應(yīng)用微環(huán)DNA技術(shù)體外誘導(dǎo)和制備重組的乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA

朱園飛，李改云，常豪，魚康康，高月求，鄧強(qiáng)

1. 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)室，上海 201203； 2. 中國科學(xué)院上海巴斯德研究所分子病毒與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200032

·論著·

應(yīng)用微環(huán)DNA技術(shù)體外誘導(dǎo)和制備重組的乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA

朱園飛1, 2，李改云2，常豪2，魚康康2，高月求1，鄧強(qiáng)1, 2

1. 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)室，上海 201203； 2. 中國科學(xué)院上海巴斯德研究所分子病毒與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200032

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(covalently closed circular DNA，cccDNA)是病毒慢性感染的分子基礎(chǔ)。本課題組前期研究通過Cre/loxP介導(dǎo)的位點(diǎn)特異性DNA重組策略，在細(xì)胞核內(nèi)由前體質(zhì)粒誘導(dǎo)重組cccDNA(rcccDNAloxP)產(chǎn)生，首次建立了HBV cccDNA的體外培養(yǎng)細(xì)胞和小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。本研究基于大腸埃希菌ZYCY10P3S2T PhiC31重組酶誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)，建立了一種體外誘導(dǎo)HBV rcccDNA(rcccDNAattR)微環(huán)產(chǎn)生和純化的策略。純化的rcccDNAattR微環(huán)具有超螺旋結(jié)構(gòu)，細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其能支持功能性的HBV復(fù)制和抗原表達(dá)。與普通的線性HBV復(fù)制子編碼質(zhì)粒相比，rcccDNAattR尾靜脈高壓注射小鼠模型能誘導(dǎo)顯著延長的病毒抗原血癥。因此，本研究在原核表達(dá)系統(tǒng)和實(shí)驗(yàn)小鼠水平提供了一種更為簡化的HBV cccDNA實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ拖到y(tǒng)，并再次顯示rcccDNA具有顯著的穩(wěn)定性，能作為一種基本策略在小鼠模型中誘導(dǎo)病毒持續(xù)感染。

微環(huán)DNA技術(shù)；PhiC31；位點(diǎn)特異性重組；乙型肝炎病毒；共價(jià)閉合環(huán)狀DNA

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)成熟粒子中含有約3.2 kb的松弛環(huán)狀DNA基因組(relaxed circular DNA，rcDNA)。在病毒感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，rcDNA修復(fù)為共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(covalently closed circular DNA, cccDNA)，是HBV 轉(zhuǎn)錄復(fù)制的原始模板[1]?！?br>