不同劑型干擾素治療高危型HPV亞臨床感染的對比分析

鄔賢鳳，余 穎，陳紅舟，周吉航

(浙江省舟山醫院 婦產科，浙江 舟山 316000)

健康科學臨床研究

不同劑型干擾素治療高危型HPV亞臨床感染的對比分析

鄔賢鳳，余 穎，陳紅舟，周吉航

(浙江省舟山醫院 婦產科，浙江 舟山 316000)

目的 對比分析重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊和重組人干擾素α-2b栓治療高危人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)亞臨床感染的臨床療效和安全性。方法 將138例高危型HPV亞臨床感染患者隨機分為兩組：A組采用重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊進行治療，80萬IU/d，每日一次，每月連續12 d；B組采用重組人干擾素α-2b栓治療，10萬IU/d，隔日一次，每月連續20 d，均治療6個月；對比有效率和不良反應發生率，并于治療前后取宮頸脫落細胞，采用實時定量PCR實驗測定E6、E7 mRNA表達水平。結果 A組臨床有效率顯著高于B組(P<0.05)，并發癥發生率與B組差異無統計學意義(P>0.05)。治療前，A、B兩組患者的E6、E7mRNA表達水平差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組患者的E6、E7mRNA表達水平均顯著降低，且A組的降低幅度明顯大于B組(P<0.05)。結論 與重組人干擾素α-2b栓相比，重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊治療HR-HPV，能夠更加有效的下調E6、E7 mRNA表達，提高用藥療效。

重組人干擾素α-2b；泡騰膠囊；栓劑；高危人乳頭狀瘤病毒；亞臨床感染

宮頸癌是威脅女性健康的第三大惡性腫瘤，高危型人乳頭狀瘤病毒(high-risk human papillomavirus，HR-HPV)持續感染并整合入宿主細胞是其主要誘因。研究表明，HR-HPV基因整合后，E2基因斷裂，失去了對E6、E7基因的抑制作用，而E6、E7基因能夠破壞抑癌基因p53和pRb的蛋白形態，使細胞進入過度增生而誘發宮頸癌[1]。干擾素歷來是臨床治療HPV感染的一線藥物，由免疫細胞分泌，是一類高活性、多功能的免疫介質。其劑型較多，應用方式多樣[2-3]。本院在近兩年，主要應用重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊和重組人干擾素α-2b栓治療HR-HPV亞臨床感染，本研究將E6、E7表達狀態納入其臨床療效的考察范圍，比較這兩種藥物的應用療效和安全性，以期為臨床合理用藥提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2013年10月—2016年9月收治的138例HR-HPV亞臨床感染婦女，納入標準：①經陰道鏡、TCT和宮頸活檢確診為HR-HPV亞臨床感染；②年齡18～50周歲，經期規律；③自愿簽署知情同意書。排除標準：①宮頸癌及宮頸上皮內瘤變；②肉眼可見尖銳濕疣；③急性生殖道炎癥；④妊娠期及哺乳期。采用隨機數字表將患者分為兩組各69例，兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05，表1)。

表1 兩組患者一般資料對比

1.2 HPV分型方法 采用流式熒光雜交法進行HPV分型檢測，主要步驟：(1)取宮頸上皮脫落細胞，采用脫落細胞核酸釋放劑提取DNA。(2)用上海透景生命科技有限公司提供的試劑盒，添加通用引物、globin引物、內參基因，加入PCR儀(TC-9600，LABNET公司)進行擴增，擴增條件95 ℃預變性5 min，(95 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s)5個循環，(95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s)35個循環，72 ℃延伸3 min。(3)將3 μL PCR擴增產物和22 μL微球雜交液進行混合，并經過95 ℃ 5 min變性，48 ℃ 30 min雜交后，加入75 μLSA-PE熒光素標記48 ℃孵育15 min，迅速移至Luminex多功能流式點陣儀檢測分析。所有操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 治療方法 A組患者予以重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊(上海華新生物高技術有限公司，S20050075)，80萬IU×4粒/盒，1粒/d，月經干凈第3 d，睡前置入陰道深處，每月連續使用12 d，連用6個月。B組患者予以重組人干擾素α-2b栓(安徽安科生物工程股份有限公司，S20020103)，10萬IU×3粒/盒，1粒/d，月經干凈第3 d，睡前注入陰道深處，隔日1次，每月連續使用20 d(10次)，連用6個月。

