酒精對KM小鼠口腔頰黏膜阿弗他潰瘍的影響

陳柔蓉 張銘陽 黎富堯 徐曉夏 周曉燕 譚媛歡 張文娜 何曉茜馮梓峻 張蘇珊 梁成結 王新紅*

（廣州醫科大學附屬口腔醫院，廣東 廣州 510040）

· 論 著 ·

酒精對KM小鼠口腔頰黏膜阿弗他潰瘍的影響

陳柔蓉 張銘陽 黎富堯 徐曉夏 周曉燕 譚媛歡 張文娜 何曉茜馮梓峻 張蘇珊 梁成結 王新紅*

（廣州醫科大學附屬口腔醫院，廣東 廣州 510040）

目的通過觀察酒精刺激KM小鼠口腔黏膜潰瘍面所產生的效果與生理性反應，探究酒精與口腔阿弗他潰瘍的相關聯系。方法使用苯酚灼燒KM小鼠頰黏膜制作阿弗他潰瘍模型。將小鼠隨機分為5組，用不同濃度酒精處理潰瘍面。于48 h、72 h觀察潰瘍面的愈合情況。結果48 h，E組潰瘍愈合情況較好。72 h，A組、B組潰瘍愈合情況較好。結論低濃度酒精（濃度≤15%）需較長作用時間（48～72 h）方能有效促進潰瘍面的愈合；高濃度酒精（濃度≥75%）短期作用（24～48 h）亦能促進潰瘍面的愈合；高濃度酒精的作用超過72 h則易刺激黏膜組織，產生反效果。

阿弗他潰瘍；動物模型；酒精

復發性阿弗他潰瘍（recurrent aphthous ulcer，RAU）是臨床最常見的口腔黏膜疾病[1]，又稱復發性阿弗他口炎、復發性口腔潰瘍、復發性口瘡，患病率為10%～25%。具有周期性、復發性、自限性的特征，灼痛明顯。

研究發現，日常飲食中的酒精成分與RAU關系密切[2]。大量飲酒可嚴重損害胃腸消化道黏膜，引起慢性、易復發的酒精性消化潰瘍，對患者的個人健康及生活質量造成十分嚴重的負面影響[3]；同時，酒精對口腔和消化道黏膜及腺體的分泌有刺激作用，可引起口腔潰瘍、牙齦炎、食管炎、胃炎、肝功能異常等疾病；此外，酒精可能誘發癌癥提高病死率[4]。

已有研究表明酒精對口腔和消化道黏膜和腺體分泌有刺激作用，酒精與RAU之間存在一定關系[3]，然而酒精如何影響RAU發生及愈合的機制仍不清楚。因此，本課題擬用KM小鼠口腔黏膜制備RAU模型，對潰瘍面施行不同濃度的酒精刺激，以此分析不同濃度范圍的酒精對于KM小鼠RAU的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物：KM系健康、SPF小鼠40只，年齡4周，雄性，由廣東實驗動物中心提供（生產許可證號：SCXK（粵）2013-0002），實驗室溫度20～25 ℃，濕度50%～65%，動物自由飲食，等體積的恒溫箱以相同條件下飼養。

1.2 分組：40只健康、清潔、在相同條件下喂食成長的雄性KM小鼠，隨機分為5組，每組8只，依次為對照組（A組）、15%酒精組（B組）、35%酒精組（C組）、55%酒精組（D組）、75%酒精組（E組）；使用苦味酸在背部毛發上進行標記以分辨個體。

1.3 步驟

1.3.1 制備頰黏膜潰瘍模型：每只小鼠腹腔注射0.15 mL 10%水合氯醛麻醉后，以牙線捆綁小鼠牙齒，固定。剪取小鼠頰黏膜面積大小橡皮障，于橡皮障上打孔暴露將受制備的頰黏膜面。取用小毛刷沾取少量90%苯酚溶液，于小鼠頰黏膜暴露處灼燒40 s。小鼠黏膜隨即產生白斑，于1 d后白斑轉為潰瘍。每只小鼠取相同部位，灼燒相同時間。

1.3.2 不同濃度酒精處理潰瘍面：小毛刷分別沾取生理鹽水（A組），15%（B組）、35%（C組）、55%（D組）、75%（E組）濃度的酒精，擦涂潰瘍處以及周圍5 s，并保持每次處理的次數、時間、酒精用量以及涂抹的部位均一致，記錄其潰瘍面積，愈合時間。

