乳腺癌組織中P38、VEGF表達(dá)與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系

陸 清 梁宏莉 江 科 夏亞琳 薛曉紅

乳腺癌組織中P38、VEGF表達(dá)與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系

陸 清 梁宏莉 江 科 夏亞琳 薛曉紅

目的探討乳腺癌組織中P38、VEGF表達(dá)與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系。方法選取經(jīng)病理證實(shí)為乳腺癌患者88例為研究對(duì)象。采用SP法檢測(cè)P38、VEGF蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)，應(yīng)用COX回歸模型，探討P38、VEGF表達(dá)與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果88例患者中P38陽(yáng)性表達(dá)67例，陰性21例；VEGF陽(yáng)性56例 陰性32例。所有患者均隨訪到2016年1月31日，以死亡或腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)為終點(diǎn)事件，出現(xiàn)終點(diǎn)事件的患者17例；P38、VEGF在Ⅲ期乳腺癌組織中表達(dá)水平明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，而與患者年齡、腫瘤大小無(wú)明顯相關(guān)性。復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移患者中P38、VEGF陽(yáng)性率明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)者，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；多因素分析提示：腫瘤分期(P=0.01)、P38陽(yáng)性(P=0.001)、VEGF陽(yáng)性(P=0.02)是乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論P(yáng)38、VEGF陽(yáng)性表達(dá)患者的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)率高，P38、VEGF陽(yáng)性是患者轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。

乳腺癌；復(fù)發(fā)；轉(zhuǎn)移

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1398～1400)

惡性腫瘤特征之一是細(xì)胞自主持續(xù)地分裂與繁殖。近年，越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為腫瘤是一種細(xì)胞周期疾病[1]。有關(guān)細(xì)胞周期增生調(diào)控的分子機(jī)制研究證實(shí)相關(guān)蛋白可以反映多種人體腫瘤中細(xì)胞增殖狀態(tài)的標(biāo)志物[2]。分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是細(xì)胞內(nèi)參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的主要信息傳遞系統(tǒng)，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，P38是MAPK家族的重要成員，已有研究證實(shí)P38在乳腺癌組織中表達(dá)明顯高于正常組織[3-4]。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)是促進(jìn)血管生成的重要原因之一，在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。已有臨床研究證實(shí)，VEGF在乳腺癌患者早期即可呈陽(yáng)性[5]。本研究分析我院88例乳腺癌患者病理活檢時(shí)乳腺癌組織中P38、VEGF蛋白的表達(dá)水平，探討P38、VEGF蛋白的表達(dá)水平與患者轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取本院2009年1月至2011年1月收治并經(jīng)病理證實(shí)為乳腺癌的患者88例為研究對(duì)象，入選標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理組織學(xué)活檢確診為乳腺癌；②患者及家屬均同意進(jìn)行，既往未接受化療及放療等抗癌治療；③術(shù)前行全身檢查排除遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重心血管系統(tǒng)疾病、肝腎功能不全的患者；②精神異常患者；③合并其他腫瘤的患者；④嚴(yán)重免疫功能缺陷。年齡35～65歲，平均(59.7±8.5)歲，體重43～62 kg，平均(52.3±3.5 )kg；收集患者臨床資料，記錄可能影響患者腫瘤分期、年齡、腫瘤大小、轉(zhuǎn)移例數(shù)、復(fù)發(fā)例數(shù)，所有患者均隨訪到2016年1月31日，以死亡或腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)為終點(diǎn)事件。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 主要試劑

兔抗人P38多克隆抗體及VEGF兔多克隆抗體購(gòu)自Cell Signaling 公司，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗、S-P超敏免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.3 P38、VEGF免疫組織化學(xué)染色及檢測(cè)