1.4 觀察指標

1.4.1 臨床療效和安全性 治療三個月后，根據以下標準評價有效率。治愈：宮頸醋酸白上皮完全消失，HPV轉陰；緩解：宮頸醋酸白上皮面積減少或厚度變薄，HPV至少有一種亞型轉陰；無效：宮頸醋酸白上皮面積和厚度改變，HPV無轉陰或惡化。有效率=[(治愈+緩解)/總例數]×100%。并記錄用藥期間有無并發癥發生，干擾素常見并發癥包括：瘙癢、下腹墜脹、分泌物增多或局部灼痛感。

1.4.2 E6、E7mRNA表達 采用新鄉科蒂亞生物技術有限公司提供的冷光儀及配套試劑盒(宮頸穩態檢測試劑盒、HPV E6/E7 mRNA檢測試劑盒)測定E6、E7 mRNA表達水平。主要步驟：(1)用宮頸穩態檢測試劑盒(化學發光)中裂解液將宮頸細胞裂解。(2)檢測緩沖液配置：1 μL封閉反應液+17 μL裂解液+31 μL dd H2O+1 μL檢測探針。(3)布板：標本(50 μL)+標本檢測緩沖液(50 μL)，用封條貼紙裹緊整塊板，放入55 ℃保溫箱保溫3.5 h。(4)3步信號放大。(5)上冷光儀檢測。

2 結 果

2.1 臨床療效和安全性 A組有效率顯著高于B組(P<0.05，表2)。治療期間，A組發生4例陰道瘙癢、4例局部疼痛、5例灼熱感，不良反應發生率18.8%；B組發生3例陰道瘙癢、4例灼熱感，不良反應發生率10.1%；兩組間不良反應發生率差異無統計學意義(χ2=2.105，P=0.147)。

表2 兩組患者臨床療效對比[n(%)]

2.2 E6、E7 mRNA表達 治療前，兩組患者E6、E7 mRNA表達水平差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組的E6、E7 mRNA表達水平均顯著降低，且A組患者的降低幅度明顯大于B組(P<0.05)；見表3。

表3 兩組患者治療前后E6、E7 mRNA表達水平對比

3 討 論

干擾素是病毒進入機體后宿主細胞產生的一種免疫活性物質，重組人干擾素α-2b具有廣譜抗病毒活性，其作用機制包含以下方面[4-5]：(1)提高機器免疫監視和應答功能，及時清除病毒；(2)與靶細胞表面的干擾素受體結合，阻止局部病毒蛋白質合成；(3)調節機體內分泌功能，如雌二醇、孕酮等，改善生殖道內環境，從而抵御病毒感染。重組人干擾素α-2b劑型眾多，不同劑型有不同的優缺點。相較于栓劑，陰道泡騰膠囊的有效成分高出8倍，由于劑量差異較大，前者可能有效性更高，但副作用更明顯。本研究結果顯示，A組有效率明顯高于B組；兩組不良反應均為干擾素相關不良反應，A組稍高于B組，但組間差異無統計學意義，這說明重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊能夠在保障安全性的基礎上實現大劑量用藥。

泡騰膠囊是含有泡騰崩解劑的一種新劑型，與栓劑相比體積小，攜帶方便，泡騰膠囊本身干燥不含水分，進入機體后遇水迅速崩解和融化，崩解產生的大量泡沫，增加了藥物與病變部位的直接接觸面積[6]，從而使有效成分均勻地分布于宮腔表面，包括宮頸口和陰道各側壁，故而不會因局部藥物濃度過高而誘發的副反應，這也是泡騰膠囊可以實現大劑量用藥的主要原因；而栓劑因無法在宮腔內部涂抹均勻，故不適用于過大劑量用藥；作者認為這是泡騰膠囊取得更高療效的主要原因。

