辣木葉提取物降低高尿酸血癥小鼠尿酸水平及機理研究

梁文娟 和勁松 田洋 趙德錕 王洪玲

摘要[目的]研究辣木葉醇提物對血清尿酸（UA）、肌酐（Cre）、血尿素氮（Bun）、腺苷脫氨酶（ADA）以及肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）的影響。[方法]連續7 d灌胃給予辣木葉醇提物和別嘌呤醇（0.01 g/kg），誘導小鼠產生高尿酸血癥，對比各組小鼠血清中UA、Cre、Bun、XOD和ADA的含量變化。[結果]與模型組比較，辣木葉提取物的低、中、高劑量組（1.0、2.0、4.0 g/kg）均可降低高尿酸血癥小鼠UA、Cre、Bun、ADA、XOD的水平。[結論]辣木葉醇提物具有降尿酸作用，抑制 XOD 活性是其降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的機制之一。

關鍵詞辣木葉；高尿酸血癥；尿酸水平；機理

中圖分類號S789.4文獻標識碼

A文章編號0517-6611（2017）17-0108-02

Abstract[Objective] The research aimed to study the effect of M.oleifera leave extract（MOLE）on the level of serum uric acid（UA），creatinine（Cre），blood usea nitrogen（Bun），adenosine deaminase（ADA）and liver xanthine oxidase（XOD）.[Method]Intragastric administration of MOLE（1.0，2.0，4.0 g/kg）and allopurinol（0.01 g/kg）for 7 days，the level of UA，Cre，XOD and Bun in hyperuricemia mice induced by potassium oxonate was respectively analyzed.[Result]Compared with model group，each dosage group could degrade the levels of serum UA，Cre，Bun，ADA and XOD activities in hyperuricemia mice.[Conclusion]The MOLE could obviously reduce the level of serum uric acid，and the effect is related to its inhibition of hepatic XOD activities.

Key wordsMoringa oleifera leaves； Hyperuricemia； Level of uric acid（UA）；Mechanism

基金項目云南省應用基礎研究計劃項目青年項目（2016FD023）；云南省教育廳科學研究基金項目（2015Y188）；云南農業大學自然科學青年基金項目（2015ZR09）。

作者簡介梁文娟（1985—），女，云南昆明人，講師，博士，從事天然產物化學成分和藥效物質研究。*通訊作者，講師，博士，從事中藥及民族藥藥效物質基礎研究。

收稿日期2017-05-09

痛風是因遺傳性或獲得性病因導致嘌呤代謝紊亂所引起的一類疾病，是由尿酸鹽結晶沉積于機體組織所引起的有一種或多種病變的臨床綜合征[1-2]。當黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）活性增強，體內尿酸濃度升高會形成高尿酸血癥，別嘌呤醇、非布司他是現有黃嘌呤氧化酶抑制劑的代表藥物，但均伴隨皮疹、肝腎功能異常等不良反應[3-4]，尋找高效、低毒的XOD抑制劑具有現實意義。研究發現，天然產物如虎杖、土茯苓、土連翹、荷葉、山楂、落葉松和桑葉的提取物和單體具有XOD抑制作用[5-8]；2015年FDA 批準上市的新藥 Lesinurad，當與XOD抑制劑聯用可治療高尿酸血癥并能緩解痛風癥狀[1]；通過篩選抑制XOD作用的植物資源，系統研究其物質基礎和作用機制，有望研制出高效、低毒、作用機制明確的先導化合物。

辣木（Moringa oleifera）為辣木科（Moringaceae）辣木屬（Moringa）熱帶落葉喬木，具有解痙、鎮痛、降壓、消炎、抑制腫瘤和拮抗阿爾茲海默癥中氧化應激的活性[9-11]，其化學成分類型豐富，其中辣木葉總黃酮含量高達 6.2%，又以黃酮和黃酮醇類物質最高。有文獻報道，黃酮類化合物（如桑色素[12]、槲皮素[13]、水飛薊素[13]）具有抗痛風作用。該研究探索云南產辣木葉醇提物對氧嗪酸鉀鹽誘導的高尿酸血癥的治療作用及其降尿酸作用和作用機理，以拓展辣木的開發利用前景，同時尋找新的抗痛風及降尿酸的活性成分。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗動物。湖南斯萊克景達實驗動物有限公司體重（20±3）g的SPF級昆明種雄性小鼠60只，試驗動物使用許可證號SCXK（湘）2011-0003，動物試驗期間室溫（24±2）℃。

1.1.2藥品及試劑。

辣木葉采自云南普洱，經中國科學院張東書副研究員鑒定為Moringa oleifera Lam.。氧嗪酸鉀鹽和別嘌呤醇購買于Sigma-Aldrich，批號分別為STBD5759V和081M1112V；尿酸測定試劑盒、尿素氮測定試劑盒和肌酐試劑盒購自希森美康醫用電子（上海）有限公司，批號分別為YZB1JAP4561-2012（398308）、YZB1JAP5441-2012（332213）和YZB1JAP4550-2012（252203）；腺苷脫氨酶測試盒、黃嘌呤氧化酶測試盒、考馬斯亮藍測試盒購自南京建成生物工程研究所，批號分別為2015122、20151210、20151208。

1.1.3儀器。

DY89-II型電動勻漿機，寧波新芝生物科技股份有限公司；旋轉蒸發儀，河南鞏義予華公司；高速冷凍離心機，美國Beckman公司；

UV-2100紫外分光光度儀，北京瑞利分析儀器公司。

1.2方法

1.2.1辣木葉樣品的制備。

稱取干燥辣木葉100.0 g，粉碎后加入600 mL 70%乙醇，超聲提取2次，每次2 h，將提取液合并濃縮至375.0 mL，得辣木葉高劑量組（4.0 g/kg，按生藥計，下同）；按照同樣方法得到辣木葉低、中劑量組（1.0、2.0 g/kg）。

