鵝副粘病毒病感染的診斷與防治

柴 華，孫德君，孫曉峰，武 嘯，楊朋欣，秦立鑫

（哈藥集團生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

鵝副粘病毒病感染的診斷與防治

柴 華，孫德君，孫曉峰，武 嘯，楊朋欣，秦立鑫

（哈藥集團生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

鵝副粘病毒病是由禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）引起的急性病毒性傳染病，對養鵝業危害極大，文章從發病情況、臨床癥狀、病理變化、實驗室診斷幾個方面對鵝副粘病毒病作出診斷，并提出了相應的防治措施，以減少該病的發病率和死亡率。

鵝副粘病毒病；主要病變；防治

鵝新城疫是由新城疫病毒引起的鵝的急性、烈性和高度接觸性傳染病[1-3]。在國際病毒分類委員會（ICTV）第七次報告中，把新城疫病毒歸入禽副粘病毒Ⅰ型（AMPV-1），副粘病毒科；副粘病毒亞科的腮腺炎病毒屬。禽副粘病毒Ⅰ型（AMPV-1）僅有一個血清型，即新城疫病毒。新城疫病毒可引起雞、鴨、鵝等家禽和個別鳥類發病。本病具有很高的發病率和死亡率，一旦發生，會給養殖業帶來巨大的經濟損失，是危害養禽業的主要傳染病之一[4-8]。世界動物衛生組織（OIE）將新城疫列入A類動物疾病，同時我國將其列入一類動物疫病。

禽副粘病毒（AMPV）共有9個血清型，AMPV1～AMPV9，禽副粘病毒Ⅰ型（AMPV-1）是禽類感染的主要病原體，其典型代表為新城疫病毒。新城疫（ND）可以引起多種禽類發病，在世界歷史上經歷了4次大流行，給全球經濟帶來了巨大損失。1997年江蘇省首次出現鵝群爆發類似雞新城疫疫情。此后我國南方其他各省相繼出現此疫情，最后確診為副粘病毒感染，給當地養鵝業造成嚴重影響[9-11]。本病主要通過消化道及呼吸道傳播，不呈現明顯的季節性流行，各種品種及日齡的鵝均容易感染。此外，由于我國水禽養殖規模的擴大，發生鵝感染禽副粘病毒的情況也越來越常見，該病在臨診癥狀、組織學變化、病理變化等方面都表現出一定的特點，并且該病毒毒力可能有不斷增強的趨勢。

1 發病情況

2016年山東省某鵝場飼養了5 000多只30日齡肉鵝，病鵝初期表現精神不振、萎靡、體溫升高、行動無力，常蹲地不動。采食量和飲水量都減少，糞便呈灰白色。

臨床癥狀：病鵝初期表現精神不振，采食、飲水減少，有時勉強采食或飲水又隨即甩頭吐出；拉白色稀糞或水樣腹瀉，部分病鵝時常甩頭，并發出“咕咕”的咳嗽聲。病情加重后，病鵝雙腿無力，蹲伏地上，不愿行走。后期病鵝極度衰弱，渾身打顫，眼睛流淚，眼眶及周圍羽毛被淚水浸濕，有時鼻孔流出清亮水樣液體，頭頸顫抖，呼吸困難。最后常見病鵝相互擁擠在一起，遠離其他尚能行動的鵝，體重迅速下降，并漸漸衰竭而死，重癥病鵝及病死鵝泄殖腔周圍羽毛常沾有大量白色糞便。

2 病理剖檢病變

病死鵝剖檢腸、胰腺、肝、腎的病理變化見圖1。

病死鵝剖檢以腸道出血，腸黏膜呈糠麩樣，有潰瘍，但無栓塞為特征。直腸更加明顯，可見散在的潰瘍灶，并有紅色結痂。肝臟腫大，質地變硬，膽囊腫大，充滿膽汁；胰腺出血、有粟粒大小白色壞死灶；腎略腫大，輸尿管擴張。患病雛鵝以腸黏膜出血為主，并伴有散在的潰瘍灶為特征性病理變化。

