手工MGIT液體培養基在臨床中的應用

王龍剛 孫建文* 姜小華 王品領

（中國人民解放軍第八五醫院，上海 200235）

手工MGIT液體培養基在臨床中的應用

王龍剛 孫建文* 姜小華 王品領

（中國人民解放軍第八五醫院，上海 200235）

目的手工MGIT液體培養結核分枝桿菌在一線結核定點醫院應用效果評價。方法收集中國人民解放軍第八五醫院結核病中心1748例痰液標本，分別接種傳統L-J培養基和MGIT液體培養基，比較兩種培養方法的檢出率和報陽時間。結果在1748份痰液標本中：MGIT液體培養基檢出420例（24%），平均報陽時間18.5 d。L-J培養基檢出312例（17.8%），平均報陽時間30.5 d。結論手工MGIT液體培養結核分枝桿菌能快速檢出分枝桿菌，檢出率高，報陽時間短，能及時準確的為臨床提供診斷依據，適合在一線臨床實驗室應用。

結核病；MGIT液體培養基；臨床應用

結核病作為一種古老的疾病，現在依然嚴重威脅著人類的健康，中國結核病的發病率位居世界第二，耐多藥結核發病率世界第一。結核病的早期發現對結核病的控制至關重要，而細菌學診斷在結核病的診斷和防控工作中起著重要的作用。在我國培養結核分枝桿菌使用最多的是L-J固體培養法，其培養周期長，平均報陽時間4周以上。手工MGIT液體培養系統，檢出率高，報陽時間短，無需昂貴儀器，操作簡便。將上述兩種培養方法結果進行比較，評價其分離培養效果。

1 材 料

1.1 標本來源：解放軍第八五醫院結核病防治中心，按照《肺結核診斷標準（WS288-2008）》，收集1748例有效樣本。

1.2 試劑和儀器：MGIT液體培養基、熒光判讀器、痰標本前處理液、

50 mL離心管（BD公司提供），L-J培養基（上海疾控生物），萋尼氏染液（珠海貝索）。

2 方 法

2.1 標本前處理：按照《結核病診斷細菌學檢驗規程》操作，采用NALC-NaOH法進行標本處理。用無菌吸管吸取干酪樣或膿性痰部分1～2 mL，移至50 mL無菌離心管中；視痰標本性質酌情加入1～2倍量的NALC-NaOH消化液（用時臨時配制），渦旋混勻15～20 s后室溫靜置15 min；加入pH 6.8 （PBS）至50 mL，混勻，3 000 g離心15 min，傾去上清液備用。

2.2 L-J培養基分離培養：每份經NALC-NaOH法處理的標本接2支改良L-J培養基，每支L-J培養基接種0.1 mL，放置37 ℃恒溫培養箱培養，接種后3、7 d分別觀察結果1次，然后每周觀察結果1次。發現菌落生長，經抗酸染色證實為抗酸分枝桿菌后報告陽性，若為陰性報告污染。若觀察滿8周仍無菌落生長，可報告陰性。

2.3 手工MGIT分離培養：接種標本前，在4 mL液體培養管中分別加入0.5 mL（OADC）營養添加劑和0.1 mL（PANTA）雜菌抑制劑，然后每管接種經NALC-NaOH法處理的同份標本0.5 mL，放置37 ℃恒溫培養箱培養。從培養的第2天開始，每天用熒光判讀儀對培養管進行檢測。熒光判讀儀報告陽性者，對培養物進行涂片，抗酸染色鏡檢證實為抗酸分枝桿菌后報告陽性，若為陰性報告，則報告污染。培養管連續培養、監測6周時，若熒光判讀儀報告陰性，則標本報告為陰性，并對培養管底部沉淀物進行涂片及抗酸染色鏡檢，判斷是否為假陰性。

2 結 果

2.1 兩種方法培養陽性率比較：見表1。由表1可以看出，手工MGIT培養法培養陽性420例，陽性率24%，改良L-J培養出312例，陽性率17.8。2.2 兩種方法報陽時間比較：由表1，手工MGIT培養法平均報陽時間為平均18.5天，傳統羅氏培養法報陽時間為平均30.5天。

3 討 論

分枝桿菌培養被認為是診斷結核病的金標準，在我國大多數結核病實驗室現在采用的培養法主要還是L-J法。但分枝桿菌在L-J培養基上生長緩慢，而在液體培養基中能快速生長。MGIT液體培養基分離培養結果觀察通過紫外線檢測熒光強度判斷陽性，MGIT液體培養基試管底部的硅樹脂內嵌有熒光化合物，該熒光化合物可隨著微生物生長逐漸消耗掉氧氣分解而產生熒光，在微量細菌生長，肉眼未能觀察到時即產生熒光，顯示了MGIT液體培養基的特點。

表1 兩種方法培養陽性率與報陽時間的比較[n（%）]

通過本次實驗可以看出無論在涂陽和涂陰標本，手工MGIT培養系統在陽性檢出率和報陽時間上均占有優勢，能夠更快的做出藥敏結果。當然在污染率（MGIT污染率7.6%，L-J污染率4.7%）方面略高于改良L-J法，這要求在實驗操作過程中嚴格遵守操作規程，無菌操作。因此，在一線臨床實驗中開展手工MGIT液體培養能為臨床醫師提供更快更準確的細菌學診斷依據，確診結核病，為患者提供更好更優質的診療服務。

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Manual MGIT Liquid Medium in Clinical Application

WANG Long-gang, SUN Jian-wen, JIANG Xiao-hua, WANG Pin-ling

(85th Hospital of People 's Liberation Army, Shanghai 200235, China)

ObjectiveMmanual MIT liquid culture of Mycobacterium tuberculosis effect evaluation method applied in first-line tuberculosis hospitals.MethedCollect Tuberculosis Center of 85th Hospital of People 's Liberation Army 1748 cases of tuberculosis sputum samples inoculated Roche traditional medium and MGIT liquid medium. The detection rate comparison of two methods of cultivation and reported positive time.ResultsIn 1748 sputum specimens: MGIT liquid medium detected 420 cases (24%), with an average time of 18.5 days reported positive. L-J medium detected 312 cases (17.8%), the average time of 30.5 days reported positive.ConclusionManual MGIT liquid culture of Mycobacterium tuberculosis can be quickly detected mycobacteria detection rate, reported positive short time, be able to provide timely and accurate basis for clinical diagnosis, for the first-line clinical laboratory applications.

Tuberculosis; MGIT liquid medium; Clinical application

R521 文獻標識碼：B 文章編號：1671-8194（2017）23-0004-02

*通訊作者：E-mail:w080255@126.com