凝膠滲透色譜—氣相色譜法測定蔬菜中抑菌靈殘留

高小麗 曹淑瑞 陳宇 李賢良 郗存顯 鄭小玲 張雷 王國民

摘要[目的]建立凝膠滲透色譜（GPC）-氣相色譜法測定蔬菜中抑菌靈殘留量的方法。[方法]樣品用環(huán)己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）提取，GPC凈化，氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）檢測。[結果]抑菌靈在0.01～1.00 mg/L時線性關系良好（R2=0.999 3），方法檢測限（S/N=3）為0.32 μg/kg。在0.01、0.02、0.04 mg/kg添加水平下，加標回收率為74.7%～95.7%，相對標準偏差（n=6）為05%～3.5%。[結論]該方法適用于蔬菜中抑菌靈殘留量的測定。

關鍵詞凝膠滲透色譜-氣相色譜法；抑菌靈；蔬菜；殘留

中圖分類號TS207.5+3文獻標識碼A文章編號0517-6611（2017）17-0079-03

Abstract[Objective] A method for determination of dichlofluanid residue in vegetables by gel permeation chromatography and gas chromatopraphy was developed. [Method] Samples were extracted with cyclohexaneethyl acetate （1∶1， V/V）， and then detected by GCECD after being cleaned up with GPC. [Result] It turned out that dichlofluanid showed a good linearity over the range of 0.01-1.00 mg/L with correlation coefficient of 0.999 3. The limit of detection （LOD） was 0.32 μg/kg. The recoveries of the dichlofluanid were in the range of 74.7%-95.7% with the spiked levels of 0.01， 0.02 and 0.04 mg/kg， and the relative standard deviations （RSDs） were in the range of 05%-3.5%. [Conclusion] The method is suitable for detecting dichlofluanid residue in many kinds of vegetables.

Key wordsGel permeation chromatographygas chromatography；Dichlofluanid；Vegetable；Residue

基金項目重慶市青年科技人才培養(yǎng)計劃項目（cstc2014kjrc-qnrc00002）；國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局科技計劃項目（2016IK296）；重慶市應用開發(fā)重點項目（cstc201yykfB0165）。

作者簡介高小麗 （1979—），女，重慶人，講師，碩士，從事分析化學研究。*通訊作者，高級工程師，從事食品分析和納米材料研究。

收稿日期2017-04-12

抑菌靈（dichlofluanid，又名苯氟磺胺）是一種廣譜保護性殺菌劑，白色粉末，不溶于水，在甲醇中溶解度為15 g/L，二甲苯中溶解度為70 g/L，劑型為可濕性粉劑及粉劑，適用于防治多種蔬菜作物灰霉病、白粉病、霜霉病及真菌性等病害，用作噴霧時，具有殺滅紅蜘蛛的作用。該試劑具有一定毒性，雄大鼠口服半數(shù)致死量（LD）為2 500 mg/kg，人體日容許攝入量為0.3 mg/kg，應在蔬菜收獲前7～14 d停止用藥。目前，許多發(fā)達國家已對抑菌靈進行了嚴格限制，例如日本對谷物中抑菌靈的殘留限量為0.1 mg/kg[1]。截至目前，我國尚未對抑菌靈殘留量進行限量規(guī)定。抑菌靈殘留量的檢測多采用氣相色譜法（GC）[2-3]、氣相色譜質(zhì)譜法（GC-MS）[4-9]，前處理方法主要采用固相萃取[10]。該研究通過凝膠滲透色譜（GPC）凈化，能夠有效除去色素[11-13]，且采用靈敏度高的氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）[14-15]進行測定，建立了一種簡便、準確度高、覆蓋基質(zhì)范圍廣的抑菌靈殘留檢測方法。

1材料與方法

1.1材料

Agilent 7890A氣相色譜儀，配有電子捕獲檢測器，美國Agilent公司；凝膠滲透色譜儀，美國Lab Tech公司；凝膠凈化柱（20 mm×300 mm），填料為S-X3；3-30K臺式高速冷凍離心機，德國 Sigma公司；4011 Digital旋轉蒸發(fā)儀，德國Heidolph公司；移液器：0.1、0.2、1.0、5.0、10.0 mL，德國Eppendorf公司；BS224S型天平，德國Sartorius公司；渦旋振蕩混合器，江蘇康健醫(yī)療用品有限公司；勻質(zhì)儀，荷蘭Philips公司。

抑菌靈標準品（純度為99.6%），美國Sigma公司；環(huán)己烷、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、乙腈（色譜純），美國Tedia公司；氯化鈉、無水硫酸鎂（分析純）。