采用SP法檢測(cè)乳腺癌組織中P38、VEGF表達(dá)：組織標(biāo)本以10%甲醛液固定24 h，常規(guī)石蠟包埋，制備5 μm厚連續(xù)切片，貼附于涂有APES處理的載玻片上，60 ℃烤片2 h。免疫組織化學(xué)染色：①石蠟切片脫蠟至水；②3%H2O2室溫孵育5～10 min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，蒸餾水沖洗，PBS浸泡5 min；③微波抗原修復(fù)；④5%～10%正常山羊血清封閉，室溫孵育10 min，傾去血清，分別滴加P38、VEGF-抗工作液，37 ℃孵育1～2 h，PBS沖洗，5 min×3次。⑤滴加生物素標(biāo)記的二抗，37 ℃孵育20～30 min，PBS沖洗，5 min/次，共3次。⑥滴加辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素，37 ℃孵育20～30 min，PBS沖洗，5 min/次，共3次。⑦DAB顯色；⑧自來(lái)水充分沖洗、復(fù)染、封片。用已知陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。陽(yáng)性結(jié)果呈棕黃色或棕褐色顆粒，不同生物學(xué)指標(biāo)在細(xì)胞中的著色部位不同。每張切片隨機(jī)取3個(gè)高倍視野，以陽(yáng)性細(xì)胞比例的平均值定義為該腫瘤的陽(yáng)性細(xì)胞百分比。

1.4 隨訪

所有患者每隔3個(gè)月進(jìn)行隨訪，以死亡或腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)為終點(diǎn)事件，最后一次隨訪時(shí)間為2016年1月30日。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般資料

88例患者，P38陽(yáng)性表達(dá)67例，陰性21例；VEGF陽(yáng)性56例 陰性32例。所有患者均隨訪到2016年1月31日，以死亡或腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)為終點(diǎn)事件，出現(xiàn)終點(diǎn)事件的患者17例。

2.2 P38、VEGF表達(dá)與乳腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的關(guān)系

P38、VEGF在Ⅲ期乳腺癌組織中表達(dá)水平明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，而其與患者年齡、腫瘤大小無(wú)明顯相關(guān)性。復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移患者中P38、VEGF陽(yáng)性率明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)者，差異顯著，P<0.05，見(jiàn)表1。

表1 P38、VEGF表達(dá)與乳腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的關(guān)系/例

2.3 P38、VEGF表達(dá)與患者轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的關(guān)系

17例復(fù)發(fā)者中，P38、VEGF陽(yáng)性率明顯高于未復(fù)發(fā)者。將性別、年齡、腫瘤大學(xué)、腫瘤分期、P38、VEGF水平等作為變量引入Cox回歸模型，單因素分析提示：術(shù)前腫瘤分期(P=0.02)、P38陽(yáng)性(P=0.03)、VEGF陽(yáng)性(P=0.001)與乳腺癌患者轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)密切相關(guān)，具體見(jiàn)表2，多因素分析提示：腫瘤分期(P=0.01)、P38陽(yáng)性(P=0.001)、VEGF陽(yáng)性(P=0.02)是乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，具體見(jiàn)表3。

表2 影響乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的單因素分析

表3 影響乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的多因素分析

3 討論

乳腺癌是婦女常見(jiàn)惡性腫瘤之一，近年，乳腺癌發(fā)病率和死亡率逐年上升。腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是腫瘤治療的最大障礙和直接導(dǎo)致患者死亡的主要原因。學(xué)者提出腫瘤需要突破血管再生調(diào)控抑制因子與刺激因子作用的平衡，進(jìn)而達(dá)到從血管前期的靜止?fàn)顟B(tài)發(fā)展到伴隨腫瘤血管新生的浸潤(rùn)狀態(tài)[6]。

腫瘤新生血管為腫瘤細(xì)胞與個(gè)體的血管循環(huán)系統(tǒng)直接相通，是惡性腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移播散的必要條件。血管新生與實(shí)體瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，血管生成最重要的正性調(diào)控因子是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子[7]。新生的血管不僅提供腫瘤血供，而且增加腫瘤轉(zhuǎn)移率。VEGF作為血管生成的主要調(diào)控因子，特異性地作用與血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂，增加毛細(xì)血管通透性，最終促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，VEGF與腫瘤分期、大小呈正相關(guān)[8]。

