CD4+CD29+T細(xì)胞在潰瘍性結(jié)腸炎患者血清及結(jié)腸黏膜組織中的表達(dá)變化

封艷玲(南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安市第一人民醫(yī)院，江蘇淮安223300)

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CD4+CD29+T細(xì)胞在潰瘍性結(jié)腸炎患者血清及結(jié)腸黏膜組織中的表達(dá)變化

封艷玲
(南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安市第一人民醫(yī)院，江蘇淮安223300)

目的 觀察CD4+CD29+T細(xì)胞血管細(xì)胞黏附分子1(VCAM-1)及髓過(guò)氧化物酶(MPO)在潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者血清及結(jié)腸黏膜組織中的表達(dá)變化。方法 選取UC患者60例(UC組)，其中活動(dòng)期及緩解期各30例，設(shè)立同期查體健康者30例為健康對(duì)照組，收集血清，采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定定周血中CD4+CD29+T細(xì)胞百分率，腸鏡下取UC組及健康對(duì)照組結(jié)腸黏膜組織，采用免疫熒光法測(cè)定結(jié)腸中CD4+CD29+T細(xì)胞的表達(dá)量，用免疫組化法測(cè)定結(jié)腸中髓過(guò)氧化物酶(MPO)及血管細(xì)胞黏附分子1(VCAM-1)表達(dá)，用皮爾森相關(guān)法分析CD4+CD29+T細(xì)胞與MPO的相關(guān)性。結(jié)果 UC組CD4+CD29+T細(xì)胞、VCAM-1及MPO在活動(dòng)期及緩解期UC患者血清及結(jié)腸黏膜組織中的表達(dá)均較健康對(duì)照組升高，且活動(dòng)期高于緩解期，P均<0.05；CD4+CD29+T細(xì)胞在健康對(duì)照組血清中有表達(dá)而在結(jié)腸中未檢測(cè)到表達(dá)；外周血CD4+CD29+T細(xì)胞與MPO呈正相關(guān)(r=0.543,P<0.05)。結(jié)論 CD4+CD29+T細(xì)胞在UC患者血清及結(jié)腸黏膜組織中均呈高表達(dá)，且與UC的病情程度密切相關(guān)。

潰瘍性結(jié)腸炎；CD4+CD29+T細(xì)胞；血管細(xì)胞黏附分子1；髓過(guò)氧化物酶

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一組病因未明的復(fù)發(fā)與緩解交替的腸道慢性非特異性炎癥。UC的發(fā)病涉及免疫反應(yīng)的整個(gè)過(guò)程，是多個(gè)免疫因素共同作用的結(jié)果。目前多數(shù)研究認(rèn)為腸道的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞不能抑制效應(yīng)細(xì)胞對(duì)腸道菌群及食物抗原的過(guò)度反應(yīng)是UC發(fā)病的重要免疫學(xué)機(jī)制[1]。CD4+T細(xì)胞是UC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起作用的主要效應(yīng)細(xì)胞，CD4+CD29+T細(xì)胞是從CD4分化的記憶性效應(yīng)細(xì)胞。CD29主要表達(dá)于先前活化的T細(xì)胞上，在對(duì)抗原的再次反應(yīng)中起重要作用，在多發(fā)性硬化、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病中均有重要作用[2,3]。UC屬于自身免疫性疾病的一種，CD4+CD29+T細(xì)胞在UC發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用，而CD4+CD29+T細(xì)胞在UC中的表達(dá)及其作用機(jī)制研究甚少。故本研究主要通過(guò)檢測(cè)CD4+CD29+T細(xì)胞及其配體血管細(xì)胞黏附分子1(VCAM-1)在UC患者血清及結(jié)腸黏膜組織中的表達(dá)，分析其與反映UC疾病嚴(yán)重程度的指標(biāo)髓過(guò)氧化物酶(MPO)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年6月～2014年1月本院消化內(nèi)科門(mén)診、住院部及消化內(nèi)鏡中心的UC患者60例(UC組)，男26例、女34例，年齡20～60歲。均符合2000年成都會(huì)議制定的UC診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除合并風(fēng)濕免疫類疾病、感染及腫瘤，并據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)將患者分為活動(dòng)期30例，緩解期30例。健康對(duì)照組30例，男16例、女14例，年齡20～50歲，均來(lái)自我院查體健康者。

1.2 外周血及結(jié)腸黏膜CD4+CD29+T細(xì)胞檢測(cè) 每例入選者各抽靜脈血4 mL，分離出血清，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)UC活動(dòng)期、緩解期及健康對(duì)照組入選者CD4+CD29+T細(xì)胞百分比。經(jīng)腸鏡下于病變處取結(jié)腸黏膜1塊，用4%多聚甲醛固定，經(jīng)脫水-包埋-切片等步驟制作成石蠟切片，用免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)各組結(jié)腸黏膜組織中CD4+CD29+T細(xì)胞表達(dá)。免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果半定量:隨機(jī)選取3個(gè)視野，用Image pro plus 6.0軟件計(jì)算出每個(gè)視野的平均光密度(平均光密度=陽(yáng)性表達(dá)的熒光強(qiáng)度/總面積)，取3個(gè)視野的平均值作為CD4+CD29+T細(xì)胞的表達(dá)量。

