不同深度針刺“足三里”穴對慢性胃炎大鼠消化及免疫指標的影響

莫涵瑢 王佩倫 張婧怡 顧 鑫 謝天伊 付 平

(1 北京中醫藥大學，北京，100029； 2 中國醫學科學院協和醫學院醫學信息研究所，北京，100020)

不同深度針刺“足三里”穴對慢性胃炎大鼠消化及免疫指標的影響

莫涵瑢1王佩倫2張婧怡1顧 鑫1謝天伊1付 平1

(1 北京中醫藥大學，北京，100029； 2 中國醫學科學院協和醫學院醫學信息研究所，北京，100020)

目的：研究不同深度針刺“足三里”穴對慢性胃炎大鼠的治療作用機制以及提高免疫系統功能的效果。方法：根據隨機區組設計方法，將44只大鼠分為4組：正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組。慢性胃炎大鼠模型采用碘乙酰胺溶液誘導制備。正常對照組不作任何處理，造模組用相同方法固定大鼠，但不做針刺處理，淺刺組、深刺組將毫針刺入不同深度后，分別測定各組大鼠的血清胃泌素、白介素含量及胃液pH值，觀察胃部出血點及體重變化。結果：相對于正常對照組，造模組大鼠血清胃泌素濃度降低，針刺后深刺組大鼠血清胃泌素濃度較造模組有顯著提高(P<0.01)且深刺組作用優于淺刺組(P<0.05)；比較正常對照組、造模組、淺刺組、深刺組的白介素IL-1β，其差異均無統計學意義(P>0.05)。對正常對照組、造模組、淺刺組、深刺組的組間互相比較，pH值差異均無統計學意義(P>0.05)。結論：深刺大鼠“足三里”穴治療慢性胃炎，相較于淺刺，有著更明顯刺激機體內血清胃泌素釋放的功能；針刺“足三里”穴對于調節慢性胃炎大鼠的血清白介素濃度及胃液pH值無明顯影響。

足三里；針刺深度；血清胃泌素；慢性胃炎

隨著現代社會的發展進步，人們擁有越來越優越的生活條件和環境，同時承受了快速的工作節奏和較大的精神壓力。目前，飲食及情志等方面因素是引起胃病的重要因素之一，胃病治療也成為醫學界關注的一個問題。慢性胃炎是由多種原因引起的胃黏膜慢性炎性反應性疾病，其發病率居各種胃病之首，臨床上十分常見，約占接受胃鏡檢查患者的80% ～90%[1]，因此，我們有必要進行更深一步研究探討。足三里穴為足陽明胃經合穴，是治療胃病常用的一個主要穴位，早在古代就有“肚腹三里留”的記載，現代研究也表明，足三里穴具有調整提高機體免疫功能的作用[2]，對胃病治療具有顯著的效果，因此，從不同角度研究足三里穴的作用機制，顯得十分重要。本研究從針刺足三里穴不同深度對慢性胃炎的治療作用機制影響進行了深入探討，旨在為今后科研工作及臨床治療提供一定的科學依據。

1材料和方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選用健康雄性成年Wistar大鼠44只，重量在(200±10)g。由斯貝福(北京)生物技術有限公司提供[許可證號：SCXK(京)2011-0004]。

1.1.2 試劑與儀器 1)儀器：天平，韓式電針儀(LH-202型)，高速冷凍離心機(Avanti J-26 XPI型)，直徑0.25 mm，長13 mm(0.5寸)毫針(漢醫牌一次性使用無菌針灸針，長春愛康醫療器械有限公司)。2)試劑：0.1%碘乙酰胺溶液，1%糖溶液，蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將44只大鼠按實驗設計要求分為4處理組，分別為正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組，每組11只；且為排除體重對實驗結果影響，根據隨機區組設計方法，即按體重排序，每4只為一區組，分為11區組，各區組內按隨機數法將大鼠編號，按編號由大至小分別加入正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組。

