錐型束CT評價茶多酚對放射性頜骨骨髓炎術后竇道愈合的療效

羅敬中，黃柏隆，劉 奕，徐秋榮

龍門縣人民醫院1口腔科,2耳鼻喉科，廣東 惠州 516800;3河源市人民醫院口腔科，廣東 河源 517000

錐型束CT評價茶多酚對放射性頜骨骨髓炎術后竇道愈合的療效

羅敬中1，黃柏隆2，劉 奕3，徐秋榮2

龍門縣人民醫院1口腔科,2耳鼻喉科，廣東 惠州 516800;3河源市人民醫院口腔科，廣東 河源 517000

目的通過錐型束CT及竇道造影評價茶多酚對放射性頜骨骨髓炎術后竇道愈合的效果。方法收集放射性頜骨骨髓炎術后伴有口腔黏膜竇道的患者30例，隨機分2組，每組各15例。竇道分別每日予復方茶多酚含漱液（實驗組）或生理鹽水（對照組）局部沖洗及含漱，每3周使用錐型束CT行竇道造影成像，計算竇道體積變化。MTT法檢測茶多酚對人永生化口腔黏膜上皮細胞系的增殖影響。結果治療12周后，實驗組的竇道縮小情況優于對照組（5.40±4.15 cm3vs8.12±5.47 cm3），差異具有統計學意義（F=4.384，P=0.043）。CCK-8法檢測發現，經120 mg/L茶多酚的處理后，人永生化口腔黏膜上皮細胞系的增殖速率高于無處理的對照組（0.162±0.030vs0.075±0.017），具有統計學意義（F=5.783，P=0.017）。結論茶多酚可能通過促進口腔黏膜上皮增殖，加快放射性頜骨骨髓炎術后竇道的愈合。

茶多酚；放射性頜骨骨髓炎；竇道；上皮細胞；增殖

放射性頜骨骨髓炎，是頭頸部惡性腫瘤放療后常見的口腔并發癥之一[1]。頜骨在放射治療后，處于低氧、低血管結構、低細胞活性的“三低”狀態，容易發生無菌性壞死，并繼發細菌感染，形成頜骨骨髓炎[2]。研究發現，茶多酚對放射性疾病有一定的防護作用[3]，同時具有抗氧化、抗感染等藥理作用[4-5]。茶多酚的主要成分是兒茶素（黃烷-3-醇衍生物）[6]，對部分體細胞有促增殖作用，何權敏等[7]發現茶多酚可促進牙周膜成纖維細胞的體外增殖，但目前尚無其對口腔黏膜上皮作用的相關研究。由此設想，茶多酚是否可以通過促進口腔黏膜上皮細胞的增殖，加快放射性頜骨骨髓炎術后黏膜竇道的愈合。

本研究分別以放射性頜骨骨髓炎術后竇道患者及人永生化口腔黏膜上皮細胞系（NOK）為對象，通過比較竇道的體積變化及NOK細胞的增殖能力，探討茶多酚促進放射性頜骨骨髓炎術后竇道愈合的效果，為放射性頜骨骨髓炎的輔助治療提供實驗依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集2013年1月～2016年6月于惠州市龍門縣醫院收治的放射性頜骨骨髓炎患者30例，采用1：1病例對照研究方法，通過隨機分配隱匿的方法（按順序編碼、不透光、密封的信封）分為實驗組和對照組。該研究得到醫院倫理委員會批準，并經所有患者簽署知情同意書的前提下進行。

1.1.1 納入標準 （1）頭頸部腫瘤放療史；（2）根據臨床及影像表現，診斷為放射性頜骨骨髓炎，診斷標準參考Harris[8]提出的“射線照射的頜骨失去活性，暴露于原本覆蓋于其上的皮膚或黏膜下方，持續超過3個月且沒有愈合，局部無腫瘤形成”；（3）接受常規手術治療（包括病灶刮除、頜骨切除等術式）后，切口延期愈合并形成開口于口腔的竇道，且無口內外相通的瘺管形成。

1.1.2 排除標準 （1）除外其他疾病造成的骨破壞，如腫瘤、雙膦酸鹽性頜骨壞死[9]等；（2）術后經影像檢查正式殘余骨髓炎病灶或死骨；（3）懷孕或哺乳期婦女；（4）嚴重心血管疾病、肝腎功能不全者。

