不同藥用部位及產地穿心蓮藥材中4個二萜內酯類成分的研究

肖傳學，孫玉俠，耿曉梅，高展

(天士力醫藥集團股份有限公司，天津 300402)

·基礎研究·

不同藥用部位及產地穿心蓮藥材中4個二萜內酯類成分的研究

肖傳學*，孫玉俠，耿曉梅，高展

(天士力醫藥集團股份有限公司，天津300402)

目的：考察不同產地與藥用部位對穿心蓮藥材質量的影響。方法：采用高效液相色譜法比較不同藥用部位(粗桿、細桿及葉)、不同產地及市售藥材中穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯苷元及4個成分總和的含量。結果：穿心蓮葉中所含有的穿心蓮內酯及二萜內酯類成分總含量最高，其次是細桿，粗桿含量最低。對不同產區間穿心蓮藥材內酯類成分含量的比較中，以廣西平馬地區產穿心蓮藥材穿心蓮內酯及二萜內酯類成分總含量最高。而在市售穿心蓮藥材的質量比較中發現差異較大，但呈現出與本文前述實驗相同的規律，即穿心蓮葉含量多者，質量較佳。結論：不同產地與藥用部位對穿心蓮藥材具有顯著的影響。

穿心蓮藥材；穿心蓮內酯；新穿心蓮內酯；脫水穿心蓮內酯；新穿心蓮內酯苷元

穿心蓮Andrographispaniculata(Burm.f.) Nees 主產于福建、廣東、廣西等地區，每年清明前播種，中秋開花前開始采收，全草或葉入藥，具有清熱解毒、消炎、消腫止痛之功效[1]。穿心蓮抗炎活性成分為二萜內酯類化合物，主要以穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯為主[2]，穿心蓮藥材及其制劑也多以上述兩種成分含量作為質量控制指標。但同樣具有清熱解毒、消腫止痛作用[3]的新穿心蓮內酯及其苷元，作為藥材質控指標卻鮮有報道。本文擬以穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯苷元及4個二萜內酯類成分總量[4-5]作為研究對象，考察穿心蓮藥材不同藥用部位、不同產地及市售藥材間各種二萜內酯類成分的差異，以此更加全面反映穿心蓮藥材的質量狀況，為不同廠商選擇或開展穿心蓮藥材藥源管理等提供參考。

1 儀器與試藥

Waters e2695-2996高效液相色譜儀。對照品：穿心蓮內酯(USP，批號：F0I344)；新穿心蓮內酯(天津一方科技有限公司，批號：20140110)；脫水穿心蓮內酯(中國食品藥品檢定研究院，批號：110854-201308)；新穿心蓮內酯苷元(天津一方科技有限公司，批號：20140506)；穿心蓮對照提取物(USP，批號：F0I342)；試劑：甲醇(OMNI，批號：150617014)；乙腈(OMNI，批號：101124014)；磷酸(天津風船化學試劑科技有限公司，批號：20150801)；磷酸二氫鉀(天津風船化學試劑科技有限公司，批號：20131008)；超純水(公司自制)。

穿心蓮粗桿、細桿及葉采自廣西南寧、貴港及福建漳州，穿心蓮全草藥材采自廣西南寧、貴港、橫縣、蓮塘、平馬，福建漳州、四川宜賓，市售穿心蓮藥材購自成都通德藥業有限公司(產地分別為廣東、廣西、河南、河北及福建)，上述藥材均經天士力醫藥集團股份有限公司質檢中心按照《中華人民共和國藥典》檢驗合格。

2 方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：WatersX-BridgeShieldRP18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相A：0.05%磷酸-磷酸二氫鉀水溶液；流動相B：乙腈；流速：1.5mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：223nm；進樣量：20μL；梯度洗脫(0～18min，5%～45%乙腈；18～25min，45%～80%乙腈；25～28min，80%～80%乙腈；28～35min，80%～45%乙腈；35～40min，45%～5%乙腈；40～45min，5%～5%乙腈)。

2.2供試品溶液的制備

取2.0g穿心蓮細粉，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50mL加熱回流15min，放冷至室溫，取上清液。重復上述操作4次，直至提取液為無色。合并所有提取液，減壓濃縮至50mL，取上述溶液25mL置50mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，混勻。用0.45μm濾膜濾過，即得。

2.3對照品溶液的制備

混合對照品溶液：取穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯和新穿心蓮內酯苷元4個對照品，精密稱定，分別置于10mL量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，得各對照品溶液；分別精密量取各對照品溶液5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成含穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯與新穿心蓮內酯苷元分別為50.7、52.5、51.4、50.8μg·mL-1的混合對照品溶液。