1.3 結(jié)腸黏膜組織中MPO及VCAM-1表達(dá)檢測(cè) 將結(jié)腸黏膜制作成石蠟切片后用免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸黏膜組織中MPO及VCAM-1表達(dá)。免疫組化結(jié)果半定量判定：隨機(jī)選取3個(gè)視野，用Image pro plus 6.0軟件計(jì)算出每個(gè)視野的平均光密度(陽(yáng)性表達(dá)的熒光強(qiáng)度/總面積)，取3個(gè)視野的平均值作為該抗原的表達(dá)量。

2 結(jié)果

兩組血清中CD4+CD29+T細(xì)胞百分比表達(dá)比較見(jiàn)表1;UC組患者血清CD4+CD29+T細(xì)胞百分比較健康對(duì)照組升高(P均<0.05),且UC組活動(dòng)期高于緩解期(P均<0.01)。CD4+CD29+T細(xì)胞在UC組活動(dòng)期及緩解期患者的結(jié)腸黏膜組織中表達(dá)量分別為0.370±0.04、0.140±0.03,活動(dòng)期高于緩解期(P<0.05)，在健康對(duì)照組的結(jié)腸黏膜組織中未見(jiàn)明顯表達(dá)。UC組血清CD4+CD29+T細(xì)胞百分比與結(jié)腸黏膜組織中MPO水平呈正相關(guān)(r=0.543,P<0.05)。

表1 三組血清CD4+CD29+T細(xì)胞百分比及結(jié)腸黏膜組織中MPO、VCAM-1表達(dá)比較

注：與健康對(duì)照組比較，*P<0.05；與同組緩解期比較，△P<0.05，○P<0.01。

3 討論

UC的持續(xù)性炎癥刺激及其易復(fù)發(fā)性給患者帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。目前UC的具體發(fā)病機(jī)制尚不明確，對(duì)效應(yīng)細(xì)胞的免疫耐受不足被認(rèn)為是UC的主要免疫機(jī)制，研究者認(rèn)為CD4+T細(xì)胞在UC發(fā)生發(fā)展中起主要作用[4]。CD4+CD29+T細(xì)胞屬于記憶性效應(yīng)細(xì)胞，在UC中研究甚少，在所閱文獻(xiàn)中，僅有江學(xué)良等[5]學(xué)者對(duì)UC患者及UC大鼠的外周血進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)UC患者及大鼠外周血CD4+CD29+T細(xì)胞明顯高于對(duì)照組，認(rèn)為其可作為UC免疫監(jiān)測(cè)指標(biāo)，但未做深入研究。

本研究發(fā)現(xiàn)UC患者血清及結(jié)腸黏膜組織中CD4+CD29+T細(xì)胞百分比升高，且活動(dòng)期明顯高于緩解期。MPO存在于中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒中，其在腸道組織中的表達(dá)與UC炎癥的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，被作為UC患者病情嚴(yán)重程度的監(jiān)測(cè)指標(biāo)[6]。本研究結(jié)果提示血清CD4+CD29+T細(xì)胞百分比與MPO呈正相關(guān)，結(jié)合既往的研究發(fā)現(xiàn)CD29可調(diào)節(jié)UC小鼠中性粒細(xì)胞的聚集及炎癥活動(dòng)性[7],我們認(rèn)為CD4+CD29+T細(xì)胞與UC的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，可能通過(guò)調(diào)節(jié)MPO水平及活動(dòng)性而在UC中發(fā)揮促進(jìn)作用。

白細(xì)胞尤其是效應(yīng)性及記憶性T細(xì)胞向結(jié)腸的黏附聚集在UC炎癥的發(fā)生及持續(xù)過(guò)程中起重要作用，且研究認(rèn)為與其他CD29-類T細(xì)胞相比，CD4+CD29+T細(xì)胞有更強(qiáng)的血管黏附能力，黏附分子的表達(dá)可能導(dǎo)致CD4+CD29+T細(xì)胞向炎癥部位聚集[8]。

VCAM-1是VLA-4/CD29的配體，介導(dǎo)淋巴細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞間的穩(wěn)定黏附。VCAM-1在正常情況下表達(dá)很少，在體內(nèi)存在炎癥時(shí)表達(dá)會(huì)有所升高。既往文獻(xiàn)研究亦證實(shí)VCAM-1在UC白細(xì)胞聚集中起重要作用，與UC的炎癥程度呈正相關(guān),對(duì)UC小鼠模型進(jìn)行VCAM-1的抗體治療可改善UC的疾病活動(dòng)指數(shù)及MPO活性等指標(biāo)[9]。本研究結(jié)果表明VCAM-1在健康對(duì)照組結(jié)腸黏膜組織中無(wú)明顯表達(dá)，而在UC組表達(dá)明顯升高，活動(dòng)期高于緩解期。同時(shí)，對(duì)各組結(jié)腸黏膜組織中CD4+CD29+T細(xì)胞表達(dá)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CD4+CD29+T細(xì)胞與VCAM-1表達(dá)呈一致性，均在健康對(duì)照組中無(wú)明顯表達(dá)，而在UC組明顯表達(dá)，結(jié)合外周血中各組CD4+CD29+T細(xì)胞水平，我們推測(cè)VCAM-1在CD4+CD29+T細(xì)胞向結(jié)腸炎癥部位的歸巢中起了黏附聚集作用。我們認(rèn)為，VCAM-1通過(guò)與CD29的黏附作用，將CD4+CD29+T細(xì)胞黏附聚集到結(jié)腸炎癥部位，發(fā)揮對(duì)MPO的調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，CD4+CD29+T細(xì)胞在UC患者血清及結(jié)腸黏膜組織中均呈高表達(dá)，且與UC的病情程度密切相關(guān)。

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