3 病理組織學變化

病鵝的腸、肝、心、胰腺、腎、脾病理切片見圖2。

病死鵝肝細胞、腎小管上皮細胞、心肌細胞等常表現顆粒變性或空泡變性，氣管黏膜上皮細胞壞死脫落，纖毛消失。病鵝腸道黏膜多發生凝固性壞死，腸黏膜病變深入到黏膜下層和肌層，黏膜下層常見嚴重的充血、出血。胰腺腺泡結構大部分破壞，常見大小不一的壞死灶。脾臟淋巴組織嚴重變性壞死和空泡化，淋巴細胞顯著減少，白髓結構大部分消失，并可見均勻紅染的血漿滲出物。

圖1 病死鵝剖檢腸、胰腺、肝、腎病理變化

4 實驗室診斷

4.1 引物的設計合成

根據GenBank發表的NDV的F基因序列設計引物如下。

上游引物為P1：5'GCTCATTCAGGACGCAATA 3'；

下游引物為P2：5'TGTGATAATCCGTCGGTGACT 3'。

引物由吉林庫美生物工程技術有限公司合成。

4.2 病毒分離與鑒定

取疑似鵝副黏病毒的肝臟剪碎，按1∶5（W/V）比例加入滅菌PBS進行勻漿處理，將勻漿液反復凍融3次，4 000 r·min-1離心30 min，取上清液備用。上清液中加雙抗（青霉素、鏈霉素）各3 000 U·mL-1，置4℃過夜，以8 000 r·min-1離心10 min，取制備的上清液以尿囊腔途徑接種10日齡SPF雞胚，0.1 mL·胚-1，于37℃孵育，每日觀察兩次，收獲120 h內死亡的雞胚尿囊液，收集死胚尿囊液，進行HA試驗及PCR鑒定。

4.3 病毒DNA的提取及PCR擴增

鵝副粘病毒F基因的PCR產物電泳結果見圖3。

圖2 病鵝的腸、肝、心、胰腺、腎、脾病理切片

圖3 鵝副粘病毒F基因的PCR產物電泳結果

病毒液采用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0提取試劑盒，按說明書進行病毒DNA的提取。

RT-PCR反應：RNA模板14.5 μL，隨機引物2 μL混合，70℃水浴5 min，-20℃5 min；加入下列液體：5×Buffer 5 μL，dNTP 2 μL，RNAi 0.5 μL，MLV 1 μL；37℃水浴1 h，取出放入96℃水浴5 min，取出。PCR反應采用25 μL體系，滅菌雙蒸水17 μL、10×PCR Buffer 2.5 μL、DNA溶液2.0 μL、dNTP（2.5 mmol·μL-1）2 μL、上下游引物1 μL、Taq酶0.5 μL。95℃變性5 min，1個循環，95℃變性1 min，67℃退火50 s，72℃延伸50 s，30個循環后，72℃延伸10 min。PCR反應完畢后，取出PCR產物5 μL，進行1%瓊脂糖凝膠電泳，于紫外燈下觀察電泳結果。電泳結果表明，待檢樣本中可擴增出1條約500 bp的目的條帶（圖1）。再結合發病情況和剖檢變化，診斷為鵝副黏病毒感染。

5 防治措施

鵝副粘病毒病是一種急性、病毒性傳染病，目前尚缺乏特效藥物可以控制本病的發生。因此，平時應加強鵝群的飼養管理，調整鵝群的飼養密度，注意搞好環境衛生，經常消毒鵝舍及用具，對4～8周齡的仔鵝可全群喂服維生素和抗菌藥物，或在飼草中添加自制大蒜酊。應堅持預防為主的原則，及早接種疫苗，對已發病鵝群，要分病鵝和假定健康鵝區別對待，已發病鵝用抗血清治療，未發病鵝使用疫苗緊急接種：10～14日齡雛鵝每只肌注0.3 mL，青年鵝每只肌注0.5 mL，大鵝每只肌注1 mL，或種鵝產蛋前20 d時肌注0.5 mL·只-1。疫苗可在常溫下避光保存，使用方便，免疫效果好。全場清除糞便、污物、徹底消毒，不要隨便到外地引種，以防帶回疫病，已引進的鵝要隔離飼養觀察。

