氣相色譜法同時(shí)測(cè)定中藥口服液體制劑中的丙酸山梨酸苯甲酸

曾波，陳睿彥，李艷，陳明涓

(昭通市食品藥品檢驗(yàn)所，云南 昭通 657000)

·中藥工業(yè)·

氣相色譜法同時(shí)測(cè)定中藥口服液體制劑中的丙酸山梨酸苯甲酸

曾波，陳睿彥，李艷，陳明涓

(昭通市食品藥品檢驗(yàn)所，云南 昭通 657000)

目的：建立同時(shí)測(cè)定中藥口服液體制劑中丙酸、山梨酸、苯甲酸含量的分析方法。方法：采用氣相色譜—火焰離子化檢測(cè)器(FID)對(duì)3種化合物進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)毛細(xì)管柱DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)分離后用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析。結(jié)果：丙酸、山梨酸及苯甲酸在25～400 μg·mL-1線性關(guān)系良好(相關(guān)系數(shù)均≥0.999)，檢出限分別為0.6、0.5、1.3 μg·mL-1。實(shí)樣測(cè)定時(shí)，加樣回收率分別為97.95%～102.75%(RSD=1.71%)、96.28%～102.37%(RSD=1.85%)和97.65%～103.51%(RSD=1.98%)。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于測(cè)定中藥口服液體制劑中丙酸、山梨酸、苯甲酸的含量。

毛細(xì)管柱氣相色譜；中藥口服液體制劑；丙酸；山梨酸；苯甲酸

中藥口服液體制劑因其含水量相對(duì)較高、所含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，故易被微生物污染[1-2]。為保證此類制劑安全有效，需向其添加適量的防腐劑以抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖，從而達(dá)到有效的防腐目的[3]。然而防腐劑選擇不當(dāng)或超劑量使用會(huì)對(duì)人們的身體健康造成損害[4]，為中藥口服液體制劑開發(fā)其防腐劑的含量測(cè)定方法，對(duì)保障臨床用藥安全具有重要意義。丙酸、山梨酸及苯甲酸是中藥口服液體制劑中3種常見的防腐劑，現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道檢測(cè)中藥口服液體制劑中山梨酸、苯甲酸的含量[5-8]，但尚未見同時(shí)測(cè)定這3種防腐劑含量的文獻(xiàn)報(bào)道。本文建立了鹽酸酸化樣品，乙醚提取，毛細(xì)管柱分離的樣品測(cè)試方法，可同時(shí)測(cè)定丙酸、山梨酸及苯甲酸，為在中藥口服液體制劑中控制這3種防腐劑含量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

安捷倫7890A型氣相色譜儀，配有自動(dòng)進(jìn)樣器和火焰離子化檢測(cè)器；Agilent OpenLAB CDS化學(xué)工作站；天平AB265-S(德國(guó)梅特勒公司)。

丙酸(AccuStandard，批號(hào)：20742，純度：100%)；山梨酸(Dr.Ehrenstorfer，批號(hào)：20531，純度：99.0%)；苯甲酸(Dr.Ehrenstorfer，批號(hào)：71105，純度：99.5%)；乙醚(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號(hào)：20141215，分析純)；鹽酸(重慶川東化工集團(tuán)有限公司化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20090422，分析純)；水為超純水。

中藥口服液體制劑為4個(gè)品種：益氣養(yǎng)血口服液(批號(hào)：20741221)、雙黃連口服液(批號(hào)：15083131)、健兒消食口服液(批號(hào)：14119004)、抗病毒口服液(批號(hào)：20140305)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-WAX石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣為高純氮?dú)?純度≥99.999%)；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積1 μL；恒流模式：載氣流速為2.0 mL·min-1；氫氣流速：45 mL·min-1；空氣流速：400 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；柱溫采用程序升溫：初始溫度40 ℃，以5 ℃·min-1升至130 ℃，再以10 ℃·min-1升至200 ℃，保持6 min；后運(yùn)行：220 ℃，5 min。

2.2 溶液的配制

對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱取丙酸、山梨酸、苯甲酸對(duì)照品各10 mg于10 mL量瓶中，加乙醚溶解并稀釋至刻度，搖勻，得各組分質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

供試品溶液：精密量取供試品2 mL，置于50 mL比色管中，加入6 mol·L-1鹽酸0.5 mL，搖勻。再加入20 mL乙醚，振搖3 min后靜置5 min，取上清液待測(cè)。對(duì)定量時(shí)超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍的供試品溶液用乙醚準(zhǔn)確稀釋后再測(cè)定。

2.3 專屬性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，丙酸、山梨酸與苯甲酸的色譜峰能完全分離，保留時(shí)間分別為15.0、24.6、28.3 min，見圖1。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取2.5中對(duì)照品溶液，按照2.1的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，丙酸、山梨酸、苯甲酸峰面積RSD分別為1.3%、1.3%和1.8%。