1.1.3 剔除標準 （1）對本研究中使用的藥物過敏或有嚴重不良反應而不適應此臨床實驗者；（2）不遵醫囑或治療中因各種原因未完成療程或治療不全者；（3）治療期間發生嚴重疾病，不能繼續進行治療者；（4）療程未到1/2者，不計入統計結果。根據上述標準，共納入30例病例，單盲隨機分為實驗組及對照組，每組15例。其中對照組15例患者中有1例治療后9周于外院作進一步診治，退出本研究；實驗組15患者中有2例因個人原因中途中斷治療。上述3例治療時間均超過計劃的1/2，故計入統計結果。對兩組患者的基本資料進行均衡性比較，年齡、性別、放療劑量、發病部位、手術方式等項目的差異不具有統計學意義（表1）。提示實驗組與對照組的病例在上述項目的分布相對一致，無明顯組間差異。

1.2 治療方法

實驗組患者隔日門診復診，予茶多酚含漱液沖洗未愈合的竇道，并囑每日含漱茶多酚含漱液2次，3 min/次。對照組使用生理鹽水沖洗病灶及含漱。每3周對竇口體積進行測量。測量方法如下：向竇道注入泛影葡胺，至造影劑充滿竇道，并予醫用水凝膠敷料封閉竇口，于錐型束CT掃描成像。錐型束CT選用Pax-Uni3D（Vatech, Korea），掃描條件為110 kV、2.0 mA，曝光時間為3.6 s，由同一位經驗豐富的影像科醫生嚴格按照生產廠家的使用說明進行拍攝。參考何錦泉等[10]的方法，成像后使用Ez3D plus軟件包（Vatech,Korea）按最大密度投影算法三維重建竇道，DICOM數據導入Mimics 14.1軟件包，使用三維體積計算功能計算竇道體積。

1.3 茶多酚對口腔黏膜上皮細胞的生長影響

1.3.1 人口腔黏膜上皮細胞培養 NOK細胞系購自上海眾華生物科技有限公司，NOK細胞在37 ℃、5%CO2環境下培養于10% FBS的RPMI 1640完全培養基。

1.3.2 主要試劑及儀器 茶多酚（純度98%）購自江西綠康天然產物有限公司；CCK-8購自日本同仁化學公司；RPMI 1640培養基及胎牛血清購自美國Gibco；M200全自動酶標儀購自瑞士Tecan。

1.3.3 CCK-8法檢測細胞相對生長率 取對數生長期的NOK細胞接種于96孔板，4×104/孔，培養至細胞鋪滿孔底后吸棄原培養液，實驗組加入含茶多酚（120 mg/L）完全培養液，對照組加入不含茶多酚的完全培養液，每天取8孔加入CCK-8溶液10 μL，孵育4 h，測量450 nm處各孔吸光度(OD值)。繪制1～5 d的細胞生長曲線。

1.4 統計學分析

運用SPSS23.0軟件包對實驗數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差表示，用Mann-Whitney非參數秩和檢驗比較兩組病例基本資料的一致性，竇道體積的變化及NOK細胞生長曲線采用重復測量數據的方差分析。所有統計假設檢驗為雙側檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

表1 患者基本資料

2 結果

2.1 竇道體積變化

基于錐型束CT的竇道造影可以重建出輪廓邊界清晰的圖像，同時可精確計算竇道體積（圖1）。經過局部沖洗換藥及口腔護理后，實驗組及對照組患者的竇道體積均具有不同程度的縮小，呈現下降趨勢（圖2）。治療后12周，實驗組竇道體積小于對照組（5.40±4.15 cm3vs8.12±5.47 cm3），實驗組的療效顯著，組間差異有統計學意義（F=4.063，P=0.033）。

2.2 NOK細胞生長曲線

經茶多酚培養后的NOK細胞（實驗組）與普通完全培養基條件下培養的NOK細胞（對照組）進行比較，培養5 d后，實驗組的細胞吸光度高于對照組（0.162±0.030vs0.075±0.017），即實驗組細胞增殖速率較高（圖3）。兩組的差異具有統計學意義（F=5.783，P=0.017），提示茶多酚對NOK細胞有促生長作用。

