食管鱗狀細胞癌中MTDH和c-myc的表達及意義

楊宣琴，趙園園，杜海燕，徐恩偉

食管鱗狀細胞癌中MTDH和c-myc的表達及意義

楊宣琴，趙園園，杜海燕，徐恩偉

目的 探討異黏蛋白(metadherin, MTDH)和c-myc基因在食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)中的表達及其與臨床病理特征的關系。方法 采用免疫組化法檢測78例ESCC、20例高級別上皮內瘤變和30例正常食管黏膜組織中MTDH和c-myc蛋白的表達。結果 MTDH和c-myc在ESCC組和高級別上皮內瘤變組中的陽性率高于正常食管黏膜組(P<0.01)，MTDH在有淋巴結轉移、低分化的ESCC中高表達(P<0.05)。c-myc在有淋巴結轉移、低分化、浸潤深的ESCC中高表達(P<0.05)，MTDH和c-myc表達與患者年齡、性別均無明顯相關性(P>0.05)。結論 MTDH和c-myc與食管癌前病變的發生、發展相關，MTDH和c-myc的協同作用共同參與ESCC的發展、浸潤和轉移。

食管腫瘤；鱗狀細胞癌；上皮內瘤變；異黏蛋白；c-myc蛋白

食管癌是消化系統常見的惡性腫瘤，病死率較高。涉及多因素、多階段、多基因變異積累及相互作用的復雜過程，在分子水平上涉及眾多原癌基因、抑癌基因以及蛋白的改變。異黏蛋白(metadherin, MTDH)又名AEG-1、LYRIC或3D3，是近年來發現的癌基因。其在多種人類腫瘤組織中高表達，且被認為與腫瘤的侵襲轉移及預后不良有關[1]。原癌基因c-myc可使細胞無限增殖，并能促進細胞的分裂，與多種腫瘤的發生有關[2]。本文采用免疫組化法檢測78例食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)、20例癌旁高級別上皮內瘤變及30例正常食管黏膜組織中MTDH和c-myc蛋白的表達，分析兩者在食管癌發生、發展中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選自山西省腫瘤醫院2012～2014年收治的78例未經化放療、診斷明確的ESCC手術切除標本，其中男性51例，女性27例；年齡40～77歲，平均58歲。≥60歲35例，<60歲43例；高分化13例，中分化45例，低分化20例；有淋巴結轉移者46例，無淋巴結轉移者32例。同時選擇同組病例癌旁20例高級別上皮內瘤變和30例正常食管黏膜組織作為對照。

1.2 方法 免疫組化檢測采用EnVision法。MTDH試劑盒購自廣州深達，c-myc試劑盒購自北京中杉金橋公司。取自石蠟包埋的ESCC組織，3 μm厚連續切片，65 ℃烤箱，15 min，具體操作步驟按試劑盒說明書進行。脫水封固，鏡下觀察。

1.3 結果判定 MTDH以細胞膜及細胞質出現棕黃色顆粒為陽性，c-myc以細胞核出現棕黃色顆粒為陽性。陽性細胞數<10%或無陽性著色為陰性，陽性細胞數≥10%為陽性。

1.4 統計學處理 應用SPSS 17.0軟件進行統計學分析。臨床病理特征間指標比較采用χ2檢驗，指標相關性采用Spearman等級相關分析。

2 結果

2.1 MTDH和c-myc蛋白在ESCC組織中的表達 78例ESCC中MTDH和c-myc蛋白均過表達，陽性率分別為71.79%和61.53%，MTDH在正常食管黏膜組織、高級別上皮內瘤變、ESCC組織中的陽性率分別為6.67%、70.00%和71.79%，c-myc蛋白陽性率分別為3.33%、65.00%、61.53%，組間比較差異有統計學意義(P<0.01)，MTDH和c-myc在上皮內瘤變組及ESCC組的表達遠遠高于正常食管黏膜組，差異有統計學意義(P<0.01)，而在上皮內瘤變與ESCC組間比較差異無統計學意義(P>0.05，表1)。

2.2 MTDH和c-myc蛋白表達與ESCC臨床病理特征的關系 78例ESCC組織中，MTDH蛋白表達僅與ESCC分化程度和淋巴結轉移相關，高分化者癌巢周邊瘤細胞強表達，低分化者彌漫強表達，分級越高陽性率越高(P<0.05)，而與患者性別、年齡、浸潤深度無關。c-myc蛋白在ESCC中的表達與MTDH相同，低分化者彌漫強表達(圖1～4)，c-myc在有淋巴結轉移、低分化、浸潤深的ESCC中表達高，差異有統計學意義(P<0.05)，MTDH和c-myc表達與患者年齡、性別無關(P>0.05，表2)。