1.2.2小鼠高尿酸血癥模型建立。

60只小鼠適應7 d后，隨機分組，每籠10只，分為正常組、模型組、陽性藥組、辣木葉提取物低劑量組、辣木葉提取物中劑量組、辣木葉提取物高劑量組。其中正常組、模型組灌以生理鹽水，陽性藥組以別嘌呤醇混懸于0.5% CMC-Na中，給藥劑量為0.01 g/kg。灌胃量均為0.015 mL/g。連續7 d，每天灌胃1次。參考文獻方法造模[14]，于最后1次給藥前1 h對小鼠腹腔注射氧嗪酸鉀鹽（混懸于濃度0.5% CMC-Na溶液），劑量為0.4 g/kg，以造成小鼠急性高尿酸血癥，正常組按照同樣劑量腹腔注射0.5% CMC-Na。給藥1 h后，眼眶取血，全血5 000 r/min離心10 min，取上清，于4 ℃冰箱保存待檢測。于冰臺上分取肝臟及腎臟組織，-70 ℃凍存待檢測。自動生化分析儀檢測UA、Cr、Bun、肝臟XOD、 ADA活性。采用SPSS 18.0 軟件進行分析，用均數±標準差（ ±S）表示。組間比較采用t 檢驗，以P<0.05 為差異有統計學意義。

2結果與分析

2.1辣木葉70%乙醇提取物對高尿酸血癥小鼠UA水平的影響

由表1可見，與空白組比較，氧嗪酸鉀鹽造模成功后小鼠血清尿酸水平顯著升高（P<0.01）。給藥7 d后，與模型組比較，陽性藥別嘌呤醇（0.01 g/kg）和辣木葉高劑量組（4.0 g/kg）均可顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平（P<0.01），中劑量組（2.0 g/kg）小鼠血清尿酸水平有所下降（P<0.05），表明辣木葉醇提物的降尿酸作用隨劑量增加呈增強的趨勢。

2.2辣木葉70%乙醇提取物對高尿酸血癥小鼠肌酐及尿素氮的影響

由表2可知，與模型組相比，別嘌呤醇組可以顯著地降低高尿酸血癥小鼠肌酐水平（P<0.01），但對尿素氮無抑制作用；辣木葉的低、中、高劑量均可降低高尿酸血癥小鼠肌酐（P<0.01）和尿素氮的水平（P<0.05）。

2.3辣木葉70%乙醇提取物對高尿酸血癥小鼠肝臟XOD及ADA 的影響由表3可知，

與模型組相比，別嘌呤醇組和辣木葉70%乙醇提取物中劑量組（2.0 g/kg）顯著降低高尿酸血癥小鼠肝臟XOD 水平（ P<0.01）；辣木葉70%乙醇提取物低、高劑量對XOD也有一定的抑制作用（P<0.05），但其抑制程度與其相同劑量組對血清尿酸的抑制程度并不平行。別嘌呤醇組和辣木葉低、 中、 高劑量組對模型小鼠肝臟 ADA 活性均有較強的抑制活性（P<0.05，P<0.01），且隨劑量增加有增強的趨勢。

3討論與小結

痛風伴隨尿酸過多及尿酸排泄減少，其水平升高是痛風的生化基礎。該研究發現辣木葉的中、高劑量組（2.0 和4.0 g/kg）具有一定的降尿酸活性，表明辣木葉具有抗痛風的功效。黃嘌呤氧化酶（XOD）是嘌呤核苷代謝途徑的限速酶，是調控尿酸生成的最終環節，在高尿酸血癥的發病中占主導地位，該研究表明辣木葉70%乙醇提取物低、中、高劑量組（1.0、2.0、4.0 g/kg）對高尿酸血癥小鼠肝臟XOD均有一定抑制作用，但其抑制XOD活性與降尿酸作用并不平行，推測其降尿酸作用除抑制XOD活性外還可能存在其他機制。

腎臟在尿酸排泄過程中起著重要作用，因此高尿酸癥常伴有腎功能損傷，血肌酐和尿素氮是檢驗腎功能的重要指標，可以反映腎小球濾過和腎小管重吸收功能的強弱。辣木葉提取物的低、中、高劑量組（1.0、2.0、4.0 g/kg）均可降低高尿酸血癥小鼠肌酐和尿素氮的水平（P<0.01，P<0.05），表明辣木葉提取物具有一定的腎臟保護功能，辣木在印度傳統醫學中有用于治療腎結石的記載，研究發現辣木根的水提物具有保護腎臟的功能，能夠降低結石模型組中試驗大鼠尿酸和血尿素氮的水平[15]，這與該研究結果吻合。

前期發現辣木葉中黃酮和黃酮醇類物質含量較高，有研究表明黃酮類化合物（蘆丁、槲皮素等）對XOD 活性具有抑制作用，其中槲皮素可能通過抑制肝臟中XOD 和ADA的活性來減少尿酸的生成，從而降低血尿酸[8]。目前關于辣木葉提取物對黃嘌呤氧化酶的抑制作用及其降低高尿酸血癥血尿酸水平的研究較少。辣木葉中化學成分豐富，種類繁多，除含有傳統中藥和天然產物中具有較好黃嘌呤氧化酶抑制活性的黃酮、黃酮醇類物質，還含有一系列具有抗菌消炎活性的硫代氨基甲酸酯類、異硫氰酸酯類、氰基類、吡咯生物堿類等含氮化合物[9-11]。因此，辣木葉中具體的抗痛風活性物質基礎及其作用機制值得進一步研究。

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