圖1 竇道造影三維重建圖像

圖2 竇道體積變化曲線

圖3 NOK細胞生長曲線

3 討論

放射性頜骨骨髓炎主要通過外科手術徹底去除死骨，并去除病變的軟組織，達到根治的目的[11]。但放射區域組織的纖維萎縮或纖維化，致使其增殖、抗感染及代謝能力低于正常組織，因而患者術后可能因出現創口愈合不良而繼發形成竇道[12]。研究竇道的定位及體積測量，對于后續治療有重要的參考意義。口腔頜面部的竇道定位及體積測量，可通過竇道造影，即向竇口注入造影劑（如碘胺醇、碘化油、泛影葡胺等）后進行X線成像而實現，常用于鰓裂囊腫、甲狀舌管囊腫的術前檢查[13-14]。本研究參考了上述方法，選用水溶性離子型單體碘造影劑泛影葡胺。與油性造影劑相比，水溶性的泛影葡胺流動性較強，造影后通過常規竇道沖洗即可去除。此外，有別于開口在皮膚且竇口狹小的竇道造影，納入本研究的病例，竇口均開口于口腔內且竇口寬大，造影劑容易外溢，因此選用了貼合性及生物相容性良好的藻酸鹽水凝膠敷料[15]封閉竇口。

竇道的治療可分為手術治療及保守治療，伴有較大組織缺損的竇道一般采用轉移組織瓣手術修復[16]。而體積較小的瘺道則以局部沖洗換藥為主，通過保持局部衛生，減少繼發感染，促進上皮及肉芽生長覆蓋，最終實現竇道的愈合。本研究發現使用茶多酚含漱液進行竇道沖洗換藥，輔助治療的效果理想，竇道的體積較對照組明顯縮小，有利于加快創口愈合。希望通過細胞體外培養，初步了解茶多酚促進竇道愈合的作用機理。體外培養條件下，茶多酚對于上皮來源的細胞增殖作用不一。茶多酚對腫瘤細胞的誘導凋亡作用[17-18]，而對正常的上皮細胞則有促增殖作用。Hsu等[18]發現在體外培養條件下，茶多酚可促進角化上皮細胞的增殖及分化。本研究結果亦發現人永生化口腔黏膜的上皮細胞在120 mg/L的茶多酚誘導下，具有較強的增殖能力。提示茶多酚可能通過促進上皮細胞增殖，加快竇道愈合的速度。

此外，暴露于口腔的竇道常伴發細菌感染，也可能影響創口的愈合。放射性頜骨骨髓炎中常見的致病菌為金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌[19]。錢麗紅等[20]驗證了茶多酚對金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的抑菌作用。提示口腔局部使用茶多酚含漱液，可能對竇道中的金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌有抑制作用，減少繼發感染，但這一猜想仍需要進一步的實驗驗證。

綜上所述，本研究通過基于錐型束CT的竇道造影技術對放射性頜骨骨髓炎患者的術后竇道進行了定位及體積測量，并發現茶多酚可能通過促進口腔黏膜上皮細胞增殖，加快竇道愈合。

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Effect of tea polyphenols on sinus healing in post-operative radioactive osteomyelitis of the jaws evaluated by cone beam CT

LUO JingZhong1, HUANG BaiLong2, LIU Yi3, XU Qiurong21Department of Stomatolog;2Department of ENT, People's Hospital of Longmen County, Huizhou 516800, China;3Department of Stomatology, People's Hospital of Heyuan, Heyuan 517000, China

ObjectiveTo evaluate the effect of tea polyphenols on sinus healing in post-operative radioactive osteomyelitis of jaws (ORN) by cone beam CT and contrast fistulography.MethodsThirty ORN cases with post-operative oral mucosa sinus were divided into 2 groups randomly. In experimental group, sinus was rinsed and gargled with tea polyphenols solution in daily. In control group, sinus was treated with normal saline. Sinus radiography was taken by cone beam CT every 3 weeks with calculation of sinus volume in 2 groups. Effect of tea polyphenols on proliferation of human immortalized oral mucosal epithelial cell line was detected by MTT.ResultsThe sinus volume in experimental group was smaller than that in control group after 12 weeks of treatment (P＜0.05). With treatment of 120 mg/L tea polyphenols, growth rate of NOK in experimental group was higher than that of control group (P＜0.05).ConclusionTea polyphenols can accelerate the healing of post-operative sinus in ORN through stimulating the proliferation of epithelium cell.

tea polyphenols; radioactive osteomyelitis of jaws; sinus; epithelium cells; proliferation

2017-01-08

惠州市科技計劃（2016Y260）

羅敬中，主治醫師，E-mail：619367565@qq.com