臨床調查結果顯示，99.0%以上的宮頸癌是由HR-HPV持續感染并與宿主細胞發生基因整合所致[7]。從DNA結構來看，HPV包括早期基因區(E)、晚期基因區(L)和長控制區(LCR)三個部分，負責病毒復制、轉錄、翻譯及細胞轉化的主要是E區，包含E1～E7，其中與持續感染及DNA整合關系最為密切的是E6與E7。當前研究已證實宮頸癌的發生、發展是一個長期、漸變的過程，其中HR-HPV E6與E7mRNA持續高表達是該過程的關鍵因素[8]。也有研究指出E6與E7陽性表達率在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸癌中依次升高，其中在≧CINⅡ中達到93%以上，在宮頸癌中為100%[9]。近年研究證實除了E6和E7的mRNA表達水平以外，其基因突變也是與宮頸癌發生與發展密切相關，更是證實了兩者的重要性[10]。因此作者認為評價HR-HPV感染的治療療效時，E6與E7mRNA必不可少。本研究結果顯示，治療后，患者的E6、E7 mRNA表達水平均有降低，且A組患者的降低幅度明顯高于B組。該結果從病毒基因學角度證實了重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊的治療效果優于重組人干擾素α-2b栓。

綜上所述，與重組人干擾素α-2b栓相比，重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊治療HR-HPV，能夠更加有效地下調E6、E7 mRNA表達，提高用藥療效。但本研究病例數較少，且隨訪時間較短；HR-HPV感染具有復發性，短期療效和中遠期療效之間可能存在較大的差異；因此，在以后的研究中，還需設計大樣本、長期隨訪的實驗方案加以證實。

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Effects of different formulations of interferon in treating high risk HPV: a comparative study

WU Xian-feng， YU Ying， CHEN Hong-zhou， ZHOU Jie-hang

(DepartmentofObstetrics&Gynecology，ZhoushanHospital，Zhoushan316000，China)

Objective To evaluate the clinical effects and sec urity of recombinant human interferonα-2b vaginal effervescent capsule and human recombinant interferonα-2b turunda in treating high-risk human papillomavirus (HR-HPV) subclinical infection. Method 138 patients with HR-HPV infection were divided into 2 groups. Group A were treated with recombinant human interferonα-2b vaginal effervescent capsule， 800， 000 IU/d， QD， 12d/months for 6 months. Group B were treated with recombinant interferonα-2b turunda， 100，000 IU/d， QID， 20d/months for 6 months. The effective rate and complications rate between groups were compared. The exfoliated cells were extracted to detect E6、E7 mRNA expression by PCR assay. Findings The clinical effective rate of Group A was higher than Group B (94.6% VS 72.2%，P<0.05). No significant difference was found between the two groups in complications rate (18.8% VS 10.1%，P>0.05). Before treatment， the E6 and E7 mRNA expression levels of Group A and B were 0.625±0.103 VS 0.633±0.114 and 0.437±0.053 VS 0.420±0.061. There was no significant difference between the two groups (P>0.05). After treatment， the E6 and E7 mRNA expression levels of Group A and B were 0.175±0.026 VS 0.294±0.034 and 0.214±0.036 VS 0.304±0.049 respectively， with those of Group A being lower than those of Group B. The difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion Compared to human recombinant interferonα-2b turunda， the recombinant human interferonα-2b vaginal effervescent capsule has higher ability to down regulate E6、E7 mRNA expression and improve the effect in treating HR-HPV subclinical infection．

recombinant human interferonα-2b; vaginal effervescent capsule; turunda; HR-HPV; subclinical infection

2016-11-19

鄔賢鳳(1982-)，女，浙江舟山人，本科，主治醫師。

10.3969/j.issn.1674-6449.2017.03.014

R452

A

1674-6449(2017)03-0283-04