1.3.3 結果測定：每天定時觀察KM小鼠口腔黏膜潰瘍情況，借助牙科顯微鏡以及數碼攝影儀器觀察并拍攝KM小鼠口腔潰瘍情況。記錄每組小鼠口內潰瘍情況。潰瘍診斷依據標準[5]，0：無潰瘍/完全愈合，與正常黏膜組織無明顯差別；1：潰瘍邊緣泛紅，表面僅由薄的一層黃白色假膜，無凹陷，周圍無水腫；2：潰瘍表面假膜較厚，無凹陷或稍見無缺損凹陷，周圍無水腫或稍見水腫；3：潰瘍表面假膜較厚，有明顯凹陷，且周圍伴有炎性水腫；4：潰瘍表面假膜較厚，凹陷較深且缺損范圍較大，周圍伴有明顯炎性水腫。主要觀察指標：潰瘍面積，凹陷程度，有無假膜，周圍紅腫程度。

1.3.4 統計學分析：采用SPSS13.0統計軟件對實驗結果進行Fisher確切概率法統計分析，比較潰瘍情況有無差異。若P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組間不同酒精濃度對潰瘍愈合的比較：本次實驗40只小鼠全部納入結果分析。分別用生理鹽水、15%、35%、55%、75%濃度酒精連續沾涂小鼠潰瘍及周圍黏膜6次，每次相隔24 h。結果表明，各組小鼠潰瘍愈合率隨時間延長而逐漸增高，48 h后愈合率顯著增高，但各組間無統計學差異（表1、2）。

表1 48 h后小鼠口腔黏膜潰瘍面愈合情況[n（%）]

注：Fisher確切概率法，P=0.363＞0.05，差異無統計學意義

表2 72 h后小鼠口腔黏膜潰瘍面愈合情況[n（%）]

注：Fisher確切概率法，P=0.363＞0.05，差異無統計學意義

2.2 48 h后，通過檢查對比分析發現，A、E兩組小鼠口腔黏膜愈合情況較良好，周圍炎性紅腫稍有消退，肉眼可見明顯黏膜凹陷深度降低。B、C、D三組小鼠口腔黏膜愈合情況一般，潰瘍面覆蓋有較厚假膜，伴有炎性水腫。得出結論即高濃度酒精（濃度≥75%）僅需通過短時間消毒作用（24～48 h）能有效促進口腔潰瘍愈合；酒精濃度低于75%時，短時間（24～48 h）處理反而會延長口腔潰瘍愈合時間。但不同濃度酒精對于潰瘍愈合情況影響差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.3 72 h后，通過檢查對比分析發現，A、B兩組小鼠口腔黏膜愈合情況較良好，周圍炎性紅腫消退明顯，與周圍正常黏膜組織無明顯差別。C、D、E三組小鼠口腔黏膜愈合情況一般，潰瘍邊緣輕度泛紅，黏膜凹陷深度降低。即低濃度酒精（濃度≤15%）通過較長時間消毒作用（48～72 h）能有效促進口腔潰瘍愈合，酒精濃度高于15%時，長時間（時間＞72 h）處理反而會延長口腔潰瘍愈合時間，但無統計學差異，見圖1。

3 討 論

復發性阿弗他潰瘍（RAU）于人群中發病率高，且病因不明確。近年來以針對治療該疾病的漱口水及牙膏等口腔產品層出不窮。經市場走訪調查發現，此類產品大多含有乙醇成分，且部分漱口水以乙醇為其主要成分。乙醇對口腔及消化道黏膜、腺體分泌有刺激作用，長期使用可誘發食管炎、胃炎、口腔潰瘍、牙齦炎、肝功能異常等消化系統疾病[6]。

圖1 各組KM小鼠愈合率隨時間的變化

本研究采用動物模型，以涂抹不同濃度酒精的方法研究酒精對口腔潰瘍的影響。實驗過程中，本組使用了橡皮障來建模以期隔離創面，達到控制潰瘍面大小的目的。實驗數據無統計學意義，可能原因有：①在制備潰瘍模型時，模型個體潰瘍嚴重程度存在差異；②每天沾涂潰瘍表面時，所用酒精的定量標準存在一定誤差；③樣本量過少，不同濃度酒精的影響差異不明顯；④各濃度酒精配置后存放過久，因其揮發性導致濃度下降而低于預設值。