2.3 ESCC中MTDH與c-myc蛋白表達的相關性 ESCC組織中MTDH蛋白表達與c-myc蛋白表達呈正相關(r=0.266，P<0.05，表3)。

3 討論

食管癌和其他惡性腫瘤一樣在多種致癌因素的作用下，部分組織細胞在基因水平上發生變化并失去原有的生長調控能力，從而出現異常增生。MTDH是近年發現的癌基因，MTDH基因定位于8q22染色體，包含12個外顯子和11個內含子，總長度為85 482 bp。MTDH通過調節多個信號轉導途徑以及相關基因的表達水平來促進腫瘤的形成。MTDH通過PI3K/AKT、NF-κB、Wnt/β-catenin等信號通路促進腫瘤的發生、發展，包括啟動腫瘤細胞的增殖與凋亡、增強腫瘤細胞的侵襲與轉移以及提高腫瘤細胞對化療藥物及放射線的耐受[3-5]。MTDH在正常組織中不表達或低表達，而在多種腫瘤中呈過表達[6-8]。本實驗顯示，MTDH在ESCC中陽性率為71.79%，高于癌旁正常食管黏膜組織(6.67%)，兩者相比差異有統計學意義(P<0.01)，而ESCC與高級別上皮內瘤變組間差異無統計學意義(P>0.05)，提示MTDH基因改變是ESCC發生的早期事件。其過表達在中低分化組中明顯高于高分化組，并與ESCC的淋巴結轉移相關(P<0.05)，提示MTDH表達與ESCC的發生、發展及轉移過程密切相關?？勺鳛樵u估ESCC惡性程度及轉移的指標之一。c-myc基因是myc基因家族的重要成員之一， myc基因參與細胞凋亡，與多種腫瘤的發生、發展有關[9-11]。雖然c-myc基因的確切功能尚未完全明確，但有研究表明c-myc蛋白是一種轉錄因子，當其不受調節過表達時，就會單獨或與其他因素協同引起細胞惡性轉化。本實驗中c-myc在高級別上皮內瘤變及ESCC組的陽性率(65.00%、61.53%)高于正常食管黏膜組(3.33%)，兩者差異有統計學意義(P<0.01)，提示c-myc基因異常表達與食管癌的形成有關。實驗結果亦顯示c-myc在有淋巴結轉移、分化差、浸潤深的ESCC中表達高，差異有統計學意義(P<0.05)，提示c-myc基因異常表達可能與食管癌的分化、浸潤及轉移有關。

①②③④

圖1 c-myc在高分化食管鱗狀細胞癌中的表達，EnVision法 圖2 c-myc在低分化食管鱗狀細胞癌中的表達，EnVision法

圖3 MTDH在高分化食管鱗狀細胞癌中的表達，EnVision法 圖4 MTDH在低分化食管鱗狀細胞癌中的表達，EnVision法

表1 MTDH和c-myc在正常食管黏膜、高級別上皮內瘤變、鱗狀細胞癌組織中的表達

與正常食管黏膜組相比，*P<0.01；與高級別上皮內瘤變組相比，△P>0.05

表2 MTDH和c-myc蛋白表達與食管鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系

表3 MTDH和c-myc在食管鱗狀細胞癌組織中表達的相關性

在惡性腫瘤發生的癌基因研究中，許多學者提出了基因協同作用假說。他們認為在惡性腫瘤發生、發展和轉移的各階段，至少有2個或2個以上功能不同的異常激活的基因各自發揮不同作用，并在時間和空間上相互配合，協同促進細胞癌變。PI3K/AKT通路在調節MTDH表達方面起重要作用，MTDH是Ha-ras的下游目的基因，Ha-ras通過調節PI3K/AKT通路導致轉錄因子c-myc連接到MTDH啟動子區域的E-BOX盒上，從而誘導MTDH轉錄。MTDH反過來激活PI3K/AKT信號通路，進而在某些應激情況下能起到抗凋亡、保護正常細胞的作用。c-myc可以誘導MTDH轉錄，MTDH同樣也可以誘導c-myc表達，進一步增強致瘤作用[12-13]。本實驗ESCC組織中MTDH蛋白表達與c-myc蛋白表達呈正相關，提示兩者協同作用，共同參與ESCC的發生、發展、浸潤及轉移。通過聯合檢測MTDH和c-myc在ESCC組織中的表達及其生物學特性，了解各個指標之間的關聯性可為ESCC早期診斷、早期治療及判斷預后提供參考。

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山西省衛生廳科技攻關項目(2011043)

山西省腫瘤醫院病理科，太原 030013

楊宣琴，女，碩士，副主任醫師。E-mail: yxq6622@163.com 徐恩偉，男，碩士，副主任醫師，通訊作者。E-mail: xewcn@qq.com

時間：2017-6-20 11:18 網絡出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170620.1117.021.html

R 735.1

A

1001-7399(2017)06-0680-03

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.06.021

接受日期：2017-02-17