P38是由360個(gè)氨基酸構(gòu)成的分子量為38KDa的蛋白質(zhì)，是MAPK家族的重要成員。多種刺激因子使P38蘇氨酸和絡(luò)氨酸雙磷酸化，激活P38,使其進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，影響細(xì)胞內(nèi)多種基因的轉(zhuǎn)錄、蛋白合成及細(xì)胞表面受體表達(dá)和細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)改變，在細(xì)胞遷移、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面具有重要的調(diào)控功能[9]。臨床研究發(fā)現(xiàn)P38與乳腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示P38MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑可能在乳腺癌的侵襲與轉(zhuǎn)移中起著重要作用[10-12]。

本研究結(jié)果顯示P38、VEGF在Ⅲ期乳腺癌組織中表達(dá)明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，而與患者年齡、腫瘤大小無(wú)明顯相關(guān)性。復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移患者中P38、VEGF陽(yáng)性率明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)者，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；多因素分析提示：腫瘤分期(P=0.01)、P38陽(yáng)性(P=0.001)、VEGF陽(yáng)性(P=0.02)是乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。提示我們P38、VEGF陽(yáng)性表達(dá)患者的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)率高，P38、VEGF陽(yáng)性是患者轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。其他類似研究結(jié)果顯示VEGF及P38MAPK表達(dá)與人類多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移之間具有相關(guān)性，并且發(fā)現(xiàn)VEGF在人類鱗狀細(xì)胞癌中的上調(diào)是通過(guò)P38MAPK介導(dǎo)的。乳腺癌患者各種生長(zhǎng)因子等細(xì)胞外信號(hào)作用于腫瘤細(xì)胞膜上的受體，將信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)，使P38MAPK磷酸化，促進(jìn)VEGF蛋白表達(dá)并向腫瘤細(xì)胞外分泌，促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增生，從而增加癌細(xì)胞進(jìn)入淋巴管密度，促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[13-15]。

[1] 唐 莉,葛夢(mèng)圓,韋 達(dá),等.Hsa-miR-145調(diào)控Rab GTP酶家族成員27A基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞株MDA-MB-231遷移和侵襲的影響〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2014,31(9):1929-1932.

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(編輯：吳小紅)

RelationshipbetweenExpressionofP38,VEGFinBreastCancerandLymphNodeMetastasisandPrognosis

LUQing,LIANGHongli,JIANGKe,etal.

YueyangHospitalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai,200437

ObjectiveTo investigate the relationship between expression of P38,VEGF in breast cancer and lymph node metastasis and prognosis.Methods88 cases of patients with breast cancer confirmed by pathology were selected as the research objects.SP method was used to detect p38,VEGF protein expression in breast carcinoma tissues and to investigate the protein expression levels and breast cancer metastasis and recurrence effect,Cox regression model was used to explore the relationship between p38,VEGF expression and breast cancer prognosis.ResultsAmong 88 cases,P38 positive expression in 67 cases,negative in 21 cases,VEGF positive expression in 56 cases and negative in 32 cases.All patients were followed up to January 31,2016,to death or tumor metastasis and recurrence as the endpoint,17 patients had endpoint events;p38 and VEGF expression in stage Ⅲ breast cancer tissues was significantly higher than that in stage Ⅰ and Ⅱ,and had no significant correlation with age and tumor size.P38 and VEGF positive rates in patients with recurrence and metastasis were significantly higher than patients without metastasis and recurrence,there had statistical difference (P<0.05).Multivariate analysis showed that tumor staging (P=0.01),p38 positive (P=0.001),VEGF positive (P=0.02) were independent risk factors for metastasis and recurrence of breast cancer.ConclusionMetastasis and recurrence rates of patients with P38,VEGF positive expression are high,P38 and VEGF positive expression are independent risk factors for metastasis and recurrence.

Breast cancer;Recurrence;Metastasis

上海市教育委員會(huì)(編號(hào)：2015YSN44)；上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)(編號(hào)：14401933200)

200437 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

薛曉紅

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.09.002

R737.9

A

1001-5930(2017)09-1398-03

2016-06-07

2017-01-12)