穿心蓮提取物對照品溶液：取穿心蓮對照提取物適量(約含二萜內酯25mg)，置于50mL容量瓶中，加甲醇25mL，緩慢加熱15～20min，加乙腈定容至刻度，混勻。用0.45μm濾膜濾過，即得。

2.4分析方法驗證

2.4.1系統適用性試驗 穿心蓮對照提取物色譜圖中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯色譜峰的分離度為33；穿心蓮內酯對照品色譜峰的理論塔板數為166449，拖尾因子為0.97，重復進樣6次，峰面積的RSD為1.7%。符合分析方法系統適用性的要求[6]。

2.4.2專屬性試驗 取一批穿心蓮藥材按2.1.3項下制備供試品溶液并測定，各待測成分穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯、穿心蓮內酯苷元色譜峰的純度角均小于純度閾值，符合HPLC定量分析要求。

2.4.3在溶液中的穩定性 取穿心蓮供試品、混合對照品及穿心蓮提取物對照品等的溶液分別于不同時間點(制備后0、2、4、8、12、16、20、24h)進行檢測，記錄各時間點穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯苷元峰面積，并與0時數據相比，各時間點峰面積RAD≤2.0%，所有時間點峰面積RSD≤3.0%。結果表明，供試品溶液及對照品溶液在24h內穩定。

2.4.4線性與范圍 分別精密吸取混合對照品溶液50、40、30、20、10、5、1μL進樣分析，以對照品質量濃度對峰面積進行線性回歸處理，得穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、去氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的回歸方程、相關系數和線性范圍，見表1。

表1 穿心蓮中4個成分的回歸方程、相關系數和線性范圍

2.4.5 重復性試驗 取同一批穿心蓮通過調整稱樣量制備70%、100%、130% 3個質量分數的供試品溶液，每種濃度平行制備3份，分別計算4個二萜內酯類成分含量及4個成分總含量。3個濃度的各自3份平行樣品間4個二萜內酯類成分含量及4個成分總含量的RSD均小于0.89%；9份供試品溶液RSD均小于2.3%，表明重復性良好。

2.4.6 中間精密度試驗 分別由兩名不同人員于不同日期取同一批穿心蓮通過調整稱樣量，分別制備70%、100%、130% 3個質量分數的供試品溶液，每個濃度各1份，并分別于不同儀器上按照2.1項下方法色譜條件進行測定，測得3個水平穿心蓮樣品中4個二萜內酯類成分含量及4個成分總含量RSD均小于2.0%，表明中間精密度良好。

2.4.7 準確度 取穿心蓮供試品稱樣量的1/2，精密稱定9份，分別加入對照品(溶液)適量，制備3個不同質量分數(70%、100%、130%)的供試品溶液，按照2.1.1項下分析方法，進行含量測定。計算穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯和新穿心蓮內酯苷元的回收率。結果平均回收率分別為100.9%、99.6%、100.3%、99.5%，RSD分別為0.89%、0.95%、0.61%、1.12%，表明準確度良好。

2.5樣品測定

2.5.1不同藥用部位間穿心蓮二萜內酯類成分含量分析 采用上述分析方法，分析來自3個不同產區的3批穿心蓮不同藥用部位(粗桿、細桿、葉)所含有的穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯及新穿心蓮內酯苷元的含量，結果見表2。

結果表明，同一產區中穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯及4個成分總量在葉中分布最多，其次為細桿，粗桿含量最少，但新穿心蓮內酯苷元卻在粗桿中分布最多。3個產地間，穿心蓮二萜內酯類的分布規律均相同；同一藥用部位中，不同產區間藥材含量最高的二萜內酯類成分均為穿心蓮內酯，其他3個成分則在不同產區同一藥用部位排列順序并不相同，無明顯規律。

表2 穿心蓮粗桿、細桿、葉中二萜內酯類成分含量 %

2.5.2 不同產地穿心蓮葉中成分含量分析 對本實驗室收集的來自3個省份7個不同產地穿心蓮葉中所含的二萜內酯類成分進行比對分析，結果見表3。

結果表明，平馬地區穿心蓮葉中穿心蓮內酯質量分數高達3.6%，而其他6個不同產區穿心蓮內酯質量分數均約為2.0%。但其所含有的脫水穿心蓮內酯及新穿心蓮內酯苷元與其他6個地區相比，約為其他地區的1/4；不同產區間穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的總和以平馬地區最高，而新穿心蓮內酯與新穿心蓮內酯苷元的總和以南寧地區最高。