1.2.2 取穴 參考《實驗針灸學》[3]大鼠“足三里”取穴方法：膝關節后外側，腓骨小頭下約5 mm處(脛、腓骨間隙中，皮下有腓骨肌、腓神經及脛前動、靜脈分布)，左右各一穴。

1.2.3 針刺 用自制鼠袋及固定器固定大鼠后，暴露“足三里”穴。1)正常對照組：不作任何處理。2)造模組：固定大鼠但不做針刺處理。3)淺刺組：提捏皮膚將毫針沿15°角斜向下刺入約3 mm(達皮下層)。電針參數：斷續波，頻率2 Hz，電壓2 V，電流1 mA，以大鼠雙后肢輕微抖動為宜。留針20 min，1次/d，共7次。4)深刺組：將毫針直刺入約7 mm(達肌肉層)。電針參數：斷續波，頻率2 Hz，電壓2 V，電流1 mA，以大鼠雙后肢輕微抖動為宜。留針20 min，1次/d，共7次。

1.2.4 檢測指標與方法 檢測指標前對大鼠進行禁食36 h，自由飲水處理。1)血樣本處理：大鼠針刺后第2天摘眼球取血，隨后以3 000 r/min離心20 min取上清液，-80 ℃保存待檢。2)pH值和胃液量測定：大鼠剖腹，以繩線系住胃袋兩端，完整取胃，于幽門一端剪開一小口，擠壓法取胃液清潔無渾濁物部分，然后用精密pH試紙測定pH值。血清胃泌素，白介素1-β均采用酶聯免疫吸附法進行測定。

1.3 統計學方法 運用SPSS 20.0進行統計學處理。經正態性檢驗，實驗數據不滿足正態分布。因此采用中位數M描述數據平均水平，四分位數(P25～P75)描述數據變異程度，即以M(P25～P75)表示。統計推斷方法采用隨機區組設計秩和檢驗，兩2組間采用Kruskal-Wallis H檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 實驗樣本大鼠數量分析 納入大鼠44只，均進入結果分析，有個別極端值，滿足統計方法條件，不剔除。pH值共有3例缺失值，正常對照組1例，淺刺組2例，實驗中未能測得。

2.2 各組大鼠一般情況比較 正常對照組大鼠實驗前后便質無明顯變化，毛發光澤，活動正常，飲食及飲水量穩定，體重逐步增加。造模組及深刺組、淺刺組大鼠在造模期間飲水量每日下降約200 mL，飲食量略有減少，便質、毛發光澤及活動與正常對照組大鼠無統計學意義，體重增幅較小。

2.3 各組大鼠胃黏膜的觀察 實驗針刺后，通過對正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組4組大鼠胃黏膜情況的肉眼觀察，發現經過造模的造模組，淺刺組，深刺組大鼠胃黏膜可見數個大小不等出血點，說明慢性胃炎造模成功。深刺組大鼠胃黏膜狀況較優于造模組和淺刺激組。見表1。

表1 4組大鼠胃黏膜出血情況比較

2.4 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠胃液pH值的影響 實驗針刺后，正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組間互相比較，pH值差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。數據表明，本項目使用碘乙酰胺對大鼠進行慢性胃炎造模可能對大鼠胃液pH值影響較小，且針刺大鼠足三里對胃液pH值無明顯影響。

2.5 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠血清胃泌素的影響 實驗針刺后，不同組別大鼠血清胃泌素濃度中位數升序順序為造模組、淺刺組、正常對照組、深刺組。隨機區組秩和檢驗顯示各組血清胃泌素中位數不完全相同。經兩兩比較，深刺組與造模組間(P<0.01)，深刺組與淺刺組間(P<0.05)血清胃泌素差異有統計學意義，其他各組間差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。實驗表明，慢性胃炎造模后大鼠血清胃泌素分泌量降低，針刺大鼠足三里可使分泌量增加，且深刺激作用優于淺刺激。

表2 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠胃液 pH值的影響M(P25～P75)

表3 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠血清 胃泌素的影響M(P25～P75)

