萬古霉素骨水泥緩釋藥物觀察及檢測方法建立

李晨光，趙 虹，季 紅

(1.延邊大學臨床醫學2013級，吉林 延吉130000；2.吉林大學中日聯誼醫院，吉林 長春130033)

*通訊作者

萬古霉素骨水泥緩釋藥物觀察及檢測方法建立

李晨光1，趙 虹2*，季 紅2

(1.延邊大學臨床醫學2013級，吉林 延吉130000；2.吉林大學中日聯誼醫院，吉林 長春130033)

萬古霉素(vancomycin)為糖肽類抗生素，臨床上用于嚴重革蘭氏陽性菌、耐甲氧西林的金葡菌(MRSA)、耐甲氧西林的表皮葡萄球菌(MRSE)所致的感染。1970年，Buchholz等發現抗生素摻入骨水泥中可以形成抗生素緩釋系統，并通過濃度梯度向周圍長時間持續釋放。萬古霉素骨水泥在臨床人工關節置換等術式的局部抗感染 及其應用的實驗研究中倍受關注，本文建立了高效液相色譜法檢測骨水泥緩釋液中的萬古霉素濃度，并對緩釋濃度梯度變化進行觀察。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(Waters，515泵，UV-7500紫外檢測器，655A-52柱溫箱，7725手動進樣器，Upper色譜工作站。)Shimadzu AEL-40SM精密分析天平，LG16-W(京立)離心機。萬古霉素標準品(中國藥品生物制品檢定所)，甲醇、乙腈(色譜純，天津四友)，正己烷、磷酸二氫鉀、氯化鈉、碳酸氫鉀、氯化鉀、磷酸氫二鉀、氯化鎂、鹽酸、氯化鈣、硫酸鈉、Tris(分析純，天津化學試劑)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×250 mm,5 μm),Agilent ZORBAX XDB保護柱(4×4 mm,5 μm)；流動相 甲醇：乙腈：0.05 M KH2PO4(8∶1∶91)，流速1.0 ml/min，檢測波長236 nm，進樣量20 μl。

1.2.2 溶液的制備 模擬體液的配制：NaCl 7.996 g,NaHCO30.350 g,KCl 0.224 g,K2HPO4.3H2O 0.228 g,MgCl2。6H2O 0.315 g,1 mol/L HCl 40 ml(pH7.4),CaCl20.278 g,Na2SO40.071g,(CH2OH)3CNH2(Tris pH7.4) 6.057 g 定容于1 000 ml蒸餾水中。標準儲備液(1.1 g/L)：精密稱取11 mg萬古霉素標準品，定容于10 ml容量瓶中，4℃保存。100 μg/ml標準溶液配制：取0.1 ml(1.1 g/L)標準儲備液加入1 ml模擬體液中，混勻。10 μg/ml標準液配制：取0.1 ml(100 μg/ml)標準液加入0.9 ml模擬體液中，混勻。流動相配制：精密稱取磷酸二氫鉀(KH2PO4)3.4 g定容至500 ml蒸餾水中，用磷酸調PH為3.2，配制成0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液。

1.2.3 樣品采集和處理 樣品采集：取潔凈的玻璃容器加入足量的模擬體液，將萬古霉素骨水泥樣品浸泡其中，密封容器開口，置于無菌環境中，每隔一定時間搖勻，按設定時間點抽取浸泡液，每次抽取0.5 ml樣品，4℃保存。樣品處理：樣品10000轉離心5分鐘，取上清上樣。

1.2.4 標準曲線 取標準儲備液適量，加模擬體液，使濃度分別為0.0,0.1,0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 μg/ml，按樣品處理和測定方法測定。以萬古霉素峰高為縱坐標，濃度為橫坐標做標準曲線，根據標準曲線求出萬古霉素濃度。

2 結果

2.1 色譜測定 取空白模擬體液、萬古霉素骨水泥在模擬體液中浸出液樣本、萬古霉素試驗液，在上述實驗條件下，經處理，測得HPLC色譜圖。結果見圖。

萬古霉素HPLC色譜圖

2.2 方法的線性范圍 配制濃度為0-10 μg/ml的萬古霉素標準液，做線性范圍測定。r=0.992，萬古霉素在0-10 μg/ml濃度范圍內有良好線性關系。

2.3 精確性試驗 選擇高、中、低3個濃度，分別進行批內和批間測定，RSD%均小于10%。

2.4 準確性試驗 精密吸取模擬體液，分別加入定量的萬古霉素標準品，依法測定，回收率96.7%。

2.5 干擾試驗 標準曲線以峰高為計算系數，萬古霉素骨水泥在模擬體液中的浸出液雜峰不干擾萬古霉素峰。

2.6 浸出液濃度測定及觀察 萬古霉素骨水泥浸泡于模擬體液中，定時振搖并取出樣品，觀察期35天，取得樣品201例，對上述樣品檢測，最高濃度7.50 μg/ml，最低濃度0.40 μg/ml，濃度多分布于1.5-5 μg/ml。

3 討論

萬古霉素骨水泥在模擬體液的浸出環境中，模擬體液的多離子、骨水泥本身的合成材料慢性溶解、樣品稀釋度高是影響萬古霉素檢測的主要因素，本文用正己烷試圖提取去掉干擾，發現干擾物非脂溶性物質，應用沉淀劑和高速離心比較也沒有較大改善，調整流動相甲醇或乙腈的量，萬古霉素目標峰明顯升高。隨著觀察取樣時間的延長，藥物不斷溶出，樣品出現變色及絮狀物沉淀，經高速離心樣品仍有較好的分離效果，第30天后，樣品變色較多，干擾物質雜峰增多。對骨水泥包裹釋放藥效的觀察不能完全依照藥物濃度，同時應綜合考慮滲出液體物理性狀的改變。

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1007-4287(2017)07-1259-02

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