表3 不同產地穿心蓮葉中所含二萜內酯類成分含量 %

2.5.3 不同市售穿心蓮藥材成分含量分析 對來自不同產地的市售穿心蓮藥材(共6批)進行二萜內酯類成分含量分析，結果見表4。6批市售穿心蓮藥材除產地為廣東和安國的藥材為全草外，其余藥材均主要為穿心蓮粗桿。

綜合市售藥材及各二萜內酯類成分含量分析，可知全草藥材中穿心蓮內酯的含量較高，粗桿藥材中新穿心蓮內酯苷元的含量較高，該規律與2.2.1項下所研究的不同藥用部位間二萜內酯類成分分析規律相同；比較廣東及安國南北兩個不同產區穿心蓮全草的二萜內酯類成分含量，安國產穿心蓮藥材二萜內酯類成分總量高出廣東產藥材約20%，而以粗桿為主的4批市售藥材中，二萜內酯類成分總量也以河南產藥材最高。這兩組數據也顯示穿心蓮藥材由南向北引種后，在二萜內酯類成分含量方面有所提升。

表4 市售穿心蓮藥材成分含量分析 %

3 討論

本文采用的分析方法可同時對穿心蓮藥材中穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯及新穿心蓮內酯苷元等4個二萜內酯類成分含量進行測定，該分析方法可作為《中華人民共和國藥典》2015年版穿心蓮藥材質量控制的一種有效的補充。

比較不同藥用部位所含二萜內酯類成分的含量，穿心蓮葉中二萜內酯類成分的總量幾乎為粗桿的10倍，細桿的5倍。另外，在市售不同廠家生產的穿心蓮藥材二萜內酯類成分含量比較中，同樣發現由于葉莖比例不同，飲片含量存在較大的差異，因此，根據《中華人民共和國藥典》2015年版穿心蓮藥材項下規定，制劑原料及飲片選擇穿心蓮藥材或飲片時，須根據各自產品的要求，結合工藝，嚴格控制穿心蓮葉與莖的比例。本研究也為制訂穿心蓮藥材或飲片的內控標準提供了依據。

對3個不同產地的穿心蓮葉進行分析，由于各地區的自然環境、采收期及貯藏條件等均有一定的差別，導致穿心蓮的質量也存在一定差異。本實驗也為穿心蓮提取物或穿心蓮內酯的原料產地的選擇提供了一定的數據支持。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：268.

[2] 顏玉貞，謝培山.穿心蓮質量控制的再評價[J].中藥新藥與臨床藥理，1998，9(4)：204-206.

[3] 李曙光,葉再元.穿心蓮內酯的藥理活性作用[J].中華中醫藥學刊, 2008, 26(5):984-986.

[4] 李軍，段然，黃雯，等.穿心蓮指紋圖譜和不同產地質量研究[J].中國現代中藥，2009，11(6)：21-24.

[5] 王智民,錢忠直,張啟偉，等.一測多評法建立的技術指南[J].中國中藥雜志,2011,6(6):657-658.

[6] The United States Pharmacopieial Convention. USP39-NF34[S].USA:The United States Pharmacopieial Convention，2015: 6793.

(2016-08-10)

ComparisonofDiterpenoidLactoneContentExtractedfromVariousPartsofAndrographisHerbafromDifferentOrigins

XIAO Chuanxue*，SUN Yuxia，GENG Xiaomei，GAO Zhan

(TaslyPharmaceuticalCo.，Ltd.，Tianjin300402，China)

Objective：To study the quality of Andrographis Herba from various locations and markets.Methods：HPLC method was employed to compare the content of andrographolide，neoandrographolide，dehydroandrographolide，andrograpanin and total content of the 4 components extracted from various parts ofAndrographispaniculata，including thick stem，thin stem and leaves.The contents of these diterpenoid lactone extracted fromA.paniculatacollected from various places and markets were also compared.Results：The results showed that the content of andrographolide and total content of diterpenoid extracted from leaves were higher than those extracted from stems.The content of diterpenoid extracted from thick stems was the lowest.Regarding various locations，theA.paniculatafrom Pingma，Guangxi province had a higher content than those from other locations.ForA.paniculatafrom various markets，the content of andrographolide and total content of diterpenoid fluctuated significantly.However，the distribution of effective components inA.paniculatafrom various markets was consistent，with the highest content in leaves and the lowest content in thick stems.Conclusion：Different places and medicinal parts have significant effects on the Andrographis Herba.

Andrographis Herba，andrographolide，neoandrographolide，dehydroandrographolide，andrograpanin

] 肖傳學，工程師，研究方向：中藥材及中藥制劑質量控制、已上市中藥質量標準提高研究；E-mail：xcx@tasly.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.5.016

*[