注:*，比較深刺組；**，比較深刺組

2.6 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠白介素IL-1β的影響 實驗針刺后，正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組間互相比較，白介素IL-1β差異均無統計學意義(P>0.05)。見表4。數據表明，本項目使用碘乙酰胺對大鼠進行慢性胃炎造模可能對大鼠白介素IL-1β分泌量影響較小，且針刺大鼠足三里對白介素IL-1β無明顯作用。

表4 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠白介素 IL-1β的影響M(P25～P75)

3討論

慢性胃炎是現代一種常見疾病，臨床表現為上腹部脹滿或疼痛，呃逆噯氣，惡心嘔吐等，中醫主要以疏肝理氣，和胃止痛為治療原則，采取湯劑或針灸治療，西醫治療以根除Hp，抑制胃酸分泌，保護胃黏膜等為主要治療方法，但存在一些不良作用。相形之下，針灸治療具有十分明顯的優勢，尤其是足三里穴的應用，在某種程度上滿足“簡、便、驗、廉”的優勢治療方案。

足三里穴是足陽明胃經合穴，對于各型脾胃疾病均有非常好的治療效果[4]。《靈樞·五邪》言“邪在脾胃，則病肌肉痛，陽氣有余，陰氣不足，則熱中善饑；陽氣不足，陰氣有余則腸中寒鳴腹痛；陰陽俱有余，若俱不足，則有寒有熱，皆調于三里。”現代文獻也表明，針刺足三里穴對胃病具有很好的治療效果，且療效明顯優于上、下巨虛[5]。侯云霞等[6]也指出“足三里是目前臨床治療慢性胃炎使用頻率最高的穴位”。所以如何針刺足三里才能獲得更好的治療效果，成為最關鍵的一個問題。

針刺深度在針刺技術中占有重要地位，直接影響到針刺的療效。《靈樞·經水》：“足陽明刺深六分，留十呼”，是最早關于針刺治療深度的記載。然《黃帝內經》有言：“病有浮沉，刺有淺深，各至其理，無過其道。”因此，一直以來針刺深度并無固定標準，多出于醫者自身經驗判斷，且對于針刺深度的選擇上有一些分歧。如陸永輝根據《靈樞》針刺深度法治療腹瀉型腸易激綜合征時的針刺深度普遍較淺[7]；楊維杰所著的《董氏奇穴針灸學》中則認為針刺深度不同，足三里穴的治療效果也不同，“若針一寸半至二寸治療胃腸病”[8]。無統一針刺深度標準會對初學者或臨床從業者的治療工作造成困惑。

本次實驗選用胃液pH值、血清胃泌素、白介素IL-1β作為評價指標。胃泌素是一種胃腸激素，主要來自于胃竇G細胞，是反應胃功能的指標之一。血清胃泌素在臨床慢性胃炎的診斷中有重要意義[9]，它可以刺激壁細胞分泌胃酸，以及促進胃腸道細胞的增殖與分化[10]。慢性胃炎發生時，由于胃黏膜固有腺體數量減少，胃泌素分泌減少，從而血清胃泌素水平降低[11-12]。白介素1-β是由單核細胞產生的一種多功能細胞因子，主要功能有保護胃細胞、抗胃黏膜潰爛以及抑制胃酸分泌[13-14]，是目前已知最強的胃酸分泌抑制因子[15]。

