藍莓、人參由江蘇省南京市中亮有機蔬果食品有限公司提供。

1.2 試驗儀器與試劑

1.2.1 試驗儀器 JT-B均質器，河南兄弟儀器設備有限公司;高效液相色譜系統(HPLC) Waters，Xtimate C18色譜柱，美國Welch公司;DP-SY-360超聲波提取儀，北京亞歐德鵬科技有限公司;DJ300型電子天平，中國輕工業機械總公司常熟衡器工業公司;DJ1型單道打漿機，靖江中威食品機械有限公司。

1.2.2 主要試劑 人參皂苷Rg1(貨號:68317)、人參皂苷Rc(貨號:44987)、人參皂苷Rb2(貨號:41868)和人參皂苷Rd(貨號:01518)，均購自Sigma-Aldrich;安琪酵母購自上海穗禾貿易有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 藍莓酒的制作 用打漿機將藍莓打漿，然后添加0.3 mL/kg的果膠酶，于35 ℃條件下酶解2.5 h；然后添加0.1%(m/m)的釀酒酵母和14%(m/m)的蔗糖，于25 ℃條件下發酵3周,發酵酒精度為12%vol。

1.3.2 配制酒的制作 將上述酒精度數為12%vol的藍莓酒和酒精度數為58%vol的白酒按體積比1∶1混合，配制成酒精度數為35%vol的配制酒。

1.3.3 藍莓人參保健酒的制作 將人參粉碎后過120目篩子,按照1%(m/v)的添加量將其加入藍莓酒和配制酒中,先于40 ℃條件下以200 r/min震搖6 h，然后以100000 r/min離心15 min,取上清即得到藍莓人參保健酒。

1.3.4 人參皂苷標準曲線的制作 分別稱取Rg1、Rc、Rb2和Rd 4種人參皂苷10 mg，溶于1 mL甲醇中，制成10 mg/mL的人參皂苷母液；然后用甲醇稀釋成濃度分別為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.20 mg/mL的以上4種人參皂苷液；最后用0.45 μm濾膜過濾,備用。

1.3.5 藍莓人參保健酒中人參皂苷的測定[5]將藍莓人參保健酒經0.22 μm濾膜過濾,利用高效液相色譜技術檢測藍莓人參保健酒中的主要人參皂苷含量。選用C18色譜柱(規格為150 mm×4.6 mm,5 μm);采用乙腈-水作為流動相,柱溫35 ℃,進樣量20 μL,檢測波長203 nm。采用梯度洗脫,洗脫程序為:0～40 min,18%～21%乙腈;40～42 min,21%～26%乙腈;42～46 min,26%～32%乙腈;46～66 min,32.0%～33.5%乙腈;66～71 min,33.5%～38.0%乙腈;71～86 min,38%～65%乙腈;86～91 min,65%乙腈;91～96 min,65%～85%乙腈;96～103 min,85%乙腈;103～105 min,85%～18%乙腈;105～106 min,18%乙腈;體積流量1.0 mL/min。

2 結果與分析

2.1 4種人參皂苷標準曲線的建立

在高效液相色譜法檢測中，目標物質與雜質之間以及目標物質之間的分離效果會直接影響檢測結果的準確性和靈敏度。由圖1結果可見，本研究主要分析的4種人參皂苷Rg1、Rc、Rb2和Rd的保留時間分別為47.483、49.508、52.342和60.249 min,在本研究所用的檢測方法中有很強的響應值和分離效果。

圖1 人參皂苷標樣Rg1、Rc、Rb2和Rd的色譜圖

為了準確分析藍莓人參保健酒中人參皂苷的含量,以標準樣品中人參皂苷含量(Y)對相應的人參皂苷峰面積積分值(X)作圖。由表1結果可見,在所得的各人參皂苷線性回歸方程中Y值和X值均具有很好的相關性(r≥0.9990),完全滿足藍莓人參保健酒中主要人參皂苷含量檢測的要求。

表1 Rg1、Rc、Rb2和Rd的回歸方程

2.2 藍莓人參保健酒中人參皂苷含量

由圖2結果可見,雖然藍莓酒添加人參(圖2A)和配制酒添加人參(圖2B)后的保健酒中均含有很多的雜質,但是由于目標人參皂苷與雜質之間均能達到基線分離,有很好的分離效果,所以未出現峰疊加等情況,并沒有對4種目標人參皂苷的分析造成影響。這為準確分析藍莓人參保健酒中主要人參皂苷的含量奠定了基礎。