另有猜想：酒精影響RAU的發病機制—“三聯因”學說提到環境與免疫[7]。內環境紊亂、免疫系統失衡可導致機體發病，添加適當濃度/劑量的酒精可以促使口腔內環境恢復為前期無潰瘍的狀態。有實驗證明，低濃度的酒精對于小鼠胃黏膜的損傷恢復具有加速[8-9]的作用，同時口腔黏膜與胃黏膜結構相似，因而推測當低濃度酒精作用于小鼠口腔黏膜時有相似的促愈作用。但是延長使用高濃度酒精有凝固破壞蛋白質的作用，進而破壞黏膜結構，使其失去屏障作用，抑制潰瘍愈合或加重病程。綜上所述，低濃度酒精（濃度≤15%）需較長作用時間（48～72 h）方能有效促進潰瘍面的愈合；高濃度酒精（濃度≥75%）短期作用（24～48 h）亦能促進潰瘍面的愈合；高濃度酒精的作用超過72 h則易刺激黏膜組織抑制愈合或加重潰瘍發展進程。

[1] Lin SS,Chou MY,Ho CC,et al.Study of the viral infections and cytokines associated with recurrent aphthous ulceration[J].Microbes Infect,2005,7(4):635-644.

[2] 馬紅蓮.酒依賴住院患者的護理[J].中國民康醫學,2013,25(22):108-109.

[3] 姚淡,李艷霞,沈磊,等.蘭索啦哇治療消化性潰瘍出血的臨床觀察[J].藥物流行病學雜志,2011,20(9):452-453.

[4] Praud D,Rota M,Rehm J,et al.Cancer incidence and mortality attributable to alcohol consumption[J].Int J Cancer,2015,269(2):188-194.

[5] 國家中醫藥管理局.中醫病證診斷療效標準[M].南京;南京大學出版社,1994:129.

[6] Vasavada N,Agarwal R.Role of oxidative stress in diabetic nephropathy[J].Adv Chronic Kidney Dis,2005,12(2):146-154.

[7] 胡雁.復發性口瘡發病機制學說[J].廣東牙病防治,1998,6(6):60-61.

[8] 孫陽,杜軍,陳敏,等.不同濃度酒精對慢性飲酒大鼠胃黏膜細胞增殖的影響[J].南京醫科大學學報:自然科學版,2004,24(4):348-350.

[9] 拓楠,余宏宇.酒精致胃黏膜損傷的研究進展[J].中國實用內科雜志,2009,29(12):1145-1146.

Alcohol Influences on Recurrent Aphthous Ulcer of KM Mice Buccal Mucosa

CHEN Rou-rong, ZHANG Ming-yang, LI Fu-yao, XU Xiao-xia, ZHOU Xiao-yan, TAN Yuan-huan, ZHANG Wen-na,HE Xiao-qian, FENG Zi-jun, ZHANG Su-shan, LIANG Cheng-jie, WANG Xin-hong
(Affiliated Stomatological Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 510040, China)

ObjectiveTo find out the links between alcohol and recurrent aphthous ulcer by observing the influences and physiological responses of the stimulation of KM mice oral ulcers with alcohol.MethodsThe model of recurrent aphthous ulcers were constructed by cauterizing with paphenol. The mice were randomly divided into 5 groups by different alcohol concentrations. The ulcer sizes were summed on the third and fifth day in order to study the alcohol effects of healing.Results48 hours, the healing situation of E group are better than the other groups. 72 hours, A and B group's ethanol ulcer healing are better.ConclusionLow concentrations of alcohol (≤15%) can effectively promote healing of ulcers by longer-term (48-72 hours); high concentration of alcohol (≥75%) disinfection also can effectively promote the healing of ulcers by short-term (24-48 hours). But the extension of the use of high concentration of alcohol is easy to stimulate ulcers and causes counter-productive.

RAU (recurrent aphthous ulcer); Animal model; Alcoho

R781.5

B

1671-8194（2017）25-0001-02

廣東省大學生創新創業訓練計劃項目基金(2015105700043)

*通訊作者：E-mail:xinhongwang325@163.com