本實驗利用大鼠進行分組及慢性胃炎造模，以不同深度針刺慢性胃炎大鼠“足三里”，觀察其對治療慢性胃炎效果及血清胃泌素、白介素濃度的影響。本研究結果表明：1)慢性胃炎造模后大鼠血清胃泌素濃度降低，針刺后深刺組大鼠血清胃泌素濃度較造模組有顯著提高(P<0.01)且深刺組作用優于淺刺組(P<0.05)。這說明深刺足三里穴對于提高血清胃泌素有著更好的效果，其治療慢性胃炎的作用機制可能是通過刺激胃泌素分泌，調節胃酸，促進胃內消化吸收實現的。2)針刺結束后，比較正常對照組、造模組、淺刺組、深刺組的白介素IL-1β，其差異均無統計學意義(P>0.05)。提示：使用碘乙酰胺對大鼠進行慢性胃炎造模可能對大鼠白介素IL-1β分泌量影響較小，且針刺大鼠足三里對白介素IL-1β水平無明顯作用，其原因目前尚不清楚。推測可能與白介素IL-1β抑制胃酸分泌的功能有關，因為針刺可以對機體進行雙向的良性調解，所以對血清胃泌素分泌水平已經降低的病鼠并無明顯影響。3)根據對正常對照組、造模組、淺刺組、深刺組的組間互相比較，pH值差異均無統計學意義(P>0.05)。提示：使用碘乙酰胺對大鼠進行慢性胃炎造模可能對大鼠胃液pH值影響較小，且針刺大鼠足三里對胃液pH值無明顯影響。

前期文獻研究表明，胃蛋白酶為慢性胃炎發展轉歸中，能較好反映胃功能及免疫功能的測量指標，由于實驗條件及課題經費限制，本次實驗未進行測量。同時，大鼠體重與消化功能具有相關性，為排除大鼠體重對實驗結果的影響，本研究在實驗伊始采用以體重為區組劃分因素的隨機區組設計，以減弱大鼠質量對實驗結果的影響，但尚未將實驗過程中針刺對大鼠體重的影響進行控制，可能對實驗結果產生部分影響。

綜上所述，以深刺大鼠“足三里”穴治療慢性胃炎，相較于淺刺，有著更明顯刺激機體內血清胃泌素釋放的功能，從而達到更良好的治療效果，同時針刺“足三里”穴對于調節慢性胃炎大鼠的血清白介素濃度無明顯影響。

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(2016-09-11收稿 責任編輯：徐穎)

EffectsofAcupunctureatZusanliinVariousDepthsonDigestionandImmuneIndicesofRatswithChronicGastritis

Mo Hanrong1, Wang Peilun2, Zhang Jingyi1, Gu Xin1, Xie Tianyi1, Fu Ping1

(1BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China; 2InstituteofMedicalInformation,PekingUnionMedicalCollege,ChineseAcademyofMedicalScience,Beijing100020,China)

Objective:To observe the effect of acupuncture at Zusanli in various depths on the mechanism of the treatment and on improving immune function of the rats with chronic gastritis.Methods:There were 44 rats randomized into a control group, a model group, a shallow-needling group and a deep-needling group. A chronic gastritis rats′ model was set up using iodine acetamide solution. The control group

no intervention. For the model group, the rats were fastened without any acupuncture. After insertion in the deep-needling and the shallow-needling group, the serum gastrin, interleukin content and pH value of gastric juice, the weight changed and the stomach bleeding spots in all 4 groups were observed.Results:In comparison with the control group, the serum gastrin concentration decreased in the model group, and the serum gastrin concentration in the deep-needling group significantly increased compared with that in the model group (P<0.01). The serum gastrin concentration of deep-needling group increased more than that of shallow-needling group; there was no statistically significant difference in both the concentration of interleukin IL-1β and the pH value in the control group, the model group，the deep-needling group and the shallow-needling group (P>0.05).Conclusion:Acupuncture in rats at the Zusanli acupoint deeply into the muscle layer, compared with shallowly at the subcutaneous level, has a more obvious stimulation on the body′s serum gastrin release function; meanwhile, there is no significant influence on regulation of rats with chronic gastritis and gastric juice concentration of serum interleukin pH by acupuncture in rats at the Zusanli acupoint.

Zusanli; Depth of acupuncture; Serum gastrin; Chronic gastritis

R245

：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2017.09.039

2015年國家級大學生創新訓練項目(201510026012)

莫涵瑢(1994.02—)，女，2012級本科在讀，E-mail:mdn0223@163.com

付平(1966.10—)，女，博士，北京中醫藥大學針灸推拿學院副教授、副主任醫師，研究方向：有關腧穴的特異性研究，E-mail:bjzfp@hotmail.com