基于良好的分析方法,對藍莓人參保健酒中主要的人參皂苷Rg1、Rc、Rb2和Rd的含量進行了分析。由表2可以看出,在藍莓酒和配制酒添加人參的保健酒中均含有較高的Rg1、Rc、Rb2和Rd,這可能跟人參皂苷易溶于水、甲醇和乙醇等有關。值得注意的是，藍莓酒添加人參的保健酒和配制酒添加人參的保健酒中的Rg1和Rd含量沒有顯著性差異,而配制酒添加人參的保健酒中的Rc和Rb2含量則均顯著高于藍莓酒添加人參的保健酒中的。

3 討論

藍莓是一種口感獨特、香味宜人,集營養和保健于一身的小漿果。藍莓果酒具有酒精度低、營養價值高和健身益腦等功效,具有明目、利尿、激發肝功能和抗衰老等作用,同時可促進機體新陳代謝、促進血液循環、改善心腦血管功能和調節膽固醇水平等。

人參具有很高的藥用價值和保健功能,具有很好的抗氧化、抗炎以及治療胃和肝臟、心血管疾病和神經衰弱、腫瘤等疾病的功效,人參皂苷是其最主要的功能性成分,其中原人參二醇型人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd和原人參三醇型人參皂苷Re、Rg1、Rg2等是人參中主要的成分[2]。

A:藍莓酒+人參;B:配制酒+人參。

表2 藍莓人參保健酒中Rg1、Rc、Rb2和Rd的含量 mg/mL

Rg1 具有抗氧化、抗衰老、抗疲勞、殺滅腫瘤細胞和興奮神經中樞等作用[7]。有關研究表明,Rg1具有恢復由飼喂 D-半乳糖引致的認知障礙、促進海馬區神經干細胞增值、改善異氟烷誘導的半胱天冬氨酸特異性蛋白酶 3 的活性、提高造血干細胞對輻射誘導的細胞衰老抵抗力等作用[8-11]。Rc可通過清除自由基來抑制氧化應激[12],可通過促進谷胱甘肽過氧化物酶類化合物mRNA 的表達來促進胚胎腦發育[13]；除此之外，Rc還具有通過抑制脂肪形成的主要轉錄因子 PPARγ和 C/EBPα的表達來促進3T3-L1脂肪細胞的抗成脂活性的作用。Rb2 對糖尿病動物的DNA、 RNA 及蛋白質的合成代謝均有調節作用,因此對糖尿病有很好的治療效果；Rb2 還可通過調節糖代謝和脂代謝來預防高血脂及動脈粥樣硬化,且對視網膜色素上皮細胞的增生有顯著的抑制效果[16]；除此以外,Rb2還有增強免疫、降低高血壓及心肌梗塞風險和抗骨質疏松的功效[17-19]。Rd的藥理活性主要表現在增強學習記憶能力、促進副腎皮質荷爾蒙分泌、促進血液循環、增強免疫力、鎮痛、抗癌等方面[20-21]。

本研究發現添加人參后在藍莓酒和藍莓配制酒中可檢測到一定量的人參皂苷,這樣可大大增加藍莓酒的保健功能,提升其品質和價值。

本研究所用的人參皂苷檢測方法可準確檢測添加人參的藍莓酒和藍莓配制酒中的Rg1、Rc、Rb2和Rd;添加人參可賦予藍莓酒和藍莓配制酒多種人參皂苷,可提升藍莓酒和藍莓配制酒的保健功能和商業價值。

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DetectionofMainGinsenosidesinBlueberry-PanaxGinsengHealth-careWine

XIA Xiu-dong1, LIU Xiao-li1, WANG Ying1, LI Ying1, FAN Lin-lin1, ZANG Quan2, ZHOU Jian-zhong1*

(1. Institute of Agro-product Processing, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China; 2. Nanjing Zhongliang Organic Fruit and Vegetable Food Limited Company in Jiangsu, Lishui 211200, China)

The contents of main ginsenosides (Rg1, Rc, Rb2 and Rd) in two kinds of blueberry-panax ginseng health-care wines were detected by using HPLC method. The results showed that: there was no significant difference in Rg1 and Rd content between blueberry-panax ginseng health-care wine and blueberry-liqueur-panax ginseng health-care wine, while the content of both Rc and Rb2 in the latter health-care wine was significantly higher than that in the former one; the detection method used for this study could accurately analyze the content of main ginsenosides in two kinds of blueberry-panax ginseng health-care wines.

Blueberry wine; Blueberry-liqueur wine; Blueberry-panax ginseng health-care wine; Panax ginseng; Ginsenosides; Detection

2017-07-03

南京市科技計劃項目(201608070)。

夏秀東(1985─),男,博士,研究方向為食品生物技術。*通訊作者:周劍忠。

S663.9

A

1001-8581(2017)11-0091-04

(責任編輯:黃榮華)