對病鵝用抗鵝副粘病毒血清注射，同時用百毒殺帶鵝消毒和洗刷飲水槽、料槽等用具。用強力霉素或替米考星和百毒克等抗病毒類藥合用5～7 d，效果較好，還要供給足量多種維生素、電解質多維等。加強飼養管理，降低鵝群密度，注意搞好環境衛生，勤打掃糞便，定期消毒，對病死鵝要做深埋處理。養鵝戶最好不要同時養雞、鴨，以免交叉感染，同時要特別注意做好預防工作。

[1]王學理,武迎紅,龔團蓮,等.鵝副粘病毒病的研究進展[J].吉林畜牧獸醫,2005（5）:14-17,19.

[2]吳虎,趙太云.鵝副粘病毒的分離與鑒定[A].中國畜牧獸醫學會傳染病學分會第五屆全國會員代表大會暨第九次學術研討會論文集[C].煙臺:中國畜牧獸醫學會傳染病學分會,2001.

[3]王永坤,嚴維巍,周繼宏,等.鵝副粘病毒病的病理變化[A].中國畜牧獸醫學會傳染病學分會第五屆全國會員代表大會暨第九次學術研討會論文集[C].山東煙臺,2001.

[4]葉曼曼.鵝副粘病毒病研究進展[J].中國禽業導刊,2011,28（15）:50.

[5]鮮思美.鵝副黏病毒環介導等溫擴增快速檢測方法的建立及應用[J].生物技術通報,2012（11）:150-154.

[6]舒秀偉,陳生雷,周麗,等.鵝副粘病毒YF株的分離鑒定與生物學特性研究[J].中國獸藥雜志,2013,47（2）:18-20.

[7]杜宗沛,吳植,徐小琴,等.江蘇中部地區鵝副粘病毒的分離與鑒定[J].安徽農業科學,2013,41（9）:3 901-3 904.

[8]辛朝安,任濤,羅開健,等.疑似鵝源新城疫感染診斷初報[J].養禽與禽病防治,1997,16（1）:5．

[9]王永坤,田惠芳,周繼宏,等.鵝源新城疫病的研究[J].江蘇農學院學報,1998,18（1）:50-62．

[10]董國英.鵝副粘病毒病研究進展[J].現代畜牧獸醫,2006（12）: 61-66．

[11]李文良,馮太蘭,戴亞斌,等.雞新城疫疫苗對鵝副粘病毒病免疫效果觀察[J].中國預防獸醫學報,2008,30（6）:470-481．

Diagnosis and Treatment of Goose Paramyxovirus Infection

CHAI Hua,SUN Dejun,SUN Xiaofeng,WU Xiao,YANG PengXin,QIN Lixin

（Harbin Pharmaceutical Group Biological Vaccine Co.,Ltd.,Harbin 150069,China）

Goose paramyxovirus disease is acute viral infectious disease caused by avian paramyxovirus(APMV-1).It is great harm to the goose industry.This paper reviewed the incidence,clinical symptoms,pathological changes,laboratory diagnosis aspects of goose paramyxovirus disease,and put forward the corresponding control measurestoreducethemorbidityandmortalityofthedisease.

goose paramyxovirus disease;main lesion;prevention and treatment

S835；S852.65+9.5

：A

：1001-0084（2017）07-0030-03

2017-05-16

柴華（1978-），男，黑龍江佳木斯人，碩士，高級獸醫師，主要從事于獸用生物制品研究。