注：A.對(duì)照品溶液；B.供試品。圖1 益氣養(yǎng)血口服液GC圖

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加乙醚配制成低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度(25、100、400 μg·mL-1)的溶液。考察方法的日內(nèi)和日間精密度(RSD)。結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.5中對(duì)照品溶液，分別于0、6、12、24、48 h測(cè)定，丙酸、山梨酸、苯甲酸峰面積的RSD分別為1.3%、1.4%、2.0%。表明3種成分在48 h內(nèi)均穩(wěn)定。

2.7 線性關(guān)系考察

分別精密量取不同體積的丙酸、山梨酸與苯甲酸對(duì)照品儲(chǔ)備液，加乙醚稀釋成丙酸、山梨酸與苯甲酸含量分別為25、50、100、200、400 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取1 μL注入氣相色譜儀，以各組分的峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣質(zhì)量濃度X(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表2。

表2 各成分回歸方程及相關(guān)系數(shù)

2.8 檢出限及定量限

取2.7中溶液，逐級(jí)稀釋成系列濃度，分別進(jìn)樣1 μL，當(dāng)峰高為基線噪音的3和10倍量時(shí)，測(cè)得丙酸、山梨酸與苯甲酸的檢出限分別為0.6、0.5、1.3 μg·mL-1；定量限分別為1.8、1.6、4.4 μg·mL-1。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知丙酸、山梨酸及苯甲酸含量的樣品(批號(hào)：20741221)9份，按高、中、低濃度分別精密加入混合對(duì)照品溶液10、20、30 mL，按2.2方法制備供試品溶液。精密吸取1 μL注入氣相色譜儀，測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=3)

2.10 樣品含量測(cè)定

照2.2方法制備供試品溶液，對(duì)4種口服液中丙酸、山梨酸及苯甲酸含量進(jìn)行測(cè)定，每份樣品平行測(cè)定2次，取平均值。結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 前處理方法的建立

有文獻(xiàn)報(bào)道樣品用鹽酸溶液酸化乙醚提取后，將提取液濃縮近干，經(jīng)丙酮溶解待測(cè)。作者用乙醚提取后取上清液直接進(jìn)樣，結(jié)果準(zhǔn)確可靠且便捷。

3.2 色譜柱的選擇

測(cè)試HP-5(30 m×0.32 mm×0.25 μm)、DB-17(30 m×0.25 mm×0.25 μm)和DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)不同極性色譜柱對(duì)丙酸、山梨酸、苯甲酸的分離效果，發(fā)現(xiàn)DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)對(duì)這三種物質(zhì)的分離效果最佳。

3.3 與高效液相色譜法的比較

林清荷等[9]建立了用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定丙酸、山梨酸、苯甲酸的方法，將之與本法比較：1)高效液相色譜法的流動(dòng)相需要磷酸鹽緩沖液，需要調(diào)節(jié)pH至2.5，過(guò)程繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力。而本法只需用高純氮?dú)庾鬏d氣；2)高效液相色譜法提取樣品時(shí)需加入水、磷酸溶液，再加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，遠(yuǎn)不如本法一步提取簡(jiǎn)便；3)高效液相色譜法需要較昂貴的二極管陣列檢測(cè)器(非普通的紫外檢測(cè)器)，而本法中采用的FID檢測(cè)器，普通的氣相色譜儀一般都有配備。

本方法首次建立了同時(shí)測(cè)定中藥口服制劑中3種防腐劑的含量測(cè)定方法，方法學(xué)考察表明，該方法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確可行。《中華人民共和國(guó)藥典》2015版第四部規(guī)定了山梨酸、苯甲酸的限量為0.3%[10]，而對(duì)丙酸尚未作出明確規(guī)定；參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》GB 2760-2014[11]，在食品中丙酸最大限量一般為0.25%。可見，本方法完全可以滿足實(shí)際檢測(cè)的需要。

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[10] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

[11] 國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn):GB 2760—2014[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

SimultaneousDeterminationofPropionicAcid，SorbicAcidandBenzoicAcidinOralLiquidPreparationofTraditionalChineseMedicinebyCapillaryGasChromatography

ZENGBo，CHENRuiyan，LIYan，CHENMingjuan

(ZhaotongInstituteforFoodandDrugControl，Zhaotong，Yunnan657000，China)

Objective：To develop a method for the simultaneous determination of propionic acid，sorbic acid and benzoic acid in oral liquid formulations.Methods：The three compounds were determined by gas chromatography with flame ionization detector and DB-wax capillary column(30 m×0.25 mm×0.25 μm).Results：Within the range from 25 μg·mL-1to 400 μg·mL-1(r≥0.999)，a good relationship was presented between the injected amounts and peak areas for propionic acid，sorbic acid and benzoic acid.The recoveries ranged from 98.0% to 102.8%，with RSD of less than or equal to 2.0%.Conclusion：The method is suitable for the determination of propionic acid，sorbic acid and benzoic acid in oral liquid preparation of traditional Chinese medicine.

Capillary column gas chromatograph；oral liquid preparation of traditional Chinese medicine；propionic acid；sorbic acid；benzoic acid

2016-02-15)

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曾波，主管藥師，研究方向：食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)；Tel：(0870)3156097，E-mail：279466525@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.3.027