1.2方法

1.2.1標準溶液的配制。

準確稱取適量的抑菌靈標準物質(zhì)，正己烷溶解，配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的標準儲備溶液，正己烷逐級稀釋成0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mg/L的標準工作溶液。

1.2.2色譜條件。

色譜柱：DB-1701石英毛細管柱（30.00 m×0.25 mm×0.25 μm）；載氣為高純N2；柱流速1.2 mL/min；進樣口溫度250 ℃；進樣方式為不分流進樣，恒流；柱溫程序：初始溫度150 ℃（保持1 min），以30 ℃/min升至280 ℃（保持20 min）；進樣量為2.0 μL；檢測器溫度300 ℃。

1.2.3樣品前處理。

稱取10.0 g蔬菜勻漿于50 mL離心管中，加20 mL的環(huán)己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）溶液，水平振蕩10 min，加3.5 g氯化鈉和3.5 g無水硫酸鎂，渦旋混勻，5 000 r/min離心3 min，取10 mL有機相，過0.4 μm濾膜，取5.0 mL過GPC柱凈化，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）為淋洗液，淋洗速度為5.0 mL/min，棄去45 mL流出液后，收集55 mL淋洗液。轉入旋轉蒸發(fā)瓶，在低于40 ℃的水浴中濃縮至近干，用正己烷溶解殘余物，并定容至2.0 mL，渦旋混勻。經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，供GC-ECD測定。

2結果與分析

2.1提取溶劑的選擇

分別采用乙腈、正己烷、正己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）、丙酮-乙酸乙酯（1∶1，V/V）、環(huán)己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）提取樣品中的抑菌靈，進行回收率試驗，以選取合適的提取溶劑。結果如圖1所示，乙腈和正己烷的提取回收率相對偏低，丙酮-乙酸乙酯（1∶1，V/V）以及環(huán)己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）的提取回收率相對于正己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）較高，考慮到丙酮提取雜質(zhì)較多，且采用丙酮-乙酸乙酯（1∶1，V/V）提取需先將提取液濃縮，用環(huán)己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）定容之后，再經(jīng)GPC凈化，故該研究采用環(huán)己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）作為提取溶劑。

2.2 GPC收集時間段的選擇

取1.00 mg/L的標準工作溶液0.1 mL，用環(huán)己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）定容至10.0 mL，渦旋混勻，取 5.0 mL過GPC，對0～7、7～9、9～19、19～23 min的淋洗液進行收集，將各個時間段的淋洗液在低于40 ℃的水浴中旋轉濃縮至近干，用正己烷定容至2.0 mL，渦旋混勻。經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，供GC-ECD測定。由圖2可知，應對9～19 min的淋洗液進行收集。

2.3不同凈化方法的選擇

結合抑菌靈和被測樣品基質(zhì)的性質(zhì)，以白菜為基質(zhì)，考察了基質(zhì)分散固相萃取、氨基柱固相萃取以及GPC 3種凈化方式。雖然固相萃取小柱能夠凈化基質(zhì)中的雜質(zhì)，但其回收率過低，在基質(zhì)分散固相萃取凈化中對石墨化碳黑（GCB）、乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）進行了考察，使用GCB凈化時才能夠有效去除色素，但是回收率僅能達到64.2%；石墨化碳氨基復合柱萃取的回收率僅為40.6%，GPC不僅能夠凈化基質(zhì)的雜質(zhì)，而且其回收率（875%）能夠滿足要求。

2.4線性范圍及檢測限

對0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、050、1.00 mg/L系列質(zhì)量濃度的抑菌靈標準溶液進行測定，以峰面積（Y）對質(zhì)量濃度（X，mg/L）繪制標準曲線，得到線性方程Y=1 272.1X-15 145，R2=0.999 3，表明在0.01～1.00 mg/L有良好的線性關系。以S/N=3計算，方法檢測限為0.32 μg/kg。

2.5準確度和精密度

方法的準確度以回收率表示，精密度用相對標準偏差表示。分別對甘藍（葉菜類）、西紅柿（茄果類）、白蘿卜（根莖類）、黃瓜（瓜類）、豆芽（豆類）等以001、0.02、0.04 mg/kg添加濃度水平分別進行添加回收，每個水平重復6次，外標法定量，試驗結果見表1。

3 結論

該試驗建立了凝膠滲透色譜-氣相色譜法測定蔬菜中抑菌靈殘留量的方法，并優(yōu)化了試驗條件，確定了提取溶劑、淋洗液的收集時間段等參數(shù)。該方法具有簡單、準確度高、重現(xiàn)性好、基質(zhì)適用范圍廣等優(yōu)點。目前我國還未對蔬菜中的抑菌靈進行限量規(guī)定，該方法為蔬菜中抑菌靈的檢測提供了技術支持，特別適合于在食品檢